Name: Estudio In Vivo del metabolismo de glucosa en ratones alimentados con dieta alta en grasas mediante prueba de tolerancia a la glucosa Oral (OGTT) y prueba de tolerancia a insulina (ITT) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 13 s
Description: Aprende a realizar pruebas de tolerancia oral a la glucosa y de insulina en ratones con dieta alta en grasas para estudiar la resistencia a la insulina y el metabolismo in vivo.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Esta investigación fue apoyada por el fondo científico médico del alcalde de la ciudad de Viena y la Österreichische Gesellschaft für Laboratoriumsmedizin und Klinische Chemie.

Todos los métodos aquí descritos han sido aprobados por el cuidado Animal y uso de la Universidad médica de Viena y llevó a cabo según la Federación de europeo laboratorio animales ciencia asociaciones (personal). Tenga en cuenta que todos los procedimientos descritos en este protocolo sólo deben realizarse después de la aprobación institucional y gubernamental, así como por el personal que es técnicamente competente.
1. HFD-alimentó ratones
Nota: Mantenga todos los ratones C57BL/6J en un ciclo de luz/oscuridad de 12 h con libre acceso a alimentos y agua.
<ol><li>En 6 semanas de edad, lugar de ratones para 8-12 semanas en un HFD (40-60% calorías de grasa) para inducir a la obesidad, mientras se alimenta el magro grupo de control una dieta baja en grasa (LFD) (10% calorías de grasa).</li>
	<li>Determinar el peso corporal de los ratones sobre una base semanal. Las curvas de peso deben muestran patrones similares en ambos grupos, con una pendiente mayor en el grupo HFD-alimentó.</li>
</ol>2. USA
Nota: Si los puntos de tiempo de muestreo de sangre son elegidos durante OGTT cada 15 min, el experimento debe realizarse con un máximo de 15 ratones en paralelo, para tener al menos 1 minuto de tiempo de manipulación por ratón.
<ol><li>Preparativos en la víspera OGTT<ol>
<li>Transferir a los ratones en una jaula con ropa de cama fresca y rápida que durante la noche antes de la prueba (14 h), asegurando que los ratones tengan acceso a agua potable (por ejemplo, retirar los alimentos en 18:00 para un tiempo de inicio en la mañana siguiente a las 8:00). Nota: Ratones de ayuno durante la noche es el acercamiento estándar, sin embargo un ayuno corto (5-6 h) es más fisiológico para los ratones (véase la discusión para más detalles).</li>
	</ol></li>
	<li>Preparaciones en el día del experimento (pero antes del experimento)<ol>
<li>Preparar 10 mL de solución glucosa al 20% (disolver D-(+)-glucosa en agua destilada). Nota: Todos los reactivos que se administran a los animales deben ser grado farmacológico y estéril.</li>
		<li>Preparar una placa de 96 pocillos para colección de plasma, llenando un pozo para cada punto del tiempo de muestreo y cada ratón con 5 μl NaEDTA (0,5 M de EDTA, pH 8.0 en 0.9% NaCl, almacenamiento a temperatura ambiente). Durante el experimento, guarde esta placa de hielo. Nota: Ver complementarios figura 1 para una lista detallada.</li>
	</ol></li>
	<li>Medir el peso corporal de todos los ratones y su cola la marca con un rotulador permanente para hacer los ratones fácilmente reconocibles (por ejemplo, dash de ratón 1 = 1, guiones de ratón 2 = 2, etc.).</li>
	<li>Medición de glucosa y tomar muestras de sangre (figura 2)<ol>
<li>Cuidadosamente corte 1-2 mm de la punta de la cola con unas tijeras afiladas ("variante A" en la figura 2). Siempre limpie la primera gota de sangre para evitar la hemólisis o contaminación con fluido de tejido antes de tomar muestras de sangre para determinación de glucosa de la sangre. Extraer una pequeña muestra de sangre (aproximadamente 3 μL) para medir el nivel de glucosa en sangre basal (= momento 0) con el glucómetro. PRECAUCIÓN: Compruebe y ajuste la cantidad de carga de las tiras reactivas en un glucómetro. Nota: Como un método de muestreo alternativo sangre, nick la vena lateral de la cola de un ratón con una hoja de bisturí afilado ("variante B" en la figura 2). La vena lateral de la cola se accede generalmente a aproximadamente un tercio a lo largo de la longitud de la cola de la punta de la cola, moviéndose hacia la base de la cola para muestras múltiples. Se recomienda el uso de una crema de anestesia local. Detener el flujo de sangre aplicando presión con el dedo sobre el tejido blando de al menos 30 s antes de regresa el animal a su jaula.</li>
		<li>Recoger una muestra de sangre (alrededor de 30 μL) mediante un tubo capilar fresco (mantener la horizontal del tubo capilar). Vacíe el tubo capilar mediante una pipeta poniendo la punta de la pipeta en la parte superior del extremo del tubo capilar y con cuidado empujar la sangre recogida en un pocillo de la placa de 96 pocillos, evitando burbujas de aire. Repita este procedimiento para todos los ratones - uno a la vez. Nota: Como alternativa para recolección de sangre a través de un tubo capilar, utilice una pipeta ajustada al volumen correcto (por ejemplo, 30 μL) para recoger la sangre, o recoger una gota de sangre de la cola en la película de parafina y pipeta lo en la solución de EDTA. Estrictamente evitar el contacto de la jalea de petróleo con sangre o glucómetro Optium, como pueden influir en las mediciones sucesivas de glucosa e insulina. PRECAUCIÓN: La OGTT es muy estresante para los ratones: ratones magras pueden perder alrededor de 15% de su peso corporal durante un ayuno nocturno. Además, la muestra de sangre en diferentes puntos temporales conduce a una pérdida considerable de sangre. Para el muestreo de sangre más fácil, es posible Masajear cuidadosamente la mouse-tail con vaselina. Nota: Las directrices pueden limitar la cantidad permisible de sangre recogido dentro de un período determinado. Los volúmenes de muestreo y puntos de tiempo deben ajustarse para no exceder los máximos permitidos. El peso corporal de los ratones pueden usarse para calcular el total retiro permitido de la sangre.</li>
	</ol></li>
	<li>Calcular el volumen requerido de solución de glucosa basada en peso corporal (1 g glucosa/kg de peso corporal, esta puede incrementarse hasta 3 g/kg) al ser administrado por sonda oral para cada ratón. Por ejemplo, un ratón con un peso de 30 g tendría 150 μL de una solución de glucosa 20% administrar 30 mg de glucosa. Nota: A la base de la dosis de glucosa en el peso del ratón es el procedimiento estándar. Si se dispone de datos de la composición corporal, la dosis de glucosa OGTT debe ser calculado basado en la magra masa corporal (ver la discusión para más detalles).</li>
	<li>Administración de glucosa<ol>
<li>Preparación de everythingthat es necesario durante el experimento entero por adelantado (temporizador, hoja de registro del experimento, glucosa monitor y tiras, tubos capilares, jeringas, solución de glucosa, placa de 96 pocillos, bisturí, calculadora, balanza, marcador permanente, papeles de banco, una pipeta con una punta y guantes).</li>
		<li>Para el uso de glucosa, refrena el ratón agarrando firmemente por el pescuezo. Aplique suficiente firmeza a la piel alrededor del cuello para evitar que el ratón de una torsión de la refrena y correctamente incline su cabeza hacia atrás. También asegúrese de que el ratón pueda respirar correctamente. Nota: Una vez iniciada la administración de glucosa, administración del tiempo es muy importante.</li>
