Name: Una prueba de preferencia olfativa para medir los sesgos hedónicos olfativos en modelos murinos de depresión (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-11T13:40:00.000+00:00
Duration: 6 min 27 s
Description: Aprende a evaluar sesgos hedónicos olfativos en modelos murinos de depresión mediante una prueba de preferencia olfativa. Este protocolo permite investigar mecanismos neuronales y fenotipos de comportamiento asociados a trastornos depresivos.

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Todos los procedimientos experimentales y de cuidado animal siguieron las directrices nacionales y europeas (2010/63/UE) y fueron aprobados por el Ministerio de Investigación francés (APAFiS: #16380-2018080217358599_v1; APAFIS #51636-2024101718013761_v4). Los ratones machos y hembras C57BL/6JRj (modelo UCMS) y ratones machos C57BL/6NTac (modelo CORT) (8 semanas de edad) fueron alojados socialmente (4-5 ratones por jaula) y mantenidos en condiciones estándar (23 ± 1 °C; humedad 40%) en un ciclo de luz/oscuridad de 14/10 h (luces encendidas a las 7 a.m.) con comida y agua ad libitum.
1. La configuración experimental
<ol>
	<li>Instalación de la arena<ol>
		<li>Prepare el montaje experimental, que consiste en una arena de dos compartimentos (45 cm × 50 cm × 25 cm) hecha de paredes de plexiglás gris y un suelo blanco. Divida los dos compartimentos (25 cm × 45 cm) por una pared de plexiglás gris (37 cm × 25 cm).</li>
		<li>Coloque una placa de Petri perforada (60 mm × 15 mm con 7 agujeros de 5 mm de diámetro) en la parte inferior de la pared de cada compartimento.</li>
		<li>Fije verticalmente las placas de Petri en la pared con adhesivo de doble cara o adhesivo sensible a la presión (por ejemplo, Blu-tack).</li>
		<li>Coloque una cámara en la parte superior de la arena para registrar el comportamiento de los animales (2 m por encima de la arena) y rastrear automáticamente sus movimientos durante el experimento.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Elección de olores<ol>
		<li>Antes del experimento, elija una lista de olores con valencia neutra, positiva y negativa que se analizarán (consulte la Tabla 1 para ver ejemplos).</li>
		<li>Verifique que todos los olores elegidos tengan una presión de vapor similar. Además, evalúe la difusión en la arena para detectar algunos olores con un detector de fotoionización (PID)26.</li>
		<li>Pruebe cada olor en un día separado. NOTA: Se recomienda planificar primero el uso de olores neutros, luego los apetitivos y terminar con los olores aversivos para minimizar los efectos de la exploración de un día para otro. Este pedido minimiza los efectos de arrastre de un día de prueba a otro. Alternativamente, se puede utilizar una presentación aleatoria, pero todos los grupos experimentales deben ser probados con la misma secuencia de olor.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Diseño de grupos experimentales<ol>
		<li>Divida a los ratones en al menos dos grupos experimentales: ratones de control y ratones que se someterán al modelo de depresión. Aloja a los animales del mismo grupo en las mismas jaulas. ATENCIÓN: Cada grupo experimental debe contener al menos aproximadamente 7-8 individuos para obtener significación estadística. Las jaulas deben estar ubicadas cerca en el establo del animal para minimizar el efecto jaula.</li>
		<li>Inducir un fenotipo similar a la depresión en grupos de ratones relevantes utilizando el modelo de depresión de elección. NOTA: La descripción de protocolos para inducir comportamientos similares a la depresión en ratones está más allá del alcance de este artículo. Sin embargo, este estudio presenta experimentos que utilizan dos modelos diferentes (el Estrés Crónico Leve Impredecible [UCMS] y la Corticosterona [CORT])27,28 como resultados representativos para esta prueba de preferencia olfativa. En resumen, el modelo UCMS se basa en la exposición a una variedad de diferentes factores estresantes ambientales durante varias semanas, mientras que el modelo CORT consiste en la administración crónica de corticosterona disuelta en el agua potable de ratones (alrededor de 5 mg/kg/día dependiendo de la cantidad que beban los ratones).</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. Fase de habituación
<ol>
	<li>Habituación general y manejo<ol>
		<li>A su llegada, deje a los ratones sin molestarlos durante 1 semana sin cambiar la ropa de cama. Agregue material de algodón suplementario y un iglú en la jaula para reducir el estrés.</li>
		<li>Después de 1 semana, manipule suavemente a todos los ratones diariamente durante 3-4 días y acostúmbrelos a la manipulación de tazas, preferiblemente en la sala experimental.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Condiciones experimentales de la prueba<ol>
