Name: La visualización de la función respiratoria mitocondrial utilizando citocromo C Oxidasa / Succinato Deshidrogenasa (COX / SDH) de doble etiquetado Histoquímica (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-11-23T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 53 s
Description: Aprende la técnica de doble marcaje COX/SDH para visualizar deficiencias enzimáticas respiratorias mitocondriales en tejidos congelados. Este método histoquímico permite diagnosticar enfermedades mitocondriales y estudiar trastornos relacionados con el envejecimiento.

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Este trabajo fue apoyado por el Instituto Nacional del Envejecimiento (AG04418), Instituto Nacional sobre Abuso de Drogas, Instituto Nacional de Salud-Karolinska Institutet Programa de Postgrado asociaciones, Karolinska Institutet, Consejo de Investigación sueco, el poder del cerebro de Suecia, y la Fundación Cerebro de Suecia. Muchas gracias a Mattias Karlen y el Dr. Giuseppe Coppotelli de apoyo creativo con la Figura 1 y 2, respectivamente; Karin Pernold de asistencia técnica, y los Dres. Barry J. Hoffer, Lars Olson, y Nils-Göran Larsson para muchos consejos útiles y la discusión.

1. Preparación de tejidos para muestras criostáticas <ol><li> El sacrificio del animal por dislocación cervical o decapitación, en conformidad con el permiso ético disponibles. </li><li> Rápidamente recoger tejidos de interés (por ejemplo. Cerebral) y la velocidad de congelación del hielo seco (tejidos puede requerir congelación en isopentano o propano refrigerado con nitrógeno líquido para obtener la morfología óptima). Tejidos almacenar en papel de aluminio a -80 ° C hasta que esté listo a la sección. </li><li> Insertar tejido congelado en la preparación de muestras criostáticas. </li><li> Recoger de 14 micras secciones congeladas a -21 ° C (puede ser necesario ajustar la temperatura de ± 2.1 ° C). Secciones de deshielo en las diapositivas con un calentador, y se desliza tienda sin cubreobjetos a -20 ° C hasta su utilización. </li></ol> 2. COX histoquímica <ol><li> Permitir que se sequen a temperatura ambiente durante 1 hora. Poner los portaobjetos en una cámara de diapositivas-tinción con papel de filtro húmedo, cortada en tiras. Para obtener consistenciaresultados t en cada experimento, se recomienda para procesar un máximo de diez diapositivas por experimento para reducir al mínimo los retrasos. </li><li> Prepare en una campana química 1X DAB, 100 mM citocromo c en PBS 0,1 M pH = 7,0. Vortex rápidamente. </li><li> Añadir 2 g de bovino catalasa (2 mg ml -1 o IU aproximadamente 4 ml -1). Mezclar adecuadamente por agitación para romper todos los granos de la catalasa. </li><li> Aplicar 150 a 200 l de medio de incubación en cada diapositiva, utilice punta de la pipeta para repartir uniformemente en todas las secciones. </li><li> Incubar los portaobjetos durante 40 minutos a 37 º C. </li><li> Retire el exceso de solución de las diapositivas. Lavar los portaobjetos 4 veces, 10 minutos cada vez, en PBS 0,1 M pH = 7,0. </li><li> Volver a la cámara de diapositivas diapositivas-tinción con tiras de papel mojado. </li></ol> 3. SDH histoquímica <ol><li> Prepare en una campana química 1,5 mM de NBT, 130 mM succinato de sodio, 0,2 mM de PMS, y 1,0 mM de azida sódica en PBS 0,1 M pH = 7,0. Tome la precaución de proteger a losPMS de la luz. Vortex rápidamente. </li><li> Aplicar 150-200 L de medio de incubación en cada diapositiva, utilice punta de la pipeta para repartir uniformemente en todas las secciones. </li><li> Incubar los portaobjetos durante 40 minutos a 37 º C. </li><li> Retire el exceso de solución de las diapositivas. Lavar los portaobjetos 4 veces, 10 minutos cada vez, en PBS 0,1 M pH = 7,0. </li><li> Deshidratar las diapositivas durante 2 minutos en las siguientes concentraciones de etanol: 70%, 70%, 95%, 95%, el 99,5%. A continuación, espere 10 minutos en