		<li>Administrar con cuidado la solución de glucosa (basada en paso 2.5) directamente en el estómago con una aguja de alimentación. Directo con cuidado la aguja de alimentación a través de la boca hacia el esófago. Permitir que el ratón para tragar la aguja: la aguja se hunde totalmente en la parte inferior del esófago/estómago del ratón. Luego inyectar la solución de glucosa (figura 3a).<ol>
<li>Si encuentra alguna resistencia, o si el animal lucha inmediatamente, retire la aguja y vuelva a colocarlo. Iniciar el temporizador inmediatamente después de la primera sonda nasogástrica y administrar glucosa a otros ratones en intervalos de 1 minuto. Nota: Puede ser útil aplicar una gota de solución de glucosa directamente de la alimentación de la aguja a la boca del ratón, que estimulará la lamer y tragar, facilitando así el facilitar la inserción de la aguja de alimentación. No aplique presión al insertar la aguja de alimentación como esto puede dañar seriamente el animal.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>Después de 15 minutos, medir niveles de glucosa en sangre con el glucómetro y además tomar muestras de sangre (30 μL) (como se describe en detalle en el paso 2.4) de cada ratón en el mismo orden como fueron inyectados. Nota: La gestión del tiempo es muy importante; seguir tan de cerca como sea posible utilizando los mismos intervalos de tiempo en cuanto a la sonda nasogástrica. Que los ratones mover tan libremente como sea posible y el límite de restricción al mínimo durante todo el procedimiento para reducir el estrés, que puede modificar los resultados. Leche la cola con una mano y recoger la sangre con la otra.</li>
	<li>Repita el paso 2.7 en momentos seleccionados dependiendo de los resultados esperados (p. ej., a 30, 45, 60, 90, 120, 150 y 180 min después de la administración de glucosa). Si los puntos de tiempo son más de 120 min, asegúrese de que los ratones tengan acceso a agua potable. Asegúrese de que los ratones tengan siempre acceso a agua potable. Cuando haya terminado el experimento, retomar los ratones sus jaulas hogar equipados con alimentos y agua. PRECAUCIÓN: La OGTT es muy agotador para los ratones. Por lo tanto, esperar al menos 1 semana antes de realizar la siguiente prueba metabólica, como un ITT.</li>
	<li>Después del experimento, centrifugar las muestras de sangre a 2.500 x g, 30 min, 4 ° C. Transferir el sobrenadante (plasma) para vaciar los pozos de la placa y almacenarlo a-20 ° C hasta su análisis.<ol>
<li>Grabar la hemólisis de las muestras si está presente (ver sección 3).</li>
	</ol></li>
	<li>Determinar los niveles de la insulina del plasma utilizando un ELISA disponible comercialmente kit (véase la Tabla de materiales) siguiendo las instrucciones del fabricante del kit. Nota: Dependiendo del estado de ayuno, así como en el metabolismo de los ratones investigados, pueden surgir dificultades durante este análisis: los niveles de insulina de ayuno durante la noche (momento 0) son muy bajos y por lo tanto cerca del límite de detección. Para evitar este problema, doblar la cantidad de volumen plasmático recomendada y por consiguiente reducir el resultado de la prueba de ELISA. Por otro lado, si ratones alcanzan el pico de insulina durante OGTT, especialmente en los ratones alimentados de HFD, los niveles de insulina pueden exceder el límite de detección: diluir la muestra (por ejemplo, 10 veces con 0.9% NaCl) y repetir el ensayo de ELISA. Hemólisis en muestras de plasma puede conducir a la degradación de la insulina, resultando en una disminución de los valores de lectura. La degradación depende de tiempo, la temperatura y la concentración de hemoglobina en la muestra. Siempre mantenga las muestras hemolizadas fría o con hielo para reducir la degradación de insulina.</li>
</ol>3. ITT
Nota: Las mismas precauciones descritas para OGTT (manejo de ratones, sangre, glucómetro y uso de la jalea de petróleo) también deban aplicarse cuando se realiza la ITT. Por ejemplo, todas las inyecciones deben llevarse a cabo dentro de 15 min en intervalos de 1 minuto si 15 ratones son probados en paralelo. Para la ITT, la posterior recogida de muestras de sangre con tubos capilares es opcional.
<ol><li>Preparativos antes del experimento<ol>
<li>Ayunar a ratones durante al menos 2 h antes de la inyección de insulina, asegurando que los ratones tengan acceso a agua potable (por ejemplo, eliminar alimentos en 8:00, ratones de prueba 2-5 h más tarde).</li>
		<li>Diluir 1:1,000 de insulina en 0.9% NaCl (Stock: 100 insulina U/mL; trabajo concentración 0.1 U/mL) y preparar 20% glucosa (D-(+)-solución de glucosa disuelta en agua destilada) administrará si los ratones llegan a ser hipoglucémicos. Nota: La ITT se realiza generalmente después de un corto ayuno para evitar la hipoglucemia que puede ocurrir lo contrario en la noche los animales en ayunas. Todos los reactivos que se administran a los animales deben ser grado farmacológico y estéril.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Medir el peso corporal de los ratones, marcar la cola, cortar la punta de la cola con unas tijeras afiladas y medir niveles de glucosa en sangre basal como se describe anteriormente para el SOG en el paso 2.4.</li>
	<li>Inyección de insulina<ol>
<li>Para inyectar insulina intraperitoneal (0,75 U insulina/kg de peso corporal, calculada previamente), refrenar el ratón por el método de pescuezo.</li>
		<li>Utilizar un estilo fresco, estéril 27 o 30 calibre aguja para cada animal evitar la incomodidad y el riesgo de infección de cualquier sitio de la inyección. Nota: La esterilización de la piel puede prolongar la duración de la administración de insulina y así puede causar disturbios adicionales al animal. Por lo tanto, no se recomienda.</li>
		<li>Incline la cabeza de ratón hacia abajo en un ángulo ligero para exponer el lado ventral del animal. Coloque la aguja con el bisel hacia arriba y un ángulo de 30 ° en el cuadrante inferior derecho del abdomen del animal (figura 3b). Iniciar el temporizador inmediatamente después de inyecta el primer ratón. Nota: Servicio de dosis bajas (0.1 U/kg) puede realizarse para evaluar específicamente la sensibilidad a la insulina hepática. En cuanto a la OGTT, calcular el volumen de inyección basado en el peso corporal es el procedimiento estándar, basándose en la dosis en corporal magra masa es preferible si se dispone de datos de la composición corporal.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Los niveles de glucosa en la sangre medida en puntos de tiempo seleccionado (por ejemplo, después de 15, 30, 45, 60 y 90 min). Nota: Como la insulina tiene un corto tiempo de ~ 10 min en ratones13, diferencias finales después de la administración de insulina (p. ej., después de 2 h) no pueden reflejar un efecto directo de la acción de la insulina. Administrar solución glucosa al 20% en caso de un ratón hipoglicémico (niveles por debajo de 35 mg/dL de glucosa en la sangre) y está en riesgo de morir.</li>
	<li>Después de la última vez puntos, coloque los ratones en sus jaulas hogar preparados con un montón de comida y agua.</li>
</ol>

