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DOI: 10.3791/55004-v
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This study focuses on quantifying transcript accumulation in specific cellular domains in maize. It highlights the importance of understanding gene expression differences at the leaf blade-sheath boundary and in lg1-R mutants compared to wild-type.
Muchos genes importantes para el desarrollo tienen patrones de expresión específicos de células o tejidos. En este artículo se describen experimentos de LM RNA-seq para identificar genes que se expresan diferencialmente en el límite de la hoja y la vaina del maíz y en mutantes lg1-R en comparación con el tipo salvaje. Las consideraciones experimentales discutidas aquí se aplican a los análisis transcriptómicos de otros fenómenos del desarrollo.
El objetivo general de este método es cuantificar la acumulación de transcripciones en células específicas o dominios celulares para que se puedan hacer comparaciones entre diferentes dominios o entre dominios equivalentes en muestras mutantes y de tipo salvaje. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en la biología del desarrollo, como cómo se especifican los dominios de los órganos o cómo las mutaciones específicas afectan la expresión génica. La principal ventaja de esta técnica es que la acumulación de transcripciones se puede cuantificar en dominios diminutos y definidos con precisión que son demasiado pequeños para ser diseccionados a mano.
Antes de comenzar este procedimiento, cultive pisos de plántulas de maíz en condiciones estándar hasta las dos semanas de edad. Para diseccionar los ápices de los brotes en las secciones laterales, primero extirpe una plántula justo debajo de la línea del suelo. Luego use una hoja de afeitar para quitar rodajas finas de la base del tallo hasta que se vea un óvalo de calma rodeado por una o dos hojas maduras.
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