un paso adicional del 99,5%. </li><li> Coloque los portaobjetos en xileno durante 10 minutos. Montar con Entellan y cubreobjetos. Deje que el que se sequen horas de la noche, o 2.1 por lo menos en un área ventilada. </li></ol> 4. Determinación de la disfunción mitocondrial <ol><li> El monto de la disfunción mitocondrial se indica por la cantidad de manchas azules celular. Para semi-cuantificar estas cantidades, las diapositivas debe ser codificado y se visualizó bajo el microscopio de campo brillante. Semi-cuantificación se debe realizar en una persiana base en una escala, por ejemplo, 0-4 (0, ausencia de manchas azules, 4, sólo la tinción de azul). Lo mejor es realizar este tipo de semi-cuantificación de varias secciones de un tema determinado / animal para calcular un valor medio para cada sujeto / animal. </li><li> Las estadísticas se debe realizar mediante una prueba no paramétrica, como la de Mann-Whitney o Kruskal-Wallis. </li></ol> 5. Controles apropiados especificidad <ol><li> Para los controles de la especificidad de la actividad COX, repita "COX histoquímica" pasos, y añadir 2,5 mM de azida sódica, un inhibidor de la cadena respiratoria terminal. </li><li> Para los controles de la especificidad de la actividad SDH, repita "SDH histoquímica" medidas con la eliminación de succinato de sodio y la adición de 50 mM malonato, un inhibidor competitivo de la SDH. </li><li> Lave y deshidratar las secciones en una serie de etanol, y luego montar y cubreobjetos las diapositivas tal como se describe en los pasos 3,4 a 3,6. </li></ol> 6. Los resultados representativos: tienda de campaña "&gt; El esquema general de los ejemplos representativos COX / SDH doble etiquetado ensayo histoquímico se ilustra en la Figura 2. apropiado de la COX / SDH doble etiquetado histoquímica en secciones de cerebro de tipo salvaje y envejecimiento prematuro de los ratones mutadores ADNmt se muestra en la Figura 3. Las manchas de color marrón oscuro en ratones de tipo salvaje (Figura 3, panel izquierdo) mostraron actividad normal de la COX. Las células con deficiencias de la cadena respiratoria, indicada por la tinción de azul, se dieron a conocer en 12 semanas de edad, los ratones mutadores ADNmt, y se convirtió en estas deficiencias más amplia que los ratones mutadores ADNmt entre a 46 semanas (Figura 3, el centro y el panel de la derecha). Ejemplos de inadecuado COX / SDH de doble etiquetado en las secciones de cerebro de ratones de tipo salvaje debido a la falta de etiquetado COX se muestran en la Figura 4. Tiempo de incubación inadecuados para la demostración de la actividad de la COX, o la reducción de la disponibilidad de oxígeno molecular por el cubreobjetos de la diapositiva durante la incubación, se tradujo en una reducción de la deposición de la reacción DABproducto de iones, y por lo tanto permite la formación del producto final azul formazán durante la incubación SDH. Actividades COX y SDH también puede ser investigado por separado (Figura 5, izquierda y centro), sin embargo, el etiquetado secuencial es útil para identificar las células con deficiencias de la COX, debido a la formación del precipitado de color azul durante la incubación SDH (Figura 3, el centro y derecha). Los controles de la especificidad de las actividades COX y SDH también se puede hacer (Figura 5, derecha). <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/3266/3266fig1.jpg"> Figura 1. Respiratoria mitocondrial IV complejos. La cadena respiratoria mitocondrial se encuentra dentro de la membrana interna e incluye cinco complejos. El propósito de la cadena respiratoria es el transporte de electrones del Complejo I a IV, y al hacerlo se crea un gradiente de protones a través de la membrana interna utilizada por el complejo V (ATPasa) para producir ATP. Hexágonos represe Rednt subunidades codificadas por el ADNmt. Hexágonos blancos representan las subunidades codificadas por el ADN nuclear (tenga en cuenta que el complejo II está completamente codificada del genoma nuclear). Por lo tanto, las mutaciones en el genoma mitocondrial pueden causar una disfunción de la cadena respiratoria debida a mutaciones en las subunidades de los complejos de la cadena respiratoria. