Una prueba de preferencia olfativa para medir los sesgos hedónicos olfativos en modelos murinos de depresión

Un sesgo negativo en el procesamiento emocional es una característica importante de los trastornos depresivos. Este sesgo es particularmente interesante para comprender mejor la fisiopatología de la enfermedad. Aquí proponemos un protocolo para la evaluación confiable de la valoración de olores innatos utilizando olores asociados con diversas valencias en modelos de depresión de ratones machos y hembras.

La evaluación del sesgo hedónico en modelos de ratón es esencial, tanto para evaluar mejor el fenotipo depresivo inducido como para investigar los mecanismos neuronales detrás de estos cambios en la asignación de valencia. En general, este protocolo proporciona nuevas vías para que la investigación traslacional comprenda el mecanismo subyacente a la depresión y la eficacia del tratamiento. En el futuro, intentaremos descifrar los circuitos cerebrales detrás de estos procesos emocionales interrumpidos y los posibles mecanismos específicos del sexo, junto con la acción de los antidepresivos en estas vías.

Para comenzar, prepare la configuración experimental utilizando una arena de dos compartimentos que mide 45 centímetros por 50 centímetros por 25 centímetros con paredes de plexiglás gris y un piso blanco. Divida la arena en dos compartimentos iguales de 25 centímetros por 45 centímetros, utilizando una pared de plexiglás gris de 37 centímetros por 25 centímetros. Asegure la placa de Petri perforada con adhesivo y colóquelas en la parte inferior de la pared en cada compartimento.

Luego use adhesivo de doble cara o Blu Tack para fijar cada placa de Petri verticalmente en la pared de la arena. A continuación, coloque una cámara a dos metros por encima de la arena para registrar el comportamiento de los animales y permitir el seguimiento automático de sus movimientos durante todo el experimento. Ahora divida los ratones en al menos dos grupos experimentales, los ratones de control y los ratones del grupo de prueba.

Transfiera cada ratón a la sala de pruebas de comportamiento 30 minutos antes de que comience el experimento. Con un luxómetro, ajuste la iluminación de la arena a aproximadamente 40 lux y verifique que la iluminación esté distribuida uniformemente. A continuación, agregue un papel de filtro limpio que mida 42,5 milímetros en cada una de las dos placas de Petri en la arena.

El primer día, coloque suavemente todos los ratones de la misma jaula de alojamiento juntos en la arena durante 10 minutos para reducir la neofobia. El día de la prueba, prepare en un frasco de vidrio el olor debajo de una campana química, utilizando la dilución correcta. Diluya el odorante en aceite mineral o agua destilada dependiendo de sus propiedades químicas.

Justo antes de probar cada ratón, use una micropipeta con una punta de filtro para recolectar 200 microlitros de la solución de olor debajo del capó. Dispense la solución sobre el papel de filtro en una de las placas de Petri. Deje el segundo papel de filtro en la otra placa de Petri sin tratar.

Transfiera las placas de Petri a la sala de pruebas. Luego fíjelos verticalmente en la pared de la arena. Coloque cada ratón individualmente en la arena en el centro entre los dos compartimentos.

Graba el comportamiento durante 10 minutos con la cámara aérea. Retire el mouse de la arena después de que finalice el período de observación. Retire la placa de Petri de olor de la arena.

A continuación, limpie la arena con una solución desinfectante de etanol al 70% y séquela bien. Deseche el papel de filtro usado y prepare la siguiente muestra de olor para el próximo ratón. Utilice un software de seguimiento automático para registrar la posición del mouse durante la prueba.

Defina distintas zonas dentro de la arena para el análisis. Durante la habituación, todos los ratones pasaron al menos 50 segundos en las zonas de olor y control, lo que indica un compromiso adecuado con la tarea. Es importante destacar que los ratones expuestos a UCMS pasaron el mismo tiempo en la zona de olor que los controles.

Aunque se pudo observar alguna diferencia en otras zonas. Los ratones hembra de control se movieron significativamente más que las hembras UCMS cuando se expusieron a la orina masculina, pero no durante la habituación o la exposición a TMT. Todas las lecturas de la respuesta hedónica muestran diferencias significativas o una tendencia estadística entre las hembras control y UCMS.

Este efecto también es visible a través del Índice Global de Exploración de Olores, que es una medida combinada de la respuesta hedónica y locomotora. El índice de exploración de olores se correlacionó positivamente con la puntuación de emocionalidad tanto para la orina masculina como para la TMT en ratones hembras. En ratones machos, no se observaron diferencias durante la habituación o en la distancia total recorrida a través de la prueba.

El tiempo pasado en la zona de olor muestra una reducción significativa de la orina femenina y la exploración de TMT en UCMS en comparación con los controles. Los ratones UCMS entran significativamente menos en la zona de olor, o tienden a hacerlo, y presentan un índice de preferencia significativamente reducido tanto por la orina femenina como por el TMT. El Índice de Exploración de Olores muestra una respuesta conductual negativa a la orina femenina y TMT de ratones UCMS en comparación con los controles, que tienden a correlacionarse positivamente con la puntuación de emocionalidad del animal.