Name: Ingeniería 3D Flipwell para el desarrollo de sistemas asíncronos para terapias toxicológicas e inmunomoduladoras en células bacterianas, intestinales e inmunitarias (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-17T12:40:00.000+00:00
Duration: 11 min
Description: Aprende a construir un sistema de co-cultivo 3D que imita la mucosa intestinal para evaluar respuestas a fármacos y estudiar interacciones entre bacterias, células epiteliales y macrófagos. Este método facilita el descubrimiento de nuevas estrategias inmunoterapéuticas basadas en metabolitos bacterianos.

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<ol><li>Goldsmith, J. R., Sartor, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+diet+on+intestinal+microbiota+metabolism%3A+downstream+impacts+on+host+immune+function+and+health%2C+and+therapeutic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">The role of diet on intestinal microbiota metabolism: downstream impacts on host immune function and health, and therapeutic implications.</a> J Gastroenterol. 49 (5), 785-798 (2014).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>0,4% PFA (véase la receta en Reactivos y Soluciones)</td><td>Descrito en el texto</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipeta sorológica de 10 ml</td><td>Corning</td><td>4488</td><td></td></tr><tr><td>Placa TC de 12 pozos, &nbsp; Compañero de reparto</td><td>Corning</td><td>3513</td><td></td></tr><tr><td>Tubos cónicos de 15 ml, SpectraTube</td><td>Alkali Scientific</td><td>C2715</td><td></td></tr><tr><td>200 y micro; l tips&nbsp;</td><td>USA Scientific</td><td>1111-1700</td><td></td></tr><tr><td>Insertos de 24 pozos - Insertos de cultivo para placas de 24 pozos, PET 0.4 y micro; M&nbsp;</td><td>BrandTech Scientific</td><td>782710</td><td></td></tr><tr><td>Flipwells 3D prefabricados, esterilizados por UV&nbsp;</td><td>Laboratorio de fabricación</td><td></td><td></td></tr><tr><td>4% PFA (véase la receta en Reactivos y Soluciones)</td><td>Descrito en el texto</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fondo de Sepiapterin de 50 mM (SEP, ver receta en Reactivos y Solución)</td><td>Carrera en Henan Chemical Co</td><td>CAS#: 17094-01-8</td><td></td></tr><tr><td>Tubos cónicos de 50 ml</td><td>Greiner Bio-One</td><td>227261</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta serológica de 5 ml</td><td>Corning</td><td>4487</td><td></td></tr><tr><td>70-95% de etanol (alcohol etílico)</td><td>Laboratorios de Descontaminación</td><td>04-355-151</td><td></td></tr><tr><td>Papel de aluminio</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-213-100</td><td></td></tr><tr><td>Agujas de alimentación animal, calibre 20 1,5" longitud, de un solo uso&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-208-87</td><td></td></tr><tr><td>Buffer de dilución de anticuerpos (véase la receta en Reactivos y Soluciones)</td><td>Descrito en el texto</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cámara Celular Attofluor &nbsp;</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A7816</td><td></td></tr><tr><td>Cinta de autoclave</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-901-111</td><td></td></tr><tr><td>Cepas de Bacillus subtilis wt (3A1T) en stock de glicerol ()</td><td>Centro Genético de Stock de Bacillus (https:// bgsc. org/</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Guantes BioGrip Pink Nitrilo sin polvo sin látex</td><td>Fabricación de alta calidad</td><td>P2810</td><td></td></tr><tr><td>Buffer bloqueador (véase la receta en Reactivos y Soluciones - Suero de Cabra Normal al 10% en PBS)</td><td>Descrito en el texto</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Buffer de bloqueo (véase la receta en Reactivos y Soluciones)</td><td>Descrito en el texto</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscopio de campo claro (Nikon o equivalente) Eclipse Ts2</td><td>Nikon</td><td>TS2</td><td></td></tr><tr><td>Celdas Caco-2</td><td>ATCC</td><td>HTB-37</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora de cultivo celular, 37 y grados; C, 5% CO2 (Eppendorf CellXpert)</td><td>Eppendorf</td><td>6734010015</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugadora (Eppendorf, centrífuga 5804/5804 R o equivalente</td><td>Eppendorf</td><td>22622501</td><td></td></tr><tr><td>Tubos centrífugas de 50 ml SpectraTube</td><td>Alkali Scientific</td><td>C2750</td><td></td></tr><tr><td>Insertos de cultivo para placa de 12 pozos, PET, 0,4 y micro; m, estéril</td><td>BrandTech Scientific, BRAND Insert 2en1, BIO-CERT</td><td>782730</td><td></td></tr><tr><td>Medio de montaje DAPI VectaShield</td><td>Laboratorios Vector</td><td>H-1000</td><td></td></tr><tr><td>Fondo profundo de placa de Petri, placa de Petri apilable de poliestireno de 100 x 25 mm de profundidad, estéril y nbsp;</td><td>USA Scientific</td><td>8609-0625</td><td></td></tr><tr><td>XP de ayuda