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Cancer Research
Inmunohistoquímica fluorescente cíclica multiplex
Inmunohistoquímica fluorescente cíclica multiplex
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Cancer Research
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JoVE Journal Cancer Research
Multiplex Cyclic Fluorescent Immunohistochemistry

Inmunohistoquímica fluorescente cíclica multiplex

Full Text
1,589 Views
04:21 min
January 26, 2024

DOI: 10.3791/66136-v

Yun Chen*1, Hui Zhang*2, Yaodong Fan3, Liu Yang4,5, Yan Dong*1

1Department of Pathology,The Third Affiliated Hospital of Kunming Medical University & Yunnan Cancer Hospital, 2Department of Gastroenterology,Wu Han NO.1 Hospital, 3Department of Neurosurgery,The Third Affiliated Hospital of Kunming Medical University & Yunnan Cancer Hospital, 4Departments of Biomedical Research Center,The Affiliated Calmette Hospital of Kunming Medical University & The First Hospital of Kunming, 5School of Medical,Yunnan University

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This article presents a protocol for multiplex cyclic immunohistochemistry, enabling the simultaneous detection of multiple markers in lung cancer and brain metastasis samples. The method addresses challenges in antibody specificity and localization of immune cell subpopulations.

Key Study Components

Area of Science

  • Immunohistochemistry
  • Oncology
  • Neuroscience

Background

  • Immunohistochemistry requires careful selection of antibodies to prevent cross-reactivity.
  • Standardization of antibody dilution is crucial for optimal results.
  • Alignment of cellular structures is necessary for accurate analysis.
  • This protocol focuses on lymphocytic subpopulations in cancer tissues.

Purpose of Study

  • To provide a detailed protocol for multiplex cyclic immunohistochemistry.
  • To enhance the specificity of immune cell detection in cancer samples.
  • To facilitate the study of lymphocytic infiltration in lung cancer and brain metastases.

Methods Used

  • Repeated antigen-antibody incubation.
  • Image scanning and alignment.
  • Detection of CD3, CD8, and CD20 positive lymphocytes.
  • Analysis of protein expression in conserved tissues.

Main Results

  • Successful identification of immune cell substrates in lung cancer.
  • Demonstration of lymphocytic infiltration levels.
  • Effective visualization of multiple immune markers.
  • Standardization improves reproducibility and specificity.

Conclusions

  • The protocol enhances the understanding of immune responses in cancer.
  • Multiplex cyclic immunohistochemistry is a valuable tool for researchers.
  • Further studies can build on this methodology for cancer research.

Frequently Asked Questions

What is multiplex cyclic immunohistochemistry?
It is a technique that allows for the simultaneous detection of multiple markers in tissue samples.
How does this method improve specificity?
By carefully selecting antibodies and standardizing dilution ratios, cross-reactivity is minimized.
What types of immune cells can be detected?
The protocol allows for the detection of CD3, CD8, and CD20 positive lymphocytes.
What are the applications of this protocol?
It can be used to study immune responses in lung cancer and brain metastases.
Is this method reproducible?
Yes, standardization of the protocol enhances reproducibility across experiments.
Can this technique be applied to other types of cancer?
While this study focuses on lung cancer, the methodology may be adapted for other cancers.

La inmunohistoquímica cíclica múltiple permite la detección in situ de múltiples marcadores simultáneamente mediante la incubación repetida antígeno-anticuerpo, el escaneo de imágenes y la alineación e integración de imágenes. En este trabajo se presenta el protocolo operativo para la identificación de sustratos de células inmunitarias con esta tecnología en muestras de cáncer de pulmón y metástasis cerebrales pareadas.

El reto para la inmunohistoquímica es elegir las especies de anticuerpos monoclonales primarios y secundarios para evitar la reactividad cruzada y obtener una mejor especificidad y repetibilidad. La decisión de género es necesaria para optimizar la proporción de dilución de anticuerpos. Mientras tanto, otro desafío es alinear la localización y las subestructuras.

El uso de este protocolo responde a la evolución técnica de la distribución de tres subpoblaciones linfocíticas, como CT tres, CT positiva tres, CT ocho positiva y CT 20 positiva en función de los recuentos celulares y la expresión de proteínas en los tejidos conservados, también se puede observar el nivel de infiltración. En nuestro protocolo, el parámetro Anticuerpos y los anticuerpos secundarios Fluor derivan de diferentes especies en la mezcla iso, lo que nos convierte en un eficiente. Esta medida también muestra una medida específica entre el anticuerpo y el antígeno.

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Cancer Research Número 203 inmunohistoquímica de fluorescencia múltiple cáncer de pulmón metástasis cerebrales células inmunitarias

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