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/3266/3266fig2.jpg"> Figura 2. Diagrama de flujo del ensayo de COX / SDH de doble etiquetado de histoquímica. Diseccionar los órganos de interés, congelar rápidamente los tejidos en hielo seco, y almacenarlas a - 80 ° C. Recoger secciones de criostato y mantener a - 20 ° C hasta su uso. Permitir que las secciones se sequen al aire a temperatura ambiente durante 1 hora. Preparar el medio de incubación para la histoquímica de la COX, que se aplican a las diapositivas, y se incuba durante 40 minutos a 37 º C. Lavar las secciones en PBS 4 veces durante 10 minutos cada lavado. Preparar el medio de incubación para la histoquímica SDH, que se aplican a la slides, y de nuevo se incuba durante 40 minutos a 37 ° C. Lavar las secciones de nuevo en PBS, se deshidrata en una serie de etanol, y luego montar y cubreobjetos de las diapositivas. La COX / SDH de doble etiquetado secciones está listo para ver en el microscopio de campo brillante en 1-2 horas. <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/3266/3266fig3.jpg"> Figura 3. Ejemplos representativos de la COX / SDH de doble etiquetado. Secciones de cerebro de tipo salvaje y envejecimiento prematuro de los ratones mutadores ADNmt se etiquetarán secuencialmente para las actividades de la COX y SDH. (Barra de escala:. 200 micras) normal actividad de la COX (indicado por el color marrón oscuro) se muestra en el hipocampo de ratones de tipo salvaje (izquierda). Las deficiencias de la COX (indicado por el color azul) se dieron a conocer en el hipocampo de los ratones mutadores ADNmt (centro y derecha). Hubo una nueva disminución en la actividad de la COX por 46 semanas de edad en el ADNmt ratones mutadores, lo que sugiere la exacerbación de la disfunción generalizada de la cadena respiratoria. El mito observadoLa disfunción mitocondrial en los ratones mutadores ADNmt 12 es causada por niveles altos de mutaciones puntuales del mtDNA, así como mayores niveles de eliminaciones lineal 5. <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/3266/3266fig4.jpg"> Figura 4. Ejemplos de inadecuado COX / SDH de doble etiquetado. Secciones de cerebro de ratones de tipo salvaje fueron etiquetados de forma secuencial para las actividades de la COX y SDH. (Barra de escala:. 200 micras) veces inadecuada de incubación (10 y 25 minutos) para la demostración de la actividad COX dio lugar a una reducción de la deposición del producto de reacción marrón DAB, en comparación con el tiempo de incubación de 40 minutos (izquierda y centro). El acortar los tiempos de incubación permitió la formación del producto final azul formazán durante la incubación SDH, engañosamente que sugiere la presencia de células con deficiencias de la COX. Cubreobjetos las diapositivas durante la incubación de la COX también dio lugar a la formación de inexacta y la deposición de la reacción DABiones producto (derecha). <img alt="Figura 5" src="/files/ftp_upload/3266/3266fig5.jpg"> Figura 5. INDIVIDUALES COX y SDH etiquetado y el control de la especificidad. Secciones de cerebro de ratones de tipo salvaje fueron etiquetados por separado para las actividades COX y SDH, indicado por el color marrón oscuro y el color azul, respectivamente (izquierda y centro). Aunque las actividades de la COX y SDH puede ser etiquetados individualmente, el etiquetado secuencial ha demostrado ser ventajoso en la localización de las células con la disfunción mitocondrial. Un ejemplo de un control específico de la COX y SDH actividades en el cerebro de un ratón de tipo salvaje mostró ausencia de etiquetado (derecha). (Barra de escala:. 200 micras)

