Visualización y en proyección de imagen del Oligodendrocyte organelos en rebanadas de cerebro Organotypic mediante Virus Adeno-asociado y Microscopía Confocal

El objetivo general de esta transducción viral y registro de lapso de tiempo es visualizar el movimiento de las mitocondrias de oligodendrocitos en cortes de cerebro organotípicos. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de los oligodendrocitos. Por ejemplo, cómo los oligodendrocitos y sus orgánulos responden a los cambios en el entorno local. La principal ventaja de esta técnica es que proporciona información detallada sobre la estructura de los oligodendrocitos y la dinámica de los orgánulos en una preparación en la que todas las diferentes células cerebrales están presentes y los oligodendrocitos producen mielina compacta. Transducir oligodendrocitos en cultivos en rodajas al séptimo día in vitro. En primer lugar, extraiga 1,3 microlitros de AAV diluido por loncha. Asegúrese de que el exterior de la punta de la pipeta esté seco, sostenga la pipeta por encima de la corteza lo más cerca posible sin tocar el corte con la punta de la pipeta y empuje lentamente la solución fuera de la pipeta. Cuando la solución toque la rebanada, mueva la punta de la pipeta sobre la corteza para esparcir la solución por toda el área de la corteza. Una vez que se hayan transducido todas las rebanadas de un plato, regrese el plato a la incubadora y luego repita el proceso en los otros platos. Examine los cortes para ver la expresión de marcadores fluorescentes y tome imágenes de los cortes cuando los niveles de expresión de los marcadores fluorescentes sean suficientes y los cortes se vean saludables. Comience a configurar el baño de imágenes usando arcilla para modelar para unir las agujas de la jeringa dobladas a una 45