		<li>Transfiera el mouse a la sala de pruebas de comportamiento 30 minutos antes del inicio del experimento. NOTA: Idealmente, la sala de comportamiento debe incluir dos partes separadas que permitan que los animales estén en una parte mientras el ratón probado actúa en la otra.</li>
		<li>Tenga en cuenta que se mantengan las condiciones estándar de la vivienda (23 ± 1 °C; humedad 40%) y que no haya sonidos, luces ni olores molestos en la habitación.</li>
		<li>Con un luxómetro, configure la iluminación a aproximadamente 40 lux en la arena. Asegúrese de que la iluminación sea homogénea en la arena.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Habituación a la arena<ol>
		<li>Agregue un papel de filtro limpio (42,5 mm) en ambas placas de Petri (60 mm × 15 mm).</li>
		<li>Use cinta adhesiva transparente para sujetar la tapa de la placa de Petri a su parte inferior (porque se colocará verticalmente).</li>
		<li>El primer día, coloque suavemente todos los ratones de la misma jaula juntos en la arena durante 10 minutos para reducir la neofobia. PRECAUCIÓN: Siempre coloque los ratones en la arena manipulándolos con la taza para evitar el estrés debido a que los levantan por la cola.</li>
		<li>Al día siguiente, introduce a cada ratón individualmente en la arena, justo entre los dos compartimentos, y registra el comportamiento durante 10 minutos.</li>
		<li>Repita durante 2-3 días seguidos.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Criterio de exploración<ol>
		<li>Define las dos áreas (25 cm, 15 cm) en las que se han colocado las placas de Petri y mide el tiempo que cada animal pasa en cada zona.</li>
		<li>Promedie estas medidas a través de todos los pasos de habituación individuales.</li>
		<li>Si el tiempo medio de permanencia en cada una de las zonas es superior a 50 s, se cumple el criterio. Si no es así, repetir las sesiones de habituación hasta alcanzar el criterio, o excluir al animal del análisis. NOTA: Se podrán realizar un máximo de dos sesiones de habituación al día (mañana y tarde).</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. Fase de prueba
<ol>
	<li>Preparación del olor<ol>
		<li>El día de la prueba, prepare el olor con la dilución correcta bajo una cubierta química. Diluir el olor en aceite mineral o agua destilada, dependiendo de la estructura química. Para evitar la contaminación, almacene el aceite mineral en una habitación separada y ventilada lejos de los odorantes. NOTA: Se recomienda el uso de una nueva botella de aceite mineral al comenzar un nuevo experimento.</li>
		<li>Guarde la solución odorante en un frasco de vidrio. Evite los recipientes de tubos de plástico que podrían agregar contaminación por olores.</li>
		<li>Justo antes de probar cada ratón, recoja 200 μL de la solución de olor con una micropipeta utilizando puntas de filtro y colóquela sobre el papel de filtro en una de las dos placas de Petri.</li>
		<li>Deje que el otro papel de filtro en la segunda placa de Petri permanezca intacto.</li>
		<li>Transfiera las placas de Petri en la sala de pruebas y fíjelas verticalmente en la pared de la arena. PRECAUCIÓN: No prepare ni deseche las soluciones odorantes en la sala experimental para evitar la contaminación por olores. Cámbiese los guantes regularmente durante el experimento. Si se sospecha que los guantes podrían estar contaminados durante la manipulación de olores, cámbielos antes de agarrar los ratones para analizarlos.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Prueba de comportamiento<ol>
		<li>Coloca cada ratón individualmente en la arena, justo entre los dos compartimentos.</li>
		<li>Graba durante 10 min.</li>
		<li>Retira el ratón de la arena.</li>
		<li>Elimina el olor de la placa de Petri.</li>
		<li>Limpie la arena con una solución desinfectante (por ejemplo, etanol al 70%) y séquela.</li>
		<li>Deseche el papel de filtro y repita la preparación del olor para el próximo mouse.</li>
		<li>Lo ideal es probar solo un olor por día. Preferiblemente, use primero los olores neutros, luego los olores positivos y finalmente los olores negativos (ver Figura 1). PRECAUCIÓN: Realice los pasos de habituación y prueba aproximadamente a la misma hora del día durante los días del experimento (idealmente entre las 9 a.m. y las 3 p.m.). Si el número de animales requiere un período de tiempo más largo, esté atento a probar diferentes grupos experimentales de manera alterna para evitar cualquier sesgo diurno. Si es necesario evaluar a machos y hembras en el mismo experimento, prefiera probar un sexo después del otro. NOTA: Use placas de Petri limpias todos los días de la prueba para evitar la contaminación por olores. Cabe destacar que las placas de Petri perforadas se pueden reutilizar para varios experimentos después de una limpieza adecuada y la descontaminación de olores.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. Análisis de datos