de pipeta Drummond</td><td>Drummond y Drummond;</td><td>4-000-101</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga Eppendorf 5804 con rotor oscilante para tubos cónicos de 50 ml</td><td>Eppendorf</td><td>22622501</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas, acero inoxidable, autoclave estéril, 2 juegos</td><td>VWR</td><td>82027-438</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas, acero inoxidable, autoclave estéril, 2 juegos, pinzas para muestras</td><td>VWR</td><td>82027-438</td><td></td></tr><tr><td>Matraz de cristal 500 ml</td><td>Corning&nbsp;</td><td>4980-500</td><td></td></tr><tr><td>Hemacitómetro (Neubauer con llaves de cobertura)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>50-312-90</td><td></td></tr><tr><td>Celdas HT-29-MTX-E12</td><td>Millipore Sigma</td><td>12040401</td><td></td></tr><tr><td>ImmunoPen (opcional)</td><td>Fisher Scientific</td><td>4021761EA</td><td></td></tr><tr><td>Guantes resistentes a base de Kevlar u otros cortes (opcional)</td><td>Ferretería o Amazon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cinta de laboratorio o cinta de envío</td><td>Fisher Scientific & nbsp;</td><td>159015R</td><td></td></tr><tr><td>Campana de flujo laminar Serie 1300 A2 BSC Clase II</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>1375</td><td></td></tr><tr><td>Campana de flujo laminar con luz UV SterilGARD</td><td>La Compañía Baker</td><td>SG403A-HE</td><td></td></tr><tr><td>Marcadores a prueba de disolventes</td><td>VWR</td><td>52877-310 o 95042-566</td><td></td></tr><tr><td>Medios para células Caco-2 (DMEM a base de alta glucosa, véase la receta en Reactivos y Soluciones)</td><td>descrito en &nbsp; Mensaje de texto</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Medios para células HT-29 (DMEM Glucosa alta, véase la receta en Reactivos y Soluciones)</td><td>Descrito en el texto</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Medios para células THP-1 (RPMI, véase la receta en Reactivos y Soluciones)</td><td>Descrito en el texto</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tubo de microcentrífuga, 1,7 ml, estéril y nbsp;</td><td>Alkali Scientific</td><td>C3017-ST</td><td></td></tr><tr><td>Tubos microcentrífugas</td><td>Thermo Fisher</td><td>3451</td><td></td></tr><tr><td>Medios Miller LB (véase la receta en Reactivos y Soluciones)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>&nbsp; L3522</td><td></td></tr><tr><td>Alicates de punta fina, 2 juegos</td><td>Ferretería o Amazon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Guantes sin látex sin polvo de nitrilo Aurelia Amazing</td><td>MidSci</td><td>92885</td><td></td></tr><tr><td>Tapas de placa de Petri, estéril tipo placa de Petri de halcón de 100x15 mm</td><td>Corning Inc</td><td>351029</td><td></td></tr><tr><td>Acetato de mirestado de phorbol (PMA) (100 ng/&mu; l, véase la receta en Reactivos y Soluciones) y nbsp;</td><td>InvivoGen</td><td>Tlrl-pma</td><td></td></tr><tr><td>Puntas de pipete (10 y micro; 1, 200 & micro; 1000 y micro; l) PurePoint o equivalente</td><td>Alkali Scientific y nbsp;</td><td>ST1010-CS, ST1200-CS, ST1000-CS</td><td></td></tr><tr><td>Película transparente</td><td>Abacería</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Solución de colagénasa de trabajo Purecol (100 & micro; g/mL)</td><td>BioMatrix Avanzada</td><td>5005-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Tapas redondas #1 1 oz (Corning Float Glass o Fisherbrand)</td><td>Corning o Fisherbrand</td><td>50143822 o 12-546-2 25CIR-2</td><td></td></tr><tr><td>Bisturí, estériles, desechables y nbsp;</td><td>Mopec o Feather #10</td><td>AJ136 o 2975#10</td><td></td></tr><tr><td>Sepiapterina (septiembre, 100 y micro; M, consulta la receta en Reactivos y Solución)</td><td>Carrera en Henan Chemical Co</td><td>CAS#: 17094-01-8</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora agitada ajustada a 220 rpm 37&º; C</td><td>Eppendorf New Brunswick Scientific</td><td>M12990080</td><td></td></tr><tr><td>Adhesivo de silicona Loctite Silicona transparente IDH o 3M Marine Grade Silicon Clear transparente con punta de nariz</td><td>Loctite o 3M</td><td>1745658 o PN08019</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta de canal único Eppendorf Research Plus, 200 y micro; l</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipetas de canal único (10 y micro; 1, 200 & micro; 1000 y micro; l)</td><td>Eppendorf</td><td>2231001122</td><td></td></tr><tr><td>Espectrofotómetro NanoDropOneC</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>13-400-519</td><td></td></tr><tr><td>Agua desionizada estéril &nbsp; &nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Serina estéril tamponada con fosfato (PBS) sin calcio ni magnesio</td><td>Fisher Scientific</td><td>&nbsp; BSS-PBS-1X6</td><td></td></tr><tr><td>Jeringuilla de 3 ml o 5 ml con punta Luer-Lok</td><td>BD</td><td>309585 o 