Name: Manipulación y análisis de procesos dependientes del ciclo celular en levaduras en ciernes (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-26T14:10:00.000+00:00
Duration: 8 min 13 s
Description: Aprende a sincronizar ciclos celulares en Saccharomyces cerevisiae mediante arresto con alfa-factor para estudiar la segregación cromosómica. Este método revela cambios dinámicos en la localización proteica durante la mitosis.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>?-factor</td><td>Instalación de Síntesis Núcleo de la Universidad de Utah</td><td></td><td>Secuencia: WHWLQLKPGQPMY</td></tr><tr><td>Tubos Eppendorf de 1,5 mL</td><td>Axygen</td><td>MCT-175-C</td><td></td></tr><tr><td>Mezcla dNTP de 10mM</td><td>Termo Científica</td><td>R0193</td><td></td></tr><tr><td>Tubos cónicos de 50 mL</td><td>Greiner Bio-One</td><td>227 261</td><td></td></tr><tr><td>5x buffer de reacción HF Phusion</td><td>New England BioLabs</td><td>B0518S</td><td></td></tr><tr><td>Ácido acético, glaciar</td><td>Fisher Chemical</td><td>BP2401C-212</td><td></td></tr><tr><td>Sal de hemisulfato de adenina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9126-100G</td><td></td></tr><tr><td>Agar, granulado</td><td>Apex Chemicals and Reactivos</td><td>20-275</td><td></td></tr><tr><td>agarosa</td><td>Productos de Apex Bioresearch</td><td>20-102GP</td><td></td></tr><tr><td>Esterilizador de vapor Autoclave Amsco Century</td><td>Steris</td><td>SV-1262</td><td></td></tr><tr><td>Agua DI autoclave</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Auxina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Cat#I3750-5G-A; CAS: 87-51-4</td><td></td></tr><tr><td>Cargille Laser Liquid</td><td>Laboratorios Cargille</td><td>20130</td><td></td></tr><tr><td>D-Sorbitol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S1876-500G</td><td></td></tr><tr><td>DAPI (40,6-Diamidino-2-Fenilindol, Dihidrocloruro)</td><td>Sondas moleculares</td><td>Cat#D1306</td><td></td></tr><tr><td>Sal sódica de ácido desoxirribonucleico procedente de testiculos de salmón</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D1626</td><td></td></tr><tr><td>Dextrosa</td><td>Fisher Chemical</td><td>D16-10</td><td></td></tr><tr><td>Tetraacetato de etilendiamina disódico</td><td>Fisher Chemical</td><td>S811-10</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Termo Científica</td><td>20688</td><td></td></tr><tr><td>FIJI/ImageJ2 vs 2.14.0/1.54f</td><td>ImageJ2</td><td>https://imagej.net/software/fiji/</td><td></td></tr><tr><td>Mezclador de vórtices de velocidad fija</td><td>VWR</td><td>https://dabos.com/product/vortex-mixers-vwr-fixed-speed-vortex-mixer-00001-24763?srsltid=AfmBOoo5TH0aoExvrrrphDaFt8XAsDqLvkjxtEUj1QWlFbWh7_gwzMObLT4&gQT=2</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio fluorescente DV Ultra</td><td>Leica</td><td>https://www.leica-microsystems.com/c/am/lsr-w/fluorescence-microscope-wf/?nlc=20250214-SFDC-022570&utm_source=google&utm_medium=cpc&utm_campaign=25-AM-LSR-L3-LSPO-LSWF-SE-Google-Ads-WF-Thunder-Search&utm_content=text_ad&utm_term=fluorescence%20microscopes&gad_source=1&gad_campaignid=170130111&gbraid=0AAAAADrbsAF-dGDbxzgT8m_cvXSlf4BB0&gclid=CjwKCAjwmenCBhA4EiwAtVjzmkMJUGFksaHezZvlBUlbbS1tR8RqXP24dbSRzcRgTT8RmJy7nyeThBoC3yQQAvD_BwE</td><td>Serie #: NV01063. Ya no soportado</td></tr><tr><td>Formaldehído</td><td>Fisher Chemical</td><td>Cat#F79-500</td><td></td></tr><tr><td>Aparato de gel</td><td>Termo Científica</td><td>Owl EasyCast B1</td><td></td></tr><tr><td>Mezcla de escaleras de ADN GeneRuler</td><td>Fermentas</td><td>SM0333</td><td></td></tr><tr><td>Cuentas de vidrio</td><td>Fisher Scientific</td><td>11312A</td><td></td></tr><tr><td>Diapositivas de vidrio</td><td>VWR</td><td>48300-026</td><td></td></tr><tr><td>Innova 2300 Plataforma Agitadora</td><td>New Brunswick</td><td>NB-2300</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Kimtech</td><td>06-666</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga de laboratorio para tubos de 1,5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>2525</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga de laboratorio para tubos de 50 mL</td><td>Eppendorf</td><td>5804</td><td></td></tr><tr><td>Dihidrato de acetato de litio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L4158-250G</td><td></td></tr><tr><td>Master cycler nexus X2</td><td>eppendorf</td><td>https://www.eppendorf.com/us-en/Products/PCR/Thermocyclers/Mastercycler-nexus-X2-p-PF-82586</td><td></td></tr><tr><td>Micropipetas p2, p20, p200 y p1000 y puntas correspondientes</td><td>Rainin</td><td>L-2XLS+R, L-20XLS-R, L-200XLS-R, L-1000XLS-R</td><td></td></tr><tr><td>Vidrio de la cubierta del microscopio</td><td>Fisher Scientific</td><td>12541014</td><td></td></tr><tr><td>Nocodazol</td><td>Calbiochem</td><td>Cat#487928; CAS: 31430-18-9; Lote#B35705</td><td></td></tr><tr><td>Orange G</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>O7252</td><td></td></tr><tr><td>CLAVIJA</td><td>Investigación Hampton</td><td>HR2-591</td><td></td></tr><tr><td>Peptona granulada&nbsp;</td><td>Biorreactivos de Fisher</td><td>BP9725-5</td><td></td></tr><tr><td>Polimerasa de ADN HF Phusion</td><td>New England BioLabs</td><td>M0530L</td><td></td></tr><tr><td>Pipet-X</td><td>Rainin</td><td>PX-100R</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato de potasio, dibásico</td><td>Termo Científica</td><td>424195000</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato de potasio, monobásico</td><td>Termo Científica</td><td>424200025</td><td></td></tr><tr><td>Fuente de energía</td><td>Bio-Rad</td><td>23786</td><td></td></tr><tr><td>Empezar a adquirir Ultra 1.2.2</td><td>softWoRx Cytiva</td><td>Obtención con DV Ultra</td><td></td></tr><tr><td>Tris Base</td><td>Biorreactivos de Fisher</td><td>BP152-10</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>9002-93-1</td><td></td></tr><tr><td>rotador de tubos</td><td>VWR</td><td>10136-084</td><td></td></tr><tr><td>Baños de agua</td><td>VWR</td><td>WBE10A11B</td><td></td></tr><tr><td>Agua, ultra pura</td><td>Productos de Apex Bioresearch</td><td>18-194</td><td></td></tr><tr><td>Extracto de levadura granulado</td><td>Biorreactivos de Fisher</td><td>BP9727-5</td><td></td></tr></tbody></table>