<ol>
	<li>Seguimiento del comportamiento<ol>
		<li>Utilice un programa de seguimiento automático para registrar la posición del ratón a través de las pruebas.</li>
		<li>Defina zonas separadas en la arena para el análisis (consulte la Figura 1):<ol>
			<li>Defina una "zona de olor" (25 cm × 15 cm), el área donde se coloca la placa de Petri con el papel de filtro empapado con el olor (es decir, el área más cercana al olor que representa aproximadamente un tercio del compartimiento de la superficie).</li>
			<li>Defina una "zona de control" (25 cm × 15 cm), simétrica a la "zona de olor", pero sin ningún olor añadido en la placa de Petri.</li>
			<li>Defina una "zona detrás del olor" (25 cm × 30 cm), es decir, el resto del compartimento es donde se coloca la placa de Petri del olor.</li>
			<li>Defina una "zona de control trasera" (25 cm × 30 cm), simétrica a la "zona de control trasera", que consiste en el resto del compartimento sin olores. NOTA: El seguimiento del punto central del cuerpo del ratón es suficiente para analizar la preferencia olfativa del animal. Sin embargo, el seguimiento específico de la nariz de cada ratón puede ilustrar con mayor precisión la investigación olfativa por parte del animal.</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Lecturas de la respuesta hedónica<ol>
		<li>Utilizando el seguimiento automático, recopile la siguiente información para cada ratón y cada día de la prueba, incluidos los pasos de habituación:<ol>
			<li>Registre la distancia total recorrida en la arena (m).</li>
			<li>Registre el tiempo que pasa en cada zona de la(s) arena(s).</li>
			<li>Registre el número de entradas en cada zona de la arena.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Utilice la distancia total recorrida para evaluar los principales efectos locomotores.</li>
		<li>Para evaluar las diferencias en la preferencia olfativa hacia varios olores, utilice las lecturas principales:<ol>
			<li>Aprovecha el tiempo que pasas en la zona de olor.</li>
			<li>Utilice el número de entradas en la zona de olor.</li>
			<li>Utilice un índice de preferencia, calculado como el tiempo que se pasa en la zona de olor normalizado con el tiempo que se pasa en esta zona durante la habituación (la normalización se realiza en ratones de todos los grupos). La media se refiere a la media aritmética del tiempo pasado en la zona de olor, y sd se refiere a su desviación estándar. 
			<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/68391/68391eq001v2.jpg" style="margin: auto;"></li>
			<li>Utilice un índice de exploración de olores, calculado como el promedio de los valores normalizados de la distancia recorrida, el tiempo pasado en la zona de olor y el número de entradas en la zona de olor de la siguiente manera: 
			<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/68391/68391eq002.jpg" style="margin: auto;"> 
			<img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/68391/68391eq003v2.jpg" style="margin: auto;"> NOTA: Este índice de preferencia se puede adaptar si es necesario, por ejemplo, comparando los tiempos pasados en la zona de olor con los de control. Si los grupos muestran diferencias significativas en su exploración de la "zona de olor" durante la habituación, la normalización se puede realizar solo con respecto al grupo de control, en lugar de con respecto a todos los grupos combinados.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Represente visualmente estas lecturas para ratones de control y depresivos como media ± error estándar de la media (SEM).</li>
		<li>Utilice el análisis de varianza bidireccional de medidas repetidas (ANOVA) seguido de pruebas post hoc (aquí la prueba de diferencia mínima significativa de Fisher no corregida) para tener en cuenta ambos grupos experimentales, los olores (factor de medida repetida) y los factores de efecto de interacción. El factor de interacción indica si las diferencias entre los grupos son consistentes en todos los olores presentados.</li>
		<li>Verificar la normalidad y homocedasticidad mediante pruebas adaptadas (prueba de Shapiro-Wilk, prueba de Bartlett). La significación estadística se estableció en *p &lt; 0,05, **p &lt; 0,01, ***p &lt; 0,001, ****p &lt; 0,0001.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