<ol><li>Qatanani, M., Lazar, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+obesity-associated+insulin+resistance%3A+many+choices+on+the+menu%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of obesity-associated insulin resistance: many choices on the menu.</a> Genes Dev. 21 (12), 1443-1455 (2007).</li>
<li>Wilcox, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+and+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Biochem+Rev%22%5BJournal%5D)">Insulin and insulin resistance.</a> Clin Biochem Rev. 26 (2), 19-39 (2005).</li>
<li>Reaven, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathophysiology+of+insulin+resistance+in+human+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Pathophysiology of insulin resistance in human disease.</a> Physiol Rev. 75 (3), 473-486 (1995).</li>
<li>Kahn, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+2+diabetes%3A+when+insulin+secretion+fails+to+compensate+for+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Type 2 diabetes: when insulin secretion fails to compensate for insulin resistance.</a> Cell. 92 (5), 593-596 (1998).</li>
<li>Gregor, M. F., Hotamisligil, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+mechanisms+in+obesity%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Inflammatory mechanisms in obesity.</a> Annu Rev Immunol. 29, 415-445 (2011).</li>
<li>Odegaard, J. I., Chawla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pleiotropic+actions+of+insulin+resistance+and+inflammation+in+metabolic+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Pleiotropic actions of insulin resistance and inflammation in metabolic homeostasis.</a> Science. 339 (6116), 172-177 (2013).</li>
<li>Srinivasan, K., Ramarao, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+in+type+2+diabetes+research%3A+an+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+J+Med+Res%22%5BJournal%5D)">Animal models in type 2 diabetes research: an overview.</a> Indian J Med Res. 125 (3), 451-472 (2007).</li>
<li>Surwit, R. S., Kuhn, C. M., Cochrane, C., McCubbin, J. A., Feinglos, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diet-induced+type+II+diabetes+in+C57BL%2F6J+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Diet-induced type II diabetes in C57BL/6J mice.</a> Diabetes. 37 (9), 1163-1167 (1988).</li>
<li>Winzell, M. S., Ahren, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+high-fat+diet-fed+mouse%3A+a+model+for+studying+mechanisms+and+treatment+of+impaired+glucose+tolerance+and+type+2+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">The high-fat diet-fed mouse: a model for studying mechanisms and treatment of impaired glucose tolerance and type 2 diabetes.</a> Diabetes. 53, Suppl 3. S215-S219 (2004).</li>
<li>Ayala, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standard+operating+procedures+for+describing+and+performing+metabolic+tests+of+glucose+homeostasis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Standard operating procedures for describing and performing metabolic tests of glucose homeostasis in mice.</a> Dis Model Mech. 3 (9-10), 525-534 (2010).</li>
<li>Jais, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heme+oxygenase-1+drives+metaflammation+and+insulin+resistance+in+mouse+and+man%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Heme oxygenase-1 drives metaflammation and insulin resistance in mouse and man.</a> Cell. 158 (1), 25-40 (2014).</li>
<li>Teperino, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hedgehog+partial+agonism+drives+Warburg-like+metabolism+in+muscle+and+brown+fat%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Hedgehog partial agonism drives Warburg-like metabolism in muscle and brown fat.</a> Cell. 151 (2), 414-426 (2012).</li>
<li>Cresto, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Half+life+of+injected+125I-insulin+in+control+and+ob%2Fob+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiol+Lat+Am%22%5BJournal%5D)">Half life of injected 125I-insulin in control and ob/ob mice.</a> Acta Physiol Lat Am. 27 (1), 7-15 (1977).</li>
<li>First report of the BVA/FRAME/RSPCA/UFAW joint working group on refinement. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Removal+of+blood+from+laboratory+mammals+and+birds%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Removal of blood from laboratory mammals and birds.</a> Lab Anim. 27 (1), 1-22 (1993).</li>
<li>McGuill, M., Rowan, A. <a target="_blank" href="https://academic.oup.com/ilarjournal/article/31/4/5/655393/Biological-Effects-of-Blood-Loss-Implications-for">Biological Effects of Blood Loss: Implications for Sampling Volumes and Techniques.</a> ILAR. 31 (4), 5-18 (1989).</li>
<li>Hoff, J. <a target="_blank" href="http://www.osa.sunysb.edu/dlar/newitems/mouseblood.pdf">Methods of Blood Collection in the Mouse.</a> Lab Animal. 29 (10), 47-53 (2000).</li>
<li>NIH. National Institute of Health - Guidelines for Survival Bleeding of Mice and Rats. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://oacu.od.nih.gov/ARAC/survival.pdf">http://oacu.od.nih.gov/ARAC/survival.pdf</a> (2017).</li>
<li>Jacobson, L., Ansari, T., McGuinness, O. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Counterregulatory+deficits+occur+within+24+h+of+a+single+hypoglycemic+episode+in+conscious%2C+unrestrained%2C+chronically+cannulated+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Counterregulatory deficits occur within 24 h of a single hypoglycemic episode in conscious, unrestrained, chronically cannulated mice.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 290 (4), E678-E684 (2006).</li>
<li>Guariguata, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+estimates+of+diabetes+prevalence+for+2013+and+projections+for+2035%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Res+Clin+Pract%22%5BJournal%5D)">Global estimates of diabetes prevalence for 2013 and projections for 2035.</a> Diabetes Res Clin Pract. 103 (2), 137-149 (2014).</li>
<li>Freeman, H. C., Hugill, A., Dear, N. T., Ashcroft, F. M., Cox, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deletion+of+nicotinamide+nucleotide+transhydrogenase%3A+a+new+quantitive+trait+locus+accounting+for+glucose+intolerance+in+C57BL%2F6J+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Deletion of nicotinamide nucleotide transhydrogenase: a new quantitive trait locus accounting for glucose intolerance in C57BL/6J mice.</a> Diabetes. 55 (7), 2153-2156 (2006).</li>
<li>Pelleymounter, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+the+obese+gene+product+on+body+weight+regulation+in+ob%2Fob+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Effects of the obese gene product on body weight regulation in ob/ob mice.</a> Science. 269 (5223), 540-543 (1995).</li>
<li>Chen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+that+the+diabetes+gene+encodes+the+leptin+receptor%3A+identification+of+a+mutation+in+the+leptin+receptor+gene+in+db%2Fdb+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Evidence that the diabetes gene encodes the leptin receptor: identification of a mutation in the leptin receptor gene in db/db mice.</a> Cell. 84 (3), 491-495 (1996).</li>
