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DOI: 10.3791/68887-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This study investigates how yeast (S. cerevisiae) cells manage chromosome segregation during mitosis, utilizing synchronized cell cycles to observe cellular dynamics. By employing alpha-factor arrest in BAR1 mutants, researchers can achieve a precise G1 arrest to monitor changes in protein localization and activity throughout the cell cycle.
Este protocolo detalla dos métodos de detención del ciclo celular de levadura y liberación opcional, y elabora el uso de microscopía de fluorescencia para estudiar los procesos dependientes del ciclo celular en S. cerevisiae.
Estudiamos cómo las células en división transmiten fielmente sus cromosomas durante la mitosis, centrándonos en las máquinas moleculares y los mecanismos que aseguran una segregación precisa de los cromosomas. Sincronizamos células para estudiar procesos moleculares que cambian con el ciclo celular. Sin estos métodos, los cambios clave estarían ocultos en una población celular no sincronizada.
En comparación con otros métodos de sincronización, el arresto por factor alfa en mutantes BAR1 proporciona un arresto G1 más limpio y reversible, permitiéndonos seguir el progreso sincrónico de un cultivo de levadura completo a lo largo del ciclo. Nuestro trabajo revela cambios dinámicos en la localización y actividad de proteínas a lo largo del ciclo celular, arrojando luz sobre procesos mitóticos clave, como la segregación cromosómica y el mantenimiento del husoma. Para empezar, inocular la levadura en 25 mililitros de medio YPAD e incubar durante la noche para alcanzar una densidad óptica de 600 nanómetros entre 0,5 y 2,0.
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