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</ol>

<table><tbody><tr><td>2,4,5-trimetiltiazol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W332518-100G-K</td><td></td></tr><tr><td>2-trans octenal</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>52464-1ML</td><td></td></tr><tr><td>Blu-tack</td><td>UHU</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Papel de filtro</td><td>Fisher Scientific</td><td>11710125</td><td>42,5 milímetros</td></tr><tr><td>Vial de vidrio</td><td>DUTSCHER DOMINIQUE</td><td>958983</td><td></td></tr><tr><td>Aceite mineral</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5904-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Noldus Ethovision</td><td>Noldus Ethovision</td><td>Versión 17.5</td><td>Alternativamente, se podría usar Single Mouse Tracker en el software ICY de código abierto o Deeplabcut</td></tr><tr><td>Placa de Petri</td><td>Halcón</td><td>351007</td><td>Placa de Petri de 60 mm x 15 mm con 7 orificios hechos a medida de 5 mm de diámetro</td></tr><tr><td>Arena de plexiglás</td><td>Hecho a medida&nbsp;</td><td>N/A</td><td>Arena de plexiglás de 45 cm x 50 cm x 25 cm dividida en dos cámaras por una pared de 37 cm x 25 cm en el medio.</td></tr></tbody></table>

una prueba de preferencia olfativa para medir los sesgos hedónicos olfativos en modelos murinos de depresión

An Olfactory Preference Test for Measuring Olfactory Hedonic Biases in Mouse Models of Depression

