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DOI: 10.3791/67519-v
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Este protocolo detalla un método para medir directamente la actividad de los canales iónicos en vesículas intracelulares utilizando un sistema manual de pinza de parche endolisosomal. Ilustramos el método que consiste en agrandar los endolisosomas y aislar manualmente estas vesículas. Este enfoque garantiza que los investigadores puedan replicar y aplicar con precisión el procedimiento.
Los compartimentos endolisosomales son los orgánulos más pequeños de las células. Las técnicas electrofisiológicas tradicionales no pueden medir directamente sus cambios de voltaje y corriente. La técnica de patch-clamp endolisosoma permite registros directos, lo que nos permite estudiar previamente en los canales iónicos.
El principal desafío experimental es que no todos los compuestos agrandan eficazmente los lisosomas. La identificación de las células adecuadas es difícil, e incluso con los lisosomas ideales, el registro exitoso de los canales iónicos no está garantizado. Desarrollamos la técnica de pinzamiento de parche endolisosoma para permitir registros electrofisiológicos directos de las membranas endolisosomales.
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