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No hay conflictos de interés declarado.

La combinación de la COX / SDH método histoquímico permite la visualización de las células con la disfunción mitocondrial. Esta técnica, con los primeros estudios se remontan a 1968, sigue siendo popular, con muchos teniendo en cuenta el &quot;gold standard&quot; para la identificación de las enfermedades mitocondriales en los pacientes 14,19,26,27. Ahora se utiliza con frecuencia para investigar ADNmt mutación impulsada por el envejecimiento y el envejecimiento de los trastornos relacionados con 12,13,1...

<table border="1"><tr><td> Nombre del reactivo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentarios (opcional) </td></tr><tr><td> De hielo seco </td><td> AGA Gas AB </td><td> bloque de forma </td><td></td></tr><tr><td> Isopentano (2-metilbutano) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 277258 CAS: 78-78-4 </td><td></td></tr><tr><td> Cyrostat solución incrustación </td><td> Sakura Finetek </td><td> Tissue Tek 4583 </td><td></td></tr><tr><td> Criostato </td><td> Microm </td><td> Microm modelo HM 500M </td><td></td></tr><tr><td> Diapositivas </td><td> Thermo Scientific </td><td> Además súper helada Menzel Gläser J1800AMWZ </td><td></td></tr><tr><td> Cubreobjetos Vidrio de borosilicato </td><td> VWR International </td><td> 16004-098 </td><td> 24 x 50 mm </td></tr><tr><td> El filtro de papel </td><td> Munktell filtro AB </td><td> Calidad: 1350 ArtículoNúmero: 242 001 </td><td> 430 x 430 mm </td></tr><tr><td> 3,3 &#39;-diaminobenzidina tetrahidrocloruro (DAB) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> Sigma sistema de sustrato líquido, D7304 </td><td></td></tr><tr><td> Citocromo c (tipo III, del corazón de equino) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> C2506 CAS: 9007-43-6 </td><td></td></tr><tr><td> Bovina catalasa (de hígado) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> C9322 CAS: 9001-05-2 </td><td></td></tr><tr><td> Nitroazul de tetrazolio (NBT) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> N6876 CAS: 298-83-9 </td><td></td></tr><tr><td> Succinato sódico </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S2378 CAS: 6106-21-4 </td><td></td></tr><tr><td> Fenazina metosulfato (PMS) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P9625 CAS: 299-11-6 </td><td> PMS es sensible a la luz. Escudo de la luz. </td></tr><tr><td> Azida de sodio </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S8032 CAS: 26628-22-8 </td><td></td></tr><tr&gt; <td> Xileno </td><td> VWR International </td><td> EM-XX0060-4 </td><td></td></tr><tr><td> Entellan </td><td> VWR International </td><td> 100503-870 </td><td></td></tr><tr><td> Malonato (Ácido malónico) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> M1296 CAS: 141-82-2 </td><td></td></tr></table>

la visualización de la función respiratoria mitocondrial utilizando citocromo c oxidasa / succinato deshidrogenasa (cox / sdh) de doble etiquetado histoquímica

Visualization of Mitochondrial Respiratory Function using Cytochrome C Oxidase / Succinate Dehydrogenase (COX/SDH) Double-labeling Histochemistry

El ADN mitocondrial (ADNmt) los defectos son una causa importante de enfermedad y puede ser la base del envejecimiento y el envejecimiento, alteraciones 1,2. La teoría mitocondrial del envejecimiento sugiere un papel de mutaciones en el ADNmt, que pueden alterar la homeostasis de la bioenergética y la función celular, en el proceso de envejecimiento 3. Una gran cantidad de pruebas ha sido elaborado en apoyo de esta teoría de 1,4, siendo un ejemplo el ADN mitocondrial mutador ratón 5, sin embargo, el papel preciso de daño mitocondrial en el envejecimiento no es completamente entendido 6,7. Observando la actividad de las enzimas respiratorias es un método directo para la investigación de la disfunción mitocondrial. Complejo IV o citocromo c oxidasa (COX), es esencial para la función mitocondrial. Las subunidades catalíticas de la COX son codificadas por el ADNmt y son esenciales para el ensamblaje del complejo (Figura 1). Por lo tanto, la síntesis y funcionamiento se basan principalmente en la integridad del ADNmt 2.Aunque otros complejos respiratorios podrían ser investigados, complejos IV y II son los más susceptibles de examen histoquímico 8,9. Complejo II o succinato deshidrogenasa (SDH), es totalmente codificada por el ADN nuclear (Figura 1), y su actividad no suele ser afectada por un deterioro del ADNmt, a pesar de un aumento puede indicar la biogénesis mitocondrial 10-12. El ADNmt deterioro observado en las enfermedades mitocondriales, el envejecimiento y las enfermedades relacionadas con la edad a menudo conduce a la presencia de células con actividad de la COX bajo o ausente 2,12-14. Aunque las actividades de la COX y SDH pueden ser investigados de forma individual, la secuencial de doble etiquetado método de 15,16 ha demostrado ser ventajoso en la localización de las células con la disfunción mitocondrial 12,17-21. Muchas de las constituciones óptimo del test, se han determinado, como por ejemplo la concentración de sustrato, receptores de electrones / donantes, intermediarios transportadores de electrones, la influencia del pH, y la reacción time 9,22,23. 3,3 &#39;-diaminobencidina (DAB) es un donador de electrones eficaz y fiable 22. En las células con el funcionamiento de la COX, la indamine marrón polímero producto va a localizar en crestas mitocondriales y saturar las células 22. Aquellas células que tienen disfuncionales COX por lo tanto no estar saturado por el producto DAB, lo que permite la visualización de la actividad SDH por la reducción de nitroazul de tetrazolio (NBT), un receptor de electrones, a un producto final azul formazán 9,24. Citocromo c y sustratos succinato sódico son añadidos para normalizar los niveles endógenos entre el control y los tejidos enfermos / mutante 9. Catalasa se ​​añade como medida de precaución para evitar posibles reacciones contaminantes de la actividad de peroxidasa 9,22. Metosulfato fenazina (PMS), un transportador de electrones intermedia, se utiliza en conjunción con azida sódica, un inhibidor de la cadena respiratoria, para aumentar la formación de los productos de reacción final de 9,25. A pesar de este informeción, algunos detalles importantes que afectan el resultado de este ensayo sencillo decorosa, además de los controles de especificidad y los avances en la técnica, aún no se han presentado.

