Inmunofluorescencia múltiple combinada con análisis de imágenes espaciales para la evaluación clínica y biológica del microambiente tumoral
June 2nd, 2023
En este artículo, se describe un protocolo para la inmunofluorescencia múltiple (mIF) de amplificación manual de señal de tiramida (TSA) combinada con análisis de imágenes y análisis espacial. Este protocolo se puede utilizar con secciones fijadas en parafina con formalina (FFPE) para la tinción de dos a seis antígenos por portaobjetos, dependiendo del escáner de portaobjetos disponible en el laboratorio.
En nuestro laboratorio, estamos estudiando el cáncer colorrectal humano. Su progresión a enfermedad metastásica y su respuesta al tratamiento, incluida la inmunoterapia. Estamos tratando de encontrar nuevos biomarcadores predictivos y pronósticos mediante la investigación del microambiente inmune tumoral y el microbioma intratumoral en la enfermedad primaria y metastásica.
En nuestro proyecto actualmente estamos implementando varias tecnologías como la secuenciación de ARN, la secuenciación del exoma completo, la secuenciación TCR del análisis de ADN libre de células circulantes, la inmunofluorescencia y la hibridación del instituto de fluorescencia. En este momento, nuestro principal desafío es combinar la tinción de hibridación del instituto de fluorescencia con la inmunofluorescencia múltiple de amplificación de señal de tiramida para estudiar la interacción entre el microbioma y las células inmunes. Nuestro método es robusto, reproducible, fácil de usar y rentable.
Se puede configurar en cualquier laboratorio que posea un escáner de luz fluorescente y el método se puede usar con cualquier anticuerpo IHC disponible comercialmente en oposición a los kits disponibles comercialmente que generalmente están optimizados para un panel restringido de antígenos.
Descripción general
Este artículo describe un protocolo para la amplificación manual del señal de tiramida (TSA) de inmunofluorescencia múltiple (mIF) combinada con análisis de imágenes y espacial. El método es aplicable a secciones embebidas en parafina fijadas con formalina (FFPE) para la tinción de múltiples antígenos por lámina.
Componentes clave del estudio
Área de la ciencia
- Neurociencia
- Inmunología
- Patología
Antecedentes
- Investigación del cáncer colorrectal humano y su progresión.
- Enfoque en el microambiente inmune del tumor y el microbioma intratumoral.
- Uso de varias tecnologías, incluyendo secuenciación de ARN e inmunofluorescencia.
- Desafíos en la combinación de diferentes métodos de tinción para un análisis integral.
Propósito del estudio
- Encontrar nuevos biomarcadores predictivos y pronósticos.
- Estudiar la interacción entre el microbioma y las células inmunes.
- Desarrollar un método de tinción robusto y reproducible.
Métodos utilizados
- Inmunofluorescencia múltiple de amplificación de señal de tiramida manual.
- Análisis de imágenes utilizando algoritmos de fluorescencia de alta multiplexión.
- Hibridación in situ de fluorescencia combinada con inmunofluorescencia.
- Protocolo detallado de tinción para secciones de tejido FFPE.
Principales resultados
- Tinción exitosa de múltiples antígenos en una sola lámina.
- Optimización de la especificidad de los anticuerpos y la relación señal-ruido.
- Análisis de imágenes efectivo que produce datos cuantificables.
- Demostración de la aplicabilidad del método en varios laboratorios.
Conclusiones
- El método TSA mIF es versátil y rentable.
- Puede adaptarse para varios anticuerpos y antígenos.
- Este enfoque mejora la comprensión de la biología tumoral.