309603</td><td></td></tr><tr><td>Celdas THP-1</td><td>ATCC</td><td>TIB-202</td><td></td></tr><tr><td>Pipetas de transferencia, estériles</td><td>Fisherbrand</td><td>13-711-20</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Millipore Sigma</td><td>X100</td><td></td></tr><tr><td>Solución azul de tripán</td><td>VWR</td><td>97063-702</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA 0,25%</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>Limpia a Kimwipes Professional con el Poliescudo Anti-Estadísticas LintGuard</td><td>Kimberly-Clark</td><td>34120</td><td></td></tr><tr><td><fuerte> Anticuerpos primarios:&nbsp; </fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Antihumano CD163</td><td>Abcam</td><td>156769</td><td></td></tr><tr><td>Anti-humano CD68</td><td>Novus Biologicals</td><td>NB100-683-0,1 mg</td><td></td></tr><tr><td>Antihumano CD80, E3Q9V</td><td>Tecnologías de señalización celular</td><td>15416</td><td></td></tr><tr><td>Anti-humano CK20&nbsp;</td><td>Tecnologías de la vida</td><td>PA5-82875</td><td></td></tr><tr><td>MUC2 antihumano (996/1)</td><td>ThermoFisher</td><td>MA5-12345</td><td></td></tr><tr><td><fuerte>Anticuerpos secundarios: </fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 Goat anti-Rabbit IgG (para CD80 y CK20)</td><td>ThermoFisher</td><td>A11008</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594 Goat Anti-Mouse IgG (para MUC2 y CD68 o CD163)</td><td>ThermoFisher</td><td>A11005</td><td></td></tr><tr><td><fuerte>Reactivos y Soluciones:&nbsp; &nbsp; </fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><fuerte>Caco-2 Medio:</fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM con glucosa alta (4,5g/L) y 1% (v:v) de GlutaMax&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>FBS 10% (v:v) inactivado por calor</td><td>Sigma</td><td>F2242-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Aminoácidos no esenciales 1% para medios Caco-2</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11140076</td><td></td></tr><tr><td>Estreptococo de pluma 1% (v:v)</td><td>Sigma</td><td>F2242-500ML</td><td></td></tr><tr><td><fuerte>HT-29-MTX Media</fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM con glucosa alta (4,5g/L) y 1% (v:v) de GlutaMax&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>FBS 10% (v:v) inactivado por calor</td><td>Sigma</td><td>F2242-500ML</td><td></td></tr><tr><td>HEPES (concentración final de 10 mM)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15630080</td><td></td></tr><tr><td>Estreptococo de pluma 1% (v:v)</td><td>Sigma</td><td>F2242-500ML</td><td></td></tr><tr><td><fuerte>THP-1 Medio:</fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Suero fetal bovino inactivado por calor (FBS) (10% v:v)</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>F2242-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Glucosa (concentración final de 4,5 g/L)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A249001</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMax 1% (v:v)&nbsp; Concentración final de 2 mM</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>HEPES (concentración final de 10 mM)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15630080</td><td></td></tr><tr><td>Estreptococo de pluma 1% (v:v)</td><td>Sigma</td><td>F2242-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Instituto Conmemorativo Roswell Park (RPMI)-1640 medio</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11875119</td><td></td></tr><tr><td>Piruvato de sodio (concentración final de 1 mM)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11360070</td><td></td></tr><tr><td><Solución de colagenosa activa >Purecol (dilución a 1:30 100 & micro; g/ml):</fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Purecol 3 mg/ml 1:30 a 100 y micro; g/ml&nbsp;</td><td>BioMatrix Avanzada</td><td>5005-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Agua desionizada estéril</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><solución de stock fuerte>L-Sepiapterin (50 mM): </fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>L-Sepapterina (SEP)</td><td>Carrera en Henan Chemical Co</td><td>CAS#: 17094-01-8</td><td></td></tr><tr><td><Solución de base de acetato de miristato de Phorbol fuerte> 5 mg/mL</fuerte></td><td>InvivoGen</td><td>Tlrl-pma</td><td></td></tr><tr><td>BSA 1% albúmina sérica bovina &nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>5470</td><td></td></tr><tr><td>DMSO&nbsp;</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Miller LB</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>&nbsp; L3522</td><td></td></tr><tr><td>Suero normal de la misma especie que el anticuerpo secundario</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>NS02L-1ML</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehido</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>441244</td><td></td></tr></tbody></table>

