La sensibilidad de la membrana mitocondrial interna al Na+ revela grupos de CoQ funcionales parcialmente segmentados

Este protocolo destaca el papel del sodio como segundo mensajero y también muestra la existencia de piscinas de ubiquinol parcialmente diferenciadas. Esta técnica demuestra un enfoque extremadamente simple para el estudio de piscinas de ubiquinol que, de lo contrario, requiere modelos celulares muy específicos. Este enfoque se puede utilizar para el estudio de la transferencia de electrones en otras membranas, particularmente de enzimas dentro de las gotas de lípidos.

Divida las muestras en cuatro submuestras de 20 microgramos cada una y etiquételas de A a D.Divida las muestras A y B en dos submuestras de 10 microgramos cada una y etiquételas como A1, A2, B1 y B2. Prepare el búfer C1/C2 como se describe en el protocolo de texto y precaliente a 37 grados centígrados. En una cubeta de un mililitro, agregue cada una de las submuestras a 30 microlitros de citocromo c y 10 microlitros de malonato. Agregue un búfer C1 / C2 para aumentar el volumen a 980 microlitros en cubetas A1 y B1 y 979 microlitros en A2 y B2. Añadir 10 microlitros de cloruro de potasio un molar en las cubetas A1 y A2 y 10 microlitros de cloruro de sodio un molar en B1 y B2. Agregue un microlitro de rotenona de un milimolar en las cubetas A2 y B2. Justo antes de la medición, agregue 10 microlitros de NADH de 10 milimolares en todas las cubetas.