Para comprobar que los ratones depresivos presentan un sesgo olfativo negativo14,29 y que éste puede medirse de forma fiable mediante el protocolo del test de preferencia olfativa que describimos aquí, evaluamos la respuesta hedónica a diferentes olores en dos modelos distintos de ratón de depresión.
En primer lugar, utilizamos un modelo de ratón de estrés crónico leve impredecible (UCMS) de 4 semanas de duración adaptado de28 (véase el Archivo Suplementario 1 para ver el protocolo detallado) para inducir un fenotipo depresivo en ratones hembra jóvenes C57BL/6JRj (Figura 2A, B). Estos ratones hembra se probaron en la prueba de preferencia olfativa con orina de ratón macho (MU, pura) como olor apetitivo y 2,4,5-trimetiltiazol (TMT, 5% en aceite mineral) como olor aversivo. En promedio, cada ratón pasó al menos 50 s en la zona de "control" y "olor" durante la habituación, cumpliendo el criterio (Figura 2C). Sin embargo, a través de la habituación, los ratones UCMS pasaron significativamente más tiempo en la "zona de control" en comparación con los controles, pero como no hay una diferencia significativa con respecto a la zona donde se agregará el olor, esta diferencia puede descartarse. En cuanto a la distancia, los ratones control se movieron significativamente más que los UCMS cuando se expusieron a MU, pero no durante la habituación ni en presencia de TMT (Figura 2D). Finalmente, todas las lecturas de la respuesta hedónica (tiempo de permanencia en la zona de olor, número de entradas en la zona de olor e índice de preferencia) muestran diferencias significativas o una tendencia estadística entre las hembras de control y las de UCMS (Figura 2E-G). Este efecto también es visible a través del índice global de exploración de olores, que es una medida combinada de la respuesta hedónica y locomotora (Figura 2H). Consistentemente, cada lectura demuestra un sesgo hedónico negativo en respuesta a los estímulos olfativos apetitivos y aversivos. Curiosamente, la puntuación de emocionalidad, que se calcula como un valor normalizado del fenotipo similar a la ansiedad y la depresión basado en una gran batería de pruebas conductuales14, se correlaciona positivamente con el índice de exploración de olores tanto de MU como de TMT (Figura 2I), mostrando una relación entre la respuesta conductual a los olores positivos y negativos y el fenotipo de ansiedad y tipo depresivo.
En segundo lugar, esta vez utilizamos el mismo protocolo UCMS para inducir un fenotipo similar al depresivo en ratones macho. Durante la prueba de preferencia olfativa, estos ratones fueron expuestos a orina de ratón hembra (FU, pura), que es apetitiva, y TMT como antes, como un olor negativo (Figura 3A, B). No hay diferencia en el tiempo empleado en las cuatro zonas durante la habituación, ni en la distancia recorrida a través de la prueba (Figura 3C,D). El tiempo de permanencia en la zona de olor muestra una reducción significativa de la exploración de FU y TMT en UCMS en comparación con los controles (Figura 3E). Además, los ratones UCMS entran significativamente menos en la zona de olor, o tienden a hacerlo, y presentan un índice de preferencia significativamente reducido tanto para FU como para TMT (Figura 3F,G), lo que confirma un sesgo olfativo negativo en un estado similar al depresivo. Del mismo modo, el índice de exploración de olores muestra una respuesta conductual negativa a FU y TMT de los ratones UCMS en comparación con los controles (Figura 3H), que tienden a correlacionarse positivamente con la puntuación de emocionalidad de los animales (Figura 3I).
En un tercer experimento, recurrimos a otro modelo de depresión que se basa en la administración crónica de corticosterona (CORT) en el agua potable de ratones machos C57BL/6NTac, mientras que los ratones control solo reciben la solución vehículo (Veh) (10% de 2-hidroxipropil-beta-ciclodextrina) 27. Después de cuatro semanas de tratamiento con CORT o Veh, los ratones se habituaron durante cuatro días y luego se expusieron a un olor neutro (OCT: 2-trans octenal, 1% en agua), un olor positivo (PO: aceite de maní) y un olor negativo (TMT: 2,4,5-trimetiltiazol, 5% en aceite mineral) (Figura 4A,B). A través de la habituación, no hubo diferencias entre Veh y CORT (Figura 4C). Sin embargo, ambos grupos pasaron significativamente más tiempo en la "zona de olor" en comparación con la "zona de control". No hay diferencias en cuanto a la distancia recorrida, excepto por el olor positivo (PO) por el que los ratones Veh se movieron más que CORT (Figura 4D). Es importante destacar que, al igual que en el caso de los ratones UCMS, el tiempo que se pasó en la zona de olor se redujo significativamente en los ratones CORT cuando se expusieron a un olor neutro y apetitivo (Figura 4E). La reducción de la exploración de olores también es visible a través de una reducción significativa o una tendencia a un menor número de entradas en la zona de olores (Figura 4F). En este caso, se revelan diferencias entre los grupos en función de la lectura analizada, probablemente debido a las limitaciones relacionadas con el número de animales utilizados, así como a un posible efecto suelo causado por el bajo tiempo de exploración observado después de la exposición al TMT. En general, el índice de preferencia es significativamente más bajo en los ratones CORT para todos los estímulos olfativos en comparación con Veh (Figura 4H). Finalmente, el índice de exploración de olores para todos los olores se correlaciona significativamente con la puntuación de emocionalidad de los animales (Figura 4I), lo que demuestra una vez más que esta prueba de preferencia olfativa es una herramienta adecuada para evaluar el sesgo emocional negativo en varios modelos de depresión en ratones.