<li>Rossini, A. A., Like, A. A., Dulin, W. E., Cahill, G. F. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+beta+cell+toxicity+by+streptozotocin+anomers%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Pancreatic beta cell toxicity by streptozotocin anomers.</a> Diabetes. 26 (12), 1120-1124 (1977).</li>
<li>Bailey, C. J., Flatt, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hormonal+control+of+glucose+homeostasis+during+development+and+ageing+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Metabolism%22%5BJournal%5D)">Hormonal control of glucose homeostasis during development and ageing in mice.</a> Metabolism. 31 (3), 238-246 (1982).</li>
<li>Shi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sexually+different+actions+of+leptin+in+proopiomelanocortin+neurons+to+regulate+glucose+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Sexually different actions of leptin in proopiomelanocortin neurons to regulate glucose homeostasis.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 294 (3), E630-E639 (2008).</li>
<li>Collins, S., Martin, T. L., Surwit, R. S., Robidoux, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+vulnerability+to+diet-induced+obesity+in+the+C57BL%2F6J+mouse%3A+physiological+and+molecular+characteristics%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">Genetic vulnerability to diet-induced obesity in the C57BL/6J mouse: physiological and molecular characteristics.</a> Physiol Behav. 81 (2), 243-248 (2004).</li>
<li>Heijboer, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sixteen+hours+of+fasting+differentially+affects+hepatic+and+muscle+insulin+sensitivity+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Sixteen hours of fasting differentially affects hepatic and muscle insulin sensitivity in mice.</a> J Lipid Res. 46 (3), 582-588 (2005).</li>
<li>Kohsaka, A., Bass, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+sense+of+time%3A+how+molecular+clocks+organize+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">A sense of time: how molecular clocks organize metabolism.</a> Trends Endocrinol Metab. 18 (1), 4-11 (2007).</li>
<li>Drucker, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incretin+action+in+the+pancreas%3A+potential+promise%2C+possible+perils%2C+and+pathological+pitfalls%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Incretin action in the pancreas: potential promise, possible perils, and pathological pitfalls.</a> Diabetes. 62 (10), 3316-3323 (2013).</li>
<li>Andrikopoulos, S., Blair, A. R., Deluca, N., Fam, B. C., Proietto, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+the+glucose+tolerance+test+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Evaluating the glucose tolerance test in mice.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 295 (6), E1323-E1332 (2008).</li>
<li>Ahren, B., Winzell, M. S., Pacini, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+augmenting+effect+on+insulin+secretion+by+oral+versus+intravenous+glucose+is+exaggerated+by+high-fat+diet+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">The augmenting effect on insulin secretion by oral versus intravenous glucose is exaggerated by high-fat diet in mice.</a> J Endocrinol. 197 (1), 181-187 (2008).</li>
<li>Bowe, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+phenotyping+guidelines%3A+assessing+glucose+homeostasis+in+rodent+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Metabolic phenotyping guidelines: assessing glucose homeostasis in rodent models.</a> J Endocrinol. 222 (3), G13-G25 (2014).</li>
<li>Arioli, V., Rossi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Errors+related+to+different+techniques+of+intraperitoneal+injection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Errors related to different techniques of intraperitoneal injection in mice.</a> Appl Microbiol. 19 (4), 704-705 (1970).</li>
<li>Miner, N. A., Koehler, J., Greenaway, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraperitoneal+injection+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Intraperitoneal injection of mice.</a> Appl Microbiol. 17 (2), 250-251 (1969).</li>
<li>Heikkinen, S., Argmann, C. A., Champy, M. F., Auwerx, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+glucose+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Mol+Biol.+Chapter%22%5BJournal%5D)">Evaluation of glucose homeostasis.</a> Curr Protoc Mol Biol. Chapter. , Chapter 29 Unit 29B 23(2007).</li>
<li>Muniyappa, R., Lee, S., Chen, H., Quon, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+approaches+for+assessing+insulin+sensitivity+and+resistance+in+vivo%3A+advantages%2C+limitations%2C+and+appropriate+usage%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Current approaches for assessing insulin sensitivity and resistance in vivo: advantages, limitations, and appropriate usage.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 294 (1), E15-E26 (2008).</li>
<li>McGuinness, O. P., Ayala, J. E., Laughlin, M. R., Wasserman, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NIH+experiment+in+centralized+mouse+phenotyping%3A+the+Vanderbilt+experience+and+recommendations+for+evaluating+glucose+homeostasis+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">NIH experiment in centralized mouse phenotyping: the Vanderbilt experience and recommendations for evaluating glucose homeostasis in the mouse.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 297 (4), E849-E855 (2009).</li>
<li>Pacini, G., Omar, B., Ahren, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+and+models+for+metabolic+assessment+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Diabetes+Res%22%5BJournal%5D)">Methods and models for metabolic assessment in mice.</a> J Diabetes Res. 2013, 986906(2013).</li>
<li>Polonsky, K. S., Rubenstein, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C-peptide+as+a+measure+of+the+secretion+and+hepatic+extraction+of+insulin.+Pitfalls+and+limitations%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">C-peptide as a measure of the secretion and hepatic extraction of insulin. Pitfalls and limitations.</a> Diabetes. 33 (5), 486-494 (1984).</li>
<li>Hughey, C. C., Wasserman, D. H., Lee-Young, R. S., Lantier, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Approach+to+assessing+determinants+of+glucose+homeostasis+in+the+conscious+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Mamm+Genome%22%5BJournal%5D)">Approach to assessing determinants of glucose homeostasis in the conscious mouse.</a> Mamm Genome. 25 (9-10), 522-538 (2014).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Con la alta prevalencia de diabetes y enfermedades asociadas en la población mundial, hay una necesidad para la investigación abordando el mecanismo molecular, prevención y tratamiento de la enfermedad19. El protocolo presentado describe métodos bien establecidos para la generación de ratones HFD, un robusto modelo animal utilizado para la investigación metabólica, así como la conducción de la OGTT y ITT, que son potentes herramientas para la evaluación de las alteraciones metabólicas de todo el c...