ingeniería 3d flipwell para el desarrollo de sistemas asíncronos para terapias toxicológicas e inmunomoduladoras en células bacterianas, intestinales e inmunitarias

3D Flipwell Engineering for Developing Asynchronous Systems for Toxicologic and Immunomodulatory Therapies in Bacterial, Gut, and Immune Cells

Ingeniería 3D Flipwell para el desarrollo de sistemas asíncronos para terapias toxicológicas e inmunomoduladoras en células bacterianas, intestinales e inmunitarias

To study the roles of bacterial secretome in immune cell polarization and gut mucosal homeostasis, we developed a 3-dimensional co-culture model using ...

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Research

Investigación

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Un sistema de cultivo celular giratorio que permite a las células epiteliales de crecer bajo condiciones fisiológicas resultantes en 3-D formación de agregados celulares se describe. Los agregados generado...

El cultivo y aplicaciones de la Rotación de biorreactor de pared de los vasos Derivado de modelos 3D de las células epiteliales

Esta tecnología de impresión microfluídica 3D imprime matrices de células en superficies sumergidas.  Describimos cómo las matrices de células se entregan microfluídicamente en celdas de flujo 3D sobre superficies sumergidas.  Al imprimir en superficies sumergidas, se produjeron microarrays celulares que permiten el cribado de fármacos y la evaluación de la citotoxicidad en una multitud de áreas.

La impresión Sumergido de células sobre una superficie modificada utilizando un flujo continuo Microspotter

Este protocolo describe la fabricación de microcryogels elástico macroporoso 3D integrando microfabricación con tecnología cryogelation. A cargar con las células, se generan microtissues 3D, que puede ser fácilmente inyectados en vivo para facilitar la terapia regenerativa o montado en arreglos de discos para en vitro screening de drogas de alto rendimiento.