Finalmente, podemos descartar la posibilidad de que las diferencias observadas puedan ser causadas por una reducción de la actividad locomotora, más que por sesgos emocionales. De hecho, la locomoción no difiere entre los grupos durante la habituación cuando se evalúa la distancia total recorrida (Figura 2D, Figura 3D, Figura 4D). Además, según el análisis estadístico, una reducción general en el compromiso con la tarea o un efecto de novedad tampoco pueden explicar estos sesgos. De hecho, encontramos un efecto significativo del factor olor en el análisis del índice de preferencia, sin interacción significativa entre los grupos experimentales y los olores. Estos resultados demuestran que los ratones de tipo depresivo realizan la tarea, y que su exploración reducida es específica para cada señal olfativa.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68391/68391fig1v2.jpg"> 
Figura 1: Esquema general de la línea de tiempo y configuración de la prueba de preferencia olfativa. Los ratones se habitúan por primera vez a la arena. En el primer día de habituación, los ratones de la misma jaula se colocan juntos para reducir la neofobia. Al día siguiente, se colocan individualmente en la arena. Después de la habituación, se agrega un olor a una de las cámaras. Primero se prueban preferentemente los olores neutros, seguidos de los olores positivos y finalmente los olores negativos. Para el análisis, la arena se puede dividir en cuatro zonas diferentes. Creado con Biorender. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68391/68391fig1v2large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68391/68391fig2v2.jpg"> 
Figura 2: Sesgo olfativo negativo en un modelo de ratón hembra de UCMS de depresión. (A,B) Cronología y grupos experimentales del estudio: Ratones hembra Control y UCMS (Unpredictable Chronic Mild Stress) se prueban en el Test de Preferencia Olfativa con olor positivo (MU: orina de ratón macho, pura) y negativo (TMT: 2,4,5-trimetiltiazol, 5% en aceite mineral). Creado con Biorender. (C) Los ratones UCMS pasaron en promedio significativamente más tiempo en la "zona de control" y menos tiempo en la "zona detrás del olor" en comparación con los controles durante la habituación (Grupo: F(1, 12) = 74.03, p &lt; 0.0001; Zona: F(2.434, 29.21) = 7.688, p = 0.0012; Interacción: F(3, 36) = 5,148, p = 0,0046). (D) La distancia total recorrida se redujo significativamente en UCMS cuando se expuso a MU, pero no para la habituación (Hab) y TMT (Grupo: F(1, 12) = 4.664, p = 0.0518; Olor: F(1.871, 22.45) = 4.846, p = 0.0195; Interacción: F(2, 24) = 4,797, p = 0,0177). (E) Los ratones UCMS pasaron significativamente menos tiempo explorando MU y TMT (Grupo: F(1, 12) = 24.39, p = 0.0003; Olor: F(1, 12) = 59.69, p &lt; 0.0001; Interacción: F(1, 12) = 2,267, p = 0,1580). (F) Los ratones UCMS entraron menos de la zona de olor o atendidos (Grupo: F(1, 12) = 9.279, p = 0.0102; Olor: F(1, 12) = 5.100, p = 0.0433; Interacción: F(1, 12) = 1,649, p = 0,2233). (G) El índice de preferencia por MU y TMT se reduce significativamente en los ratones UCMS (Grupo: F(1, 12) = 24.39, p = 0.0003; Olor: F(1, 12) = 59.69, p &lt; 0.0001; Interacción: F(1, 12) = 2,267, p = 0,1580). (H) El índice de exploración de olores para MU y TMT se reduce significativamente en ratones UCMS (F(1, 12) = 14.71, p = 0.0024; Olor: F(1, 12) = 0, p &gt; 0,9999; Interacción: F(1, 12) = 0,02630, p = 0,8739). (I) El índice de exploración de olores para MU y TMT se correlaciona positivamente con la puntuación de emocionalidad de los animales (MU: Pearson R2 = 0.4837, F(1,12) = 11.24, **p = 0.0058; TMT: Pearson R2 = 0,5340, F(1,12) = 13,75, **p = 0,0030). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68391/68391fig2v2large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68391/68391fig3v2.jpg"> 