En los países desarrollados, la obesidad y la diabetes alcanzaron dimensiones epidémicas debido a la inactividad física y el consumo excesivo de alimentos procesados, efectos que son conducidos por la rápida urbanización, industrialización y globalización. Aunque investigación en resistencia a la insulina y sus comorbilidades, tales como hiperlipidemia y aterosclerosis, ha ganado importancia en las últimas décadas, los complejos mecanismos biológicos que regulan el metabolismo en la salud y la enfermedad siguen siendo incompleto entendido y todavía hay una necesidad urgente de nuevas modalidades de tratamiento prevenir y tratar estas enfermedades1.
Insulina y sus hormonas contador-reguladoras glucagón sirven como los principales reguladores del equilibrio oferta y macronutrientes energía celular, manteniendo así también sangre sistémica adecuada glucosa concentraciones2. Glucosa sí mismo actúa como uno de los principales estimuladores de la secreción de insulina por células β pancreáticas, mientras que otros macronutrientes, factores humorales como entrada neural más modificar esta respuesta. Insulina, en consecuencia, desencadena los procesos anabólicos del estado fed facilitando la difusión de glucosa en la sangre de exceso en la músculo y células gordas y además activando la glucólisis así como proteínas o síntesis de ácidos grasos, respectivamente. Además, insulina suprime la salida de glucosa hepática inhibiendo la gluconeogénesis. Consumo de energía de exceso crónico y meta-inflamación conducen a hiperinsulinemia y resistencia a la insulina periférica debido a la abajo-regulación de la expresión del receptor de insulina, así como alteraciones en las vías de señalización aguas abajo, lo que resulta en deterioro sensibilidad a la disposición de glucosa mediada por insulina, así como inhibición insuficiente de la glucosa hepática producción3,4,5,6.
Una amplia gama de modelos animales con inducción genética, nutricional o experimental de la enfermedad han demostrado para ser excelentes herramientas para el estudio de los mecanismos moleculares de resistencia a la insulina y varias formas de diabetes, así como sus enfermedades acompañantes7 . Un ejemplo es el modelo de ratón inducido por HFD ampliamente utilizado y bien establecida, que se caracteriza por el rápido aumento de peso debido al aumento de la ingesta dietético en combinación con la menor eficiencia metabólica, resultando en resistencia de insulina8, 9. tanto en modelos animales y humanos, una elevación en sangre glucosa y la insulina niveles en ayunas, así como una tolerancia deteriorada a la administración de glucosa son utilizados indicadores de resistencia a la insulina y otras alteraciones sistémicas de la glucosa metabolismo. Monitoreo glucosa e insulina niveles de sangre en el estado basal o tras estímulo son lecturas de fácil acceso.
El presente Protocolo describe la generación de ratones alimentados con HFD como dos métodos utilizados, la prueba de tolerancia oral a la glucosa (OGTT) y la prueba de resistencia de insulina (ITT), que son útiles para caracterizar el fenotipo metabólico e investigar alteraciones en el metabolismo de la glucosa. Describimos la OGTT detalladamente, que evalúa la eliminación de una secreción de insulina y carga de glucosa por vía oral con el tiempo. Además, ofrecemos instrucciones sobre cómo llevar a cabo la ITT para investigar la acción de la insulina corporal total mediante el control de la concentración de la glucosa de la sangre en respuesta a un bolo de insulina. Los protocolos descritos en este artículo están bien establecidos y se han utilizado en múltiples estudios10,11,12. Además de ligeras modificaciones que pueden ayudar a incrementar el éxito, les da las pautas para el diseño experimental y análisis de datos, así como consejos útiles evitar peligros potenciales. Los protocolos descritos pueden ser herramientas muy poderosas para investigar la influencia de la genéticas, farmacológicos, dieta y otros factores ambientales sobre el metabolismo de la glucosa de todo el cuerpo y sus enfermedades asociadas como resistencia a la insulina. Además de la estimulación con glucosa o insulina, puede utilizarse una variedad de otros compuestos para la estimulación según el propósito de la investigación individual. Aunque fuera del alcance de este manuscrito, muchas otras aplicaciones posteriores pueden realizarse en las muestras de sangre dibujada, como el análisis de sangre valores distintos de la glucosa y la insulina (p. ej., lípidos y lipoproteínas perfiles) así como toda Análisis de marcadores metabólicos (p. ej., reacción en cadena de la polimerasa (PCR) cuantitativa en tiempo real, análisis de Western blot y análisis genitals del Immunosorbent (ELISA)). Citometría de flujo más y fluorescencia activada célula clasificación (FACS) puede aplicarse para investigar los efectos en las poblaciones de la célula distinta, mientras que transcriptómicos, proteómicos y metabolómicos enfoques también pueden ser utilizados para el análisis no focalizados.
En general, proporcionamos un protocolo simple para generar un modelo de ratón inducido por HFD, mientras más describir dos enfoques de gran alcance para estudiar alteraciones metabólicas de todo el cuerpo, la usa y la ITT, que puede ser herramientas útiles para el estudio de la patogénesis de la enfermedad y el desarrollo de nuevas terapias, especialmente en el campo de enfermedades asociadas por el metabolismo como la resistencia a la insulina y diabetes.

