Medición cuantitativa en tiempo real de la migración e invasión de células tumorales después de la transfección de ARNm sintético

Este protocolo demuestra que la combinación de la transacción de ARN mensajero de sensación con mediciones en tiempo real basadas en impedancia de la migración e invasión celular facilita la identificación de genes que estimulan la migración e invasión de células tumorales. El sistema de análisis celular en tiempo real basado en impedancia permite un monitoreo cuantitativo, continuo y completo de la migración de células tumorales tras cambios en la expresión génica. Los genes que sobreexpresan tumores y estimulan la migración de células tumorales pueden identificarse como una diana potencial para inhibir la metástasis en el tratamiento del cáncer.

Para comenzar, agregue 10 microlitros de tampón de reacción 10x, 1,5 microlitros de PNE uno y 10 microgramos de ADN plasmídico a un tubo de microcentrífuga para linealizar el ADN plasmídico con la enzima de restricción. Agregue agua libre de nucleasa para llevar el volumen de reacción a 100 microlitros. Mézclalo golpeándolo y girándolo hacia abajo antes de incubar la mezcla de reacción a 37 grados centígrados durante la noche.