El citocromo c oxidasa / deshidrogenasa de sodio (COX / SDH) de doble etiquetado método permite la visualización directa de las deficiencias de las enzimas respiratorias mitocondriales en secciones de tejido fresco congelado. Esta es una técnica histoquímica directa y es útil en la investigación de las enfermedades mitocondriales, el envejecimiento y los trastornos relacionados con el envejecimiento.

La visualización de la función respiratoria mitocondrial utilizando citocromo C Oxidasa / Succinato Deshidrogenasa (COX / SDH) de doble etiquetado Histoquímica

Los defectos del ADN mitocondrial (ADNmt) son una causa importante de enfermedades y pueden subyacer al envejecimiento y a las alteraciones relacionadas con el mismo 1,2. La teoría mitocondrial del...

El objetivo general de este procedimiento es permitir la visualización directa de deficiencias enzimáticas respiratorias mitocondriales en secciones de tejido congelado fresco. Esto se logra primero mediante la obtención de secciones criostáticas del órgano de interés. El segundo paso del procedimiento consiste en realizar la histoquímica de COX, que va seguida de la histoquímica de SDH.Finalmente, las secciones de tejido se deshidratan, montan y cubren con láminas de cubreobjetos. En última instancia, los resultados pueden mostrar la cantidad de disfunción mitocondrial mediante la intensidad de la tinción azul celular. Hola. Hoy vamos a hablar sobre la técnica histológica de doble marcado COX-SCH.Y aunque este método puede aplicarse para estudiar enfermedades mitocondriales, también puede proporcionar información sobre el envejecimiento y los trastornos relacionados con la edad. Después de extraer el cerebro de un animal que ha sido sacrificado de acuerdo con el permiso ético, congélelo rápidamente en hielo seco. El tejido congelado puede conservarse a menos 80 grados Celsius, envuelto en papel de aluminio, hasta que esté listo para seccionarlo.Prepare el tejido para la criosecció

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Investigación

JoVE Journal

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Biología

La microscopía confocal de barrido se aplica para obtener imágenes de los eventos mitocondriales individuales en el corazón perfundido o los músculos esqueléticos en animales vivos. Monitoreo en tiempo real de los procesos mitocondriales individuales, como accesos repentinos superóxido y potencial de membrana fluctuaciones permite la evaluación de la función mitocondrial en un contexto fisiológicamente relevante y durante perturbaciones patológicas.

Imagen confocal de Soltero mitocondriales superóxido Parpadea en corazón intacto o En Vivo

Se presenta un protocolo de cómo recoger y electrones proceso de crio-tomografías de toda la mitocondria. La técnica ofrece una detallada comprensión de la estructura, función y organización de grandes complejos de proteínas de membrana en membranas biológicas nativas.