Figura 3: Sesgo olfativo negativo en un modelo de ratón macho UCMS de depresión. (A,B) Cronología y grupos experimentales del estudio: Los ratones macho control y UCMS se prueban en el Test de Preferencia Olfativa con un olor positivo (FU: orina de ratón hembra, pura) y negativo (TMT: 2,4,5-trimetiltiazol, 5% en aceite mineral). Creado con Biorender. (C) No hay diferencias en promedio en el tiempo de permanencia en las diferentes zonas de la arena a través de la habituación (Grupo: F(1, 13) = 3,921, p = 0,0693; Zoner = F(1,688, 21,94) = 34,57, p &lt; 0,0001; Interacción: F(3, 39) = 0,7385, p = 0,5355). (D) No hay diferencias en la distancia total recorrida entre los controles y el UCMS (Grupo: F(1, 13) = 2.313, p = 0.1522; Olor: F(1.722, 22.38) = 1.746, p = 0.1998; Interacción: F(2, 26) = 0,8806, p = 0,4266). (E) El tiempo dedicado a explorar la zona de olor con FU y TMT se reduce significativamente en los ratones UCMS (Grupo: F(1, 13) = 6,808, p = 0,0216; Olor: F(1, 13) = 16.21, p = 0.0014; Interacción: F(1, 13) = 0,3304, p = 0,5753). (F) Los ratones UCMS entraron significativamente menos veces en la zona de olor para TMT, y tendieron a FU (Grupo: F(1, 13) = 6.572, p = 0.0236; Olor: F(1, 13) = 3.784, p = 0.0737; Interacción: F(1, 13) = 0,2145, p = 0,6509). (G) El índice de preferencia de los ratones UCMS se reduce significativamente para FU y TMT (Grupo: F(1,13) = 6,808, p = 0,0216; Olor: F(1, 13) = 16.21, p = 0.0014; Interacción: F(1, 13) = 0,3304, p = 0,5753); (H) El índice de exploración de olores del UCMS se reduce significativamente para ambos olores (Grupo: F(1, 13) = 12.42, p = 0.0037; Olor: F(1, 13) = 0.002580, p = 0.9603; Interacción: F(1, 13) = 0,5804, p = 0,4598). (I) El índice de exploración de olores para FU y TMT tiende a correlacionarse positivamente con la puntuación de emocionalidad de los animales (FU: Pearson R2 = 0.2573, F(1, 13) = 4.504, p = 0.0536; TMT: Pearson R2 = 0,2266, F(1, 13) = 3,809, p = 0,0729). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68391/68391fig3v2large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68391/68391fig4v2.jpg"> 
Figura 4: Sesgo olfativo negativo en un modelo de ratón macho CORT de depresión. (A,B) Cronología y grupos experimentales del estudio: Los ratones machos Veh y CORT se prueban en la prueba de preferencia olfativa con un olor neutro (OCT: trans-2-octenal, 1% en agua), positivo (PO: aceite de cacahuete, puro) y negativo (TMT: 2,4,5-trimetiltiazol, 5% en aceite mineral). A los ratones Veh y CORT se les administra la solución Vehicle y Vehicle + Corticosterona, respectivamente, durante toda la duración del experimento. Creado con Biorender. (C) Tiempo promedio de permanencia en las diferentes zonas de la arena durante la habituación (Grupo: F(1, 10) = 0,07588, p = 0,7886; Zona: F(2.224, 22.24) = 6.939, p = 0.0036; Interacción: F(3, 30) = 0,7033, p = 0,5575). (D) Distancia total recorrida durante la prueba de Habituación (Hab) y los diferentes olores (Grupo: F(1, 10) = 4.193, p = 0.0678; Olor: F(3, 30) = 11.80, p &lt; 0.0001; Interacción: F(3, 30) = 1,489, p = 0,2375). (E) Los ratones CORT pasan menos tiempo en la zona de olor que Veh para OCT y PO (Grupo: F(1, 10) = 5.094, p = 0.0476; Olor: F(2, 20) = 28.87, p &lt; 0.0001; Interacción: F(2, 20) = 3,841, p = 0,0388). (F) Los ratones CORT entran menos veces en la zona de olor o tienden a ella en comparación con Veh (Grupo: F(1, 10) = 6,832, p = 0,0259; Olor: F(2, 20) = 2.738, p = 0.0889; Interacción: F(2, 20) = 0,2902, p = 0,7512). (G) Los qmice de CORT muestran un índice de preferencia más bajo para OCT y PO (Grupo: F(1, 10) = 5.895, p = 0.0356; Olor: F(2, 20) = 20.83, p &lt; 0.0001; Interacción: F(2, 20) = 1,437, p = 0,2611). (H) El índice de exploración de olores se reduce significativamente en los ratones UCMS para todos los olores (Grupo: F(1, 10) = 12.35, p = 0.0056; Olor: F(2, 20) = 0.04381, p = 0.9572; Interacción: F(2, 20) = 0,3622, p = 0,7006). (I) El índice de exploración de olores para cada olor se correlaciona positivamente con la puntuación de emocionalidad de los animales (OCT: Pearson R2 = 0.5601, F(1, 10) = 12.73, **p = 0.0051; PO: Pearson R2 = 0,4495, F(1, 10) = 8,165, *p = 0,0170; TMT: Pearson R2 = 0,5061, F(1, 10) = 10,25, **p = 0,0095). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68391/68391fig4v2large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Nombre</td>
			<td>Abreviatura</td>
			<td>Dilución</td>
			<td>Valencia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2,4,5-trimetiltiazol</td>
			<td>TMT</td>
			<td>5% en aceite mineral</td>
			<td>Negativo</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-transoctenal</td>
			<td>OCT</td>
			<td>1% en agua</td>
			<td>Neutral</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orina de ratón hembra</td>
			<td>FU</td>
			<td>Puro</td>
			<td>Positivo</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orina de ratón macho</td>
			<td>MU</td>
			<td>Puro</td>
			<td>Positivo</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aceite de cacahuete</td>
			<td>PO</td>
			<td>Puro</td>
			<td>Positivo</td>
		</tr>
	</tbody>
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Tabla 1: Ejemplos de olores con valencia neutra, positiva y negativa.
Ficha complementaria 1: Protocolo para el estrés crónico leve impredecible de 4 semanas. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68391/Supplementary%20File%201.docx" target="_blank">Por favor, haga clic aquí para descargar este archivo.</a>