Microtissues 3D para la terapia regenerativa inyectable y drogas de alto rendimiento

El dispositivo o placa de transimmunización (TI) y los protocolos relacionados se han desarrollado para replicar las características clave de la fotoquimioterapia extracorpórea (ECP), en un entorno experimental, lo que permite la producción de células (DCs) para la inmunoterapia oncológica.

Nuevo protocolo para la generación de células dendríticas inmunogénicas fisiológicas

Hemos expuesto un sistema microfisiológico (MPS) con organoides intestinales y hepáticos al paracetamol (APAP). Este artículo describe los métodos para la producción de organoides y las evaluaciones de propiedades farmacocinéticas y toxicológicas APAP en el MPS. También describe los análisis de funcionalidad tisular necesarios para validar los resultados.

Un sistema microfisiológico intestinal/hepático para la evaluación farmacocinética y toxicológica de fármacos

En la era de la inmunoterapia y el perfil genómico unicelular, la biología del cáncer requiere nuevas herramientas in vitro y computacionales para investigar la interfaz tumor-inmune en un contexto espaciotemporal adecuado. Describimos protocolos para explotar cocultivos microfluídicos inmunes al tumor en entornos 2D y 3D, compatibles con el monitoreo dinámico y multiparamétrico de las funciones celulares.

Modelos de cocultivo microfluídico para diseccionar la respuesta inmune en microambientes tumorales in vitro

Aquí describimos la construcción de un sistema modelo básico tridimensional (3D) de líneas celulares intestinales y un protocolo de inclusión de parafina para la evaluación microscópica óptica de equivalentes intestinales fijos. La tinción de proteínas seleccionadas permite el análisis de múltiples parámetros visuales de un solo experimento para su uso potencial en estudios preclínicos de detección de fármacos.

Sistema Modelo Intestinal Tridimensional Básico (3D) con un Componente Inmune

La integración de organoides intestinales caninos y un sistema microfluídico Gut-on-a-Chip ofrece modelos traslacionales relevantes para las enfermedades intestinales humanas. Los protocolos presentados permiten la morfogénesis en 3D y el modelado dinámico in vitro del intestino, lo que ayuda en el desarrollo de tratamientos efectivos para enfermedades intestinales en perros y humanos con One Health.

Morfogénesis tridimensional en el intestino canino en un chip utilizando organoides intestinales derivados de pacientes con enfermedad inflamatoria intestinal

En este artículo se describe un protocolo de inmunofluorescencia multiplex optimizado para caracterizar la arquitectura tridimensional de las metástasis peritoneales.

Imágenes tridimensionales de tejido tumoral mediante el enfoque de blanqueamiento iterativo que extiende la multiplexidad

La implementación de una técnica de fotoirradiación versátil y de bajo coste con el método manual IBEX permite obtener una imagen óptima del tejido humano con una importante autofluorescencia nativa. Este protocolo detalla cómo obtener imágenes multiplexadas de portaobjetos completos a partir de muestras clínicas archivadas utilizando un microscopio invertido, reactivos ampliamente disponibles y software de código abierto para la alineación y el procesamiento de imágenes.

El flujo de trabajo optimizado para el blanqueo iterativo amplía la obtención de imágenes de multiplexidad de muestras clínicas altamente autofluorescentes

Aprende a construir un sistema de co-cultivo 3D que imita la mucosa intestinal para evaluar respuestas a fármacos y estudiar interacciones entre bacterias, células epiteliales y macrófagos. Este método facilita el descubrimiento de nuevas estrategias inmunoterapéuticas basadas en metabolitos bacterianos.

Ingeniería 3D Flipwell para el desarrollo de sistemas asíncronos para terapias toxicológicas e inmunomoduladoras en células bacterianas, intestinales e inmunitarias (Video) | JoVE Journal

Ingeniería 3D Flipwell para el desarrollo de sistemas asíncronos para terapias toxicológicas e inmunomoduladoras en células bacterianas, intestinales e inmunitarias

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