<table><tbody><tr><td>Cepa de ratón: C57BL/6J</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>664</td><td>LFD/HFD</td></tr><tr><td>Accu Chek Performa - Ggluómetro</td><td>Roche</td><td></td><td>6870228 OGTT/ITT</td></tr><tr><td>Accu Chek Performa - Tiras</td><td>Roche</td><td>6454038</td><td>OGTT/ITT</td></tr><tr><td>D-(+)-Solución de glucosa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8769</td><td>OGTT</td></tr><tr><td>Actrapid - Insulina</td><td>Novo Nordisk</td><td>417642</td><td>ITT</td></tr><tr><td>Agujas de alimentación reutilizables</td><td>Fine Science Tools</td><td>#18061-22</td><td>OGTT; calibre 22 (calibre -24 para ratones jóvenes)</td></tr><tr><td>Jeringas dosificadoras Omnifix-Fine</td><td>Braun</td><td>9161406V</td><td>OGTT/ITT</td></tr><tr><td>Sterican Aguja de insulina (30G x 1/3"; &oslash; 0.30 x 13 mm)</td><td>Braun</td><td>304000</td><td>ITT; ratones delgados</td></tr><tr><td>Sterican (G 27 x 3/4"; &oslash; 0.40 x 20 mm)&nbsp; &nbsp;</td><td>Braun</td><td></td><td>4657705 ITT; ratones en placas de</td></tr><tr><td>PCR HFD de 96 pocillos, sin faldón, flexibles</td><td>Braintree Scientific, Inc.</td><td>SP0016</td><td>OGTT</td></tr><tr><td>Kit ELISA de insulina de ratón ultrasensible</td><td>Crystam Chem</td><td>90080</td><td>OGTT</td></tr><tr><td>Dieta para roedores con 60% kcal% grasa</td><td>Research Diets Inc</td><td>D12492</td><td>ratones en HFD</td></tr><tr><td>Dieta para roedores con 10% kcal% grasa.</td><td>Research Diets Inc</td><td>D12450B</td><td>ratones en la marca LFD</td></tr><tr><td>micro hematocrito capilar</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>BR749321</td><td>OGTT/ITT</td></tr><tr><td>Vaselina - crème</td><td>Riviera</td><td>P1768677</td><td>OGTT/ITT</td></tr></tbody></table>