Una prueba de preferencia olfativa para medir los sesgos hedónicos olfativos en modelos murinos de depresión

Depression is the single largest contributor to disability worldwide, affecting 280 million people annually. Beyond reduced activity and motivation, ...

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Research

Investigación

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociencia

Propiedades fundamentales, sin embargo, exclusiva del sistema olfativo de roedores han llevado a su estudio cada vez mayor entre los biólogos. Una evaluación relativamente simple de su función se necesita también. A continuación se describen las pruebas sensibles para la caracterización de la sensibilidad del ratón olfativo y preferencias.

Pruebas del comportamiento olfativo en el ratón adulto

El deterioro de la función olfativa es una característica común en muchos trastornos neurodegenerativos, como las enfermedades de Parkinson, Alzheimer y Huntington. En el presente artículo, describimos un conjunto de pruebas para evaluar la discriminación y detección del olfato en ratones que pueden utilizarse para medir las capacidades olfativas en modelos murinos de enfermedades neurodegenerativas.

Los ensayos olfativos para modelos de ratón de Enfermedades Neurodegenerativas

Este manuscrito describe un protocolo para examinar el sistema olfativo de los roedores. La prueba de habituación/deshabituación olfativa permitirá a los investigadores determinar si un ratón se habitúa a un olor presentado repetidamente y si el ratón demuestra deshabituación cuando se le presenta un olor nuevo.

Las pruebas para detectar olor Discriminación y habituación en ratones

Presentamos una prueba olfativa sencilla e imparcial en ratones. Con este protocolo, la discriminación olfativa, la preferencia, la evitación y la sensibilidad a un olor nuevo en comparación con el agua se pueden evaluar en sesiones conductuales únicas. Este método está indicado para un solo experimentador y el análisis se basa en el procesamiento de vídeo asistido por ordenador.

Simple y asistida por ordenador de pruebas olfativas para Ratones

Se presenta un protocolo para la investigación de la transmisión social de preferencia del alimento en los ratones. Las ventajas y posibles aplicaciones para este procedimiento, por ejemplo, en la detección de cambios tempranos en modelos de ratón de AD, se destacan. Para concluir, se discuten la interpretación de los resultados a la luz detalles críticos.

Evaluación de la transmisión Social de comportamientos de preferencias de alimentos

Aquí capacitamos a ratones en una tarea de aprendizaje asociativo para probar la discriminación de olor. Este protocolo permite también estudios sobre cambios estructurales inducidos por el aprendizaje en el cerebro.

Una prueba objetiva y Reproducible de aprendizaje olfativo y discriminación en ratones

El modelo de ratón de desesperación crónica (MDL) de la depresión consiste en sesiones repetitivas de natación forzada y otra fase de natación retrasada como lectura. Representa un modelo adecuado para la inducción de un estado depresivo crónico estable durante al menos 4 semanas, modificable para evaluar intervenciones de tratamiento subcrónicas y agudas.

Modelos Animales de Depresión - Modelo de Desesperación Crónica (MDL)

Este artículo proporciona una descripción detallada de un nuevo protocolo de sesgo de juicio del ratón. También se demuestra la sensibilidad de esta tarea de excavación olfativa al estado afectivo y se discute su utilidad en diversos campos de investigación.

Evaluación del sesgo de juicio del ratón a través de una tarea de excavación olfativa

Sistemas olfativos de insectos proporcionan oportunidades únicas para el registro de olor inducida por las respuestas en las formas de electroantennograms (EAG) y las grabaciones individuales sensillum (SSR), que se resumen las respuestas de todas las neuronas del receptor odorante (ORNs), ubicado en la antena y de los alojados en individuales sensilla, respectivamente.

Las mediciones electrofisiológicas de un sistema olfativo Polilla

Fotólisis de compuestos enjaulados permite la producción de aumentos rápidos y localizados en la concentración de diversos compuestos fisiológicamente activos. Aquí, se muestra cómo obtener el patch-clamp grabaciones en combinación con la fotólisis de AMPc jaula o jaulas Ca para el estudio de la transducción olfativa en disociada del ratón neuronas sensoriales olfativas.

Flash fotólisis de compuestos enjaulados en los cilios de las neuronas sensoriales olfativas

Aprende a evaluar sesgos hedónicos olfativos en modelos murinos de depresión mediante una prueba de preferencia olfativa. Este protocolo permite investigar mecanismos neuronales y fenotipos de comportamiento asociados a trastornos depresivos.

Una prueba de preferencia olfativa para medir los sesgos hedónicos olfativos en modelos murinos de depresión

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