Un modelo de ratón para evaluar los resultados estructurales y funcionales a largo plazo después de la reversión de la obstrucción ureteral unilateral prolongada

Mi laboratorio trabaja en los mecanismos y la terapia para mejorar los resultados a largo plazo después de la lesión renal, y el enfoque específico de este protocolo es desarrollar una herramienta para estudiar los resultados a largo plazo después de la reversión de la obstrucción urinaria. Hemos desarrollado un modelo de ratón de obstrucción ureteral reversible unilateral, que nos permite evaluar los resultados funcionales y estructurales a largo plazo de revertir la obstrucción urinaria en el riñón. Otros métodos requieren múltiples cirugías o experiencia microquirúrgica, a la que la mayoría de los laboratorios no tienen acceso. Además, debido a que se trata de una obstrucción unilateral, la mayoría de los otros métodos no permiten la evaluación funcional de la recuperación sin realizar pruebas de función renal divididas. Realmente solo hay dos. La primera es la colocación consistente de la pinza vascular en la misma posición en el uréter proximal en cada experimento, y la segunda es la extracción de la pinza vascular varios días después sin causar daño al uréter o al riñón.

[Raquel] Para comenzar, prepare el lado quirúrgico de un ratón anestesiado con antisépticos. Realice una incisión dorsal longitudinal de 1,5 centímetros a lo largo de la línea media a través de la piel y las capas subcutáneas con tijeras y fórceps. Haga una pequeña incisión a través del músculo del flanco izquierdo y la fascia por encima del riñón. Luego, con un par de fórceps, exteriorice el riñón izquierdo. Usando fórceps romos. Disecciona cuidadosamente la grasa en el polo inferior y algo de tejido conectivo cerca del uréter. Localiza la región del uréter. Luego, separe el uréter junto con su tejido conectivo del pedículo renal para evitar incluir la vena y la arteria renal con la pinza. Use aplicadores de pinzas para abrir la pinza vascular y colocarla directamente debajo de la pelvis renal en el uréter. Utilice las marcas de la abrazadera para asegurarse de que se aplique una presión uniforme en todos los ratones. Ahora use un hisopo de algodón estéril empapado en solución salina para empujar suavemente el riñón con la pinza hacia el espacio retroperitoneal. Luego sutura la capa muscular con una sutura absorbible. Use pinzas para la piel para cerrar la capa de la piel. Para retirar la pinza ureteral, retire los clips de la herida y luego limpie el área quirúrgica sin remodelar usando las incisiones originales para acceder a la pinza. Vuelva a abrir la capa muscular y exponga el espacio retroperitoneal. Use fórceps para ubicar cuidadosamente la pinza en el espacio retroperitoneal sin exteriorizar el riñón. Con los aplicadores de pinzas, abra suavemente la pinza mientras retira el tejido circundante con fórceps para retirarlo de manera segura. Ahora exteriorice el riñón para inspeccionar la pelvis renal en busca de obstrucción. Una pelvis renal hinchada confirma la hidronefrosis. Empuje el riñón hacia el espacio retroperitoneal con un hisopo de algodón estéril empapado en solución salina y suture la incisión para cerrarla como se demuestra. Para realizar una nefrectomía contralateral, vuelva a abrir el sitio dorsal usando la incisión original en la piel. En tamaño, el músculo del flanco derecho y la fascia por encima del riñón. Luego exteriorizar el riñón derecho usando fórceps. Sostenga el riñón derecho con fórceps suaves y curvos y diseccione los polos superior e inferior libres del tejido circundante. Después de liberar el riñón, ate una sutura de seda Foro alrededor de los vasos renales y el uréter con un nudo quirúrgico doble. Espere aproximadamente 30 segundos hasta que el riñón se oscurezca. Luego sosténgalo con las pinzas curvas suaves y retírelo cortando distalmente al nudo con unas tijeras curvas. Empuje suavemente el pedículo renal restante hacia el espacio retroperitoneal con un hisopo de algodón estéril empapado en solución salina, luego cierre las capas de músculo y piel con suturas y clips. Las mediciones típicas de supervivencia y función renal se tomaron 84 días después de la obstrucción ureteral unilateral reversible. Los estudios funcionales compararon la obstrucción ureteral unilateral reversible con la nefrectomía sola para el nitrógeno ureico en sangre, la tasa de filtración glomerular transdérmica y la osmolaridad urinaria después de 18 horas de privación de agua. Los valores de osmolaridad urinaria fueron marcadamente más bajos que los de los ratones de control de nefrectomía en los mismos puntos de tiempo.