estudio in vivo del metabolismo de glucosa en ratones alimentados con dieta alta en grasas mediante prueba de tolerancia a la glucosa oral (ogtt) y prueba de tolerancia a insulina (itt)

Study of In Vivo Glucose Metabolism in High-fat Diet-fed Mice Using Oral Glucose Tolerance Test (OGTT) and Insulin Tolerance Test (ITT)

La obesidad representa el más importante factor de riesgo en la patogenia de la diabetes tipo 2, una enfermedad que se caracteriza por una resistencia a la captación de glucosa estimulada por insulina y una descompensación grave del metabolismo de la glucosa sistémica. A pesar de progresos considerables en la comprensión del metabolismo de la glucosa, los mecanismos moleculares de la regulación en salud y la enfermedad siguen bajo investigación, mientras que se necesitan urgentemente nuevos enfoques para prevenir y tratar la diabetes. Dieta derivada de la glucosa estimula la secreción pancreática de insulina, que sirve como el principal regulador de los procesos anabólicos celulares durante el estado de alimentación y así equilibra la glucosa en la sangre los niveles para mantener la condición de energía sistémica. Sobrealimentación disparadores meta-inflamación crónica, que conduce a alteraciones en la insulina periférica asociado a receptor de señalización y por lo tanto reduce la sensibilidad a la disposición de glucosa mediada por insulina. Estos eventos resultan en elevados de glucosa en ayunas y los niveles de insulina así como una reducción en la tolerancia a la glucosa, que a su vez sirven como indicadores importantes de resistencia a la insulina. Aquí, presentamos un protocolo para la generación y caracterización metabólica de la dieta alta en grasas (HFD)-alimentó ratones como modelo frecuente de resistencia a la insulina inducida por la dieta. Ilustramos detalladamente la prueba de tolerancia oral a la glucosa (OGTT), que supervisa la disposición periférica de una secreción de insulina y carga de glucosa por vía oral con el tiempo. Además, presentamos un protocolo para la prueba de tolerancia a insulina (ITT) supervisar la acción de la insulina de todo el cuerpo. Estos métodos y sus aplicaciones posteriores constituyen herramientas poderosas para caracterizar el fenotipo metabólico general de ratones, así como para evaluar específicamente alteraciones en el metabolismo de la glucosa. Pueden ser especialmente útiles en el campo de investigación amplio de resistencia a la insulina, diabetes y obesidad para proporcionar una mejor comprensión de la patogenia, así como para probar los efectos de las intervenciones terapéuticas.

La figura 1 muestra un esquema horario para fenotipado metabólico de ratones con una dieta. En una edad de aproximadamente 6 semanas, los ratones deben colocarse en un HFD, mientras que un grupo de LFD puede servir como el grupo de control. Lo importante, peso corporal deberá determinarse semanalmente para observar si hay un aumento esperado en el peso corporal. Cualquier tipo de estrés (p. ej., ruido o comportamiento agresivo del macho) puede interf...

El actual artículo describe la generación y caracterización metabólica de ratones alimentados con dieta alta en grasas como un modelo de resistencia a la insulina inducida por la dieta y la obesidad. Además cuenta con protocolos detallados para realizar la prueba de tolerancia oral a la glucosa y la prueba de tolerancia a insulina, monitoreo de todo el cuerpo alteraciones del metabolismo de la glucosa en vivo.

Estudio In Vivo del metabolismo de glucosa en ratones alimentados con dieta alta en grasas mediante prueba de tolerancia a la glucosa Oral (OGTT) y prueba de tolerancia a insulina (ITT)

Obesity represents the most important single risk factor in the pathogenesis of type 2 diabetes, a disease which is characterized by a resistance to ...