La visualización de la ATP sintasa dímeros en mitocondrias por Electron Cryo-tomografía

Se describen los métodos de biopsia de músculo vasto lateral, la preparación de las mitocondrias purificada, y perfilado respirométrico. El uso de volumen muscular pequeña hace que esta técnica adecuada para aplicaciones de investigación clínica.

Evaluación de Preparación y respirometría de mitocondrias aisladas de tejido músculo esquelético Obtenidos percutánea Biopsia con aguja

De alta resolución de respirometría se utiliza para determinar el consumo de oxígeno mitocondrial. Se trata de una técnica sencilla para determinar los complejos de la cadena respiratoria mitocondrial '(I-IV) la frecuencia respiratoria, la capacidad del sistema de transporte de electrones mitocondrial máxima, y ​​la integridad de la membrana mitocondrial externa.

-Alta resolución respirometría para evaluar la función mitocondrial en células intactas y permeabilizadas

Presentamos un protocolo para estudiar la distribución de mitocondrias y retículo endoplasmático en células enteras después de la modificación genética utilizando microscopía electrónica correlativa de luz y volumen incluyendo ascorbato peroxidasa 2 y tinción de peroxidasa de rábano picante, seccionamiento en serie de células con y sin el gen objetivo en la misma sección, y la toma de imágenes en serie a través de microscopía electrónica.

Mitocondrias y endoplasmática retícula imagen por microscopía electrónica de luz y volumen correlativa

Desarrollamos un protocolo práctico y un enfoque analítico para evaluar la fosforilación oxidativa mitocondrial y la capacidad de transferencia de electrones en homogeneizados tumorales frescos. Este protocolo se puede adaptar fácilmente para estudiar varias funciones mitocondriales que contribuyen al inicio, la progresión y la respuesta al tratamiento del cáncer.

Determinación analítica de la función mitocondrial de homogeneizados de tumores sólidos extirpados

La respirometría de alta resolución acoplada a sensores de fluorescencia determina el consumo de oxígeno mitocondrial y la generación de especies reactivas de oxígeno (ROS). El presente protocolo describe una técnica para evaluar la frecuencia respiratoria mitocondrial y la producción de ROS en el nervio ciático permeabilizado.

Evaluación de la función mitocondrial en el nervio ciático mediante respirometría de alta resolución

Este protocolo describe un ensayo comparativo, utilizando actividades complejas mitocondriales CI+CIII y CII+CIII en presencia o ausencia de Na+, para estudiar la existencia de grupos funcionales de CoQ parcialmente segmentados.

La sensibilidad de la membrana mitocondrial interna al Na+ revela grupos de CoQ funcionales parcialmente segmentados

Aquí, presentamos una compilación de ensayos para medir directamente la función mitocondrial en células de mamíferos independientemente de su capacidad para consumir oxígeno molecular.

Ensayos independientes del oxígeno para medir la función mitocondrial en mamíferos

Este protocolo presenta un flujo de trabajo para la propagación, diferenciación y tinción de células SH-SY5Y cultivadas y neuronas primarias del hipocampo de rata para la visualización y el análisis de la ultraestructura mitocondrial mediante microscopía de agotamiento de emisiones estimuladas (STED).

Uso de imágenes de células vivas de STED para visualizar la ultraestructura de la membrana interna mitocondrial en modelos de células neuronales

Aquí, describimos un método integral para medir la fosforilación oxidativa mitocondrial en fibras de músculo esquelético permeabilizadas frescas a partir de músculo humano o de ratón. Este método permite la cuantificación en tiempo real de la respiración mitocondrial y la evaluación de la preferencia de combustible y la flexibilidad metabólica, al tiempo que preserva las redes mitocondriales existentes y la integridad de la membrana.

Medición de la respiración mitocondrial en fibras musculares esqueléticas humanas y de ratón mediante respirometría de alta resolución

Aprende la técnica de doble marcaje COX/SDH para visualizar deficiencias enzimáticas respiratorias mitocondriales en tejidos congelados. Este método histoquímico permite diagnosticar enfermedades mitocondriales y estudiar trastornos relacionados con el envejecimiento.

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La visualización de la función respiratoria mitocondrial utilizando citocromo C Oxidasa / Succinato Deshidrogenasa (COX / SDH) de doble etiquetado Histoquímica

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