El objetivo general de estos procedimientos es caracterizar el fenotipo metabólico general de ratones y evaluar específicamente las alteraciones en el metabolismo de la glucosa in vivo. Estos métodos pueden ayudar a responder preguntas clave en el campo del metabolismo. Son herramientas representativas y poderosas para investigar la influencia de factores genéticos, farmacológicos o dietéticos en el metabolismo de la glucosa in vivo.La principal ventaja de estas técnicas es que son relativamente fáciles de realizar. El día antes de la prueba de tolerancia oral a la glucosa, transfiera a los ratones a una jaula con ropa de cama fresca y agua potable, pero sin comida para ayunarlos durante la noche antes de la prueba. Al día siguiente, prepare 10 mililitros de solución de glucosa al 20% diluyendo 45%D-glucosa en agua destilada.A continuación, prepare una placa para la recolección de plasma añadiendo cinco microlitros de EDTA sódico por punto de tiempo para cada ratón a los pocillos de una placa de 96 pocillos. Durante el experimento, guarde este plato en hielo. A continuación, mida el peso corporal de todos los ratones y marque sus colas con un marcador permanente para que los ratone

study-vivo-glucose-metabolism-high-fat-diet-fed-mice-using-oral

Research

Investigación

JoVE Journal

Medicine

Medicina

El clamp hiperinsulinémico euglucémico, o una pinza de insulina, es el estándar de oro para evaluar la acción de la...

Hiperinsulinémico euglucémico abrazaderas en ratones conscientes, sin freno

Este video presenta cómo realizar una prueba de tolerancia oral a la glucosa en un ratón de laboratorio.

Prueba de tolerancia oral a la glucosa (OGTT): medición del metabolismo de la glucosa en ratones

El objetivo de este protocolo es presentar un método estándar para realizar pruebas de tolerancia a la glucosa por vía intravenosa (IVGTTs) para evaluar el control glucémico en los primates no humanos y evaluar su estado metabólico de ser saludables para dismetabólico.

Caracterización del estado metabólico en primates no humanos con la prueba de tolerancia a la glucosa intravenosa

Este protocolo estudia el papel de la quimiocina ligando de (motivo C-C) 5 (CCL5) en el hipotálamo mediante la entrega de un antagonista, CCL5 Met, en el cerebro de ratón utilizando un sistema de infusión de cerebro de bomba micro-osmótico. Esta inhibición transitoria de la actividad CCL5 interrumpido insulina hipotalámica señalización, conduce a la intolerancia a la glucosa y sensibilidad a la insulina sistémica periférica.

Estudio de la señal de insulina hipotalámica a la intolerancia de la glucosa periférica con un sistema de infusión continua de medicamentos en el cerebro de ratón

La incidencia de la obesidad está aumentando y aumenta el riesgo de enfermedades pulmonares crónicas. Establecer los mecanismos subyacentes y estrategias preventivas, el animal bien definido son necesarios modelos. Presentamos tres métodos (prueba de tolerancia a la glucosa, pletismografía corporal y fijación del pulmón) para estudiar el efecto de la obesidad sobre los resultados de pulmonares en ratones.

Prueba de tolerancia a glucosa intraperitoneal, medición de función pulmonar y la fijación del pulmón para estudiar el impacto de la obesidad y metabolismo deteriorado de resultados pulmonares

En este estudio, describimos un sistema en la ovo como una herramienta prometedora para probar compuestos de insulina-mimético en un organismo vivo. Las principales ventajas incluyen velocidades de rendimiento adecuados y los costos aceptables, que permitan la identificación de sustancias fitoquímicas con propiedades insulina-mimético.

Un modelo de Ovo para probar compuestos de insulina-mimético

Este protocolo describe el uso de un analizador de composición corporal y el sistema metabólico de control animal para caracterizar la composición corporal y parámetros metabólicos en ratones. Un modelo de obesidad inducido por la alimentación alta en grasas se utiliza como un ejemplo para la aplicación de estas técnicas.

Composición corporal y análisis jaulas metabólico en ratones de reserva grasa alta

El artículo actual describe un protocolo detallado para el ayuno intermitente isocalórico 2:1 para proteger y tratar contra la obesidad y el metabolismo de la glucosa deteriorado en ratones de tipo salvaje y ob/ob.

Evaluación de los efectos metabólicos del ayuno intermitente isocalórico 2:1 en ratones

Este estudio describe la medición directa de la producción hepática de glucosa en un modelo de ratón con síndrome de ovario poliquístico mediante el uso de un trazador de glucosa isotópico estable a través de la vena de la cola en estados de ayuno y ricos en glucosa en tándem.

Evaluación de la producción hepática de glucosa en un modelo de ratón con síndrome de ovario poliquístico

Una pinza hiperglucémica se utiliza para medir la liberación de insulina con una concentración de glucosa en sangre más alta mantenida. Una pinza hipoglucémica sirve para medir la producción de glucosa inducida por respuestas contrarreguladoras. Ambos métodos utilizan el mismo procedimiento quirúrgico. En este trabajo se presenta una técnica de pinza para evaluar el metabolismo sistémico de la glucosa.

Pinza hiperglucémica y pinza hipoglucémica en ratones conscientes

Aprende a realizar pruebas de tolerancia oral a la glucosa y de insulina en ratones con dieta alta en grasas para estudiar la resistencia a la insulina y el metabolismo in vivo.

Estudio In Vivo del metabolismo de glucosa en ratones alimentados con dieta alta en grasas mediante prueba de tolerancia a la glucosa Oral (OGTT) y prueba de tolerancia a insulina (ITT) (Video) | JoVE Journal

Estudio In Vivo del metabolismo de glucosa en ratones alimentados con dieta alta en grasas mediante prueba de tolerancia a la glucosa Oral (OGTT) y prueba de tolerancia a insulina (ITT)

Explorar más videos