manipulación y análisis de procesos dependientes del ciclo celular en levaduras en ciernes

Manipulation and Analysis of Cell Cycle-Dependent Processes in Budding Yeast

Manipulación y análisis de procesos dependientes del ciclo celular en levaduras en ciernes

Eukaryotic cells follow a conserved cell cycle that regulates diverse processes, including DNA maintenance and organelle homeostasis. Studying cellular ...

manipulation-analysis-cell-cycle-dependent-processes-budding

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Deleción del gen y la sobreexpresión de la proteína son métodos comunes para el estudio de las funciones de las proteínas. En este artículo se describe un protocolo para el análisis del fenotipo de desarrollo en función de la concentración de proteínas en la población y de una sola célula en los...

Análisis de la elaboración de un fenotipo morfológico en función de la concentración de proteínas en la levadura en ciernes

Determinar la posición del ciclo celular de una población de células, o la comprensión de cómo afectan a la proliferación de señales, puede ser fácilmente medido por citometría de flujo utilizando este protocolo. Se presenta un enfoque simple experimental para la tinción de células y la cuantificación de su posición en el ciclo celular.

Análisis de la posición del ciclo celular en células de mamífero

Se presenta un protocolo sencillo para obtener películas de microscopía de fluorescencia de las células de levadura en crecimiento, y un paquete de software basado en GUI para extraer los datos de series de tiempo de una sola célula. El análisis incluye linaje automático y la asignación por división de tiempo integrado con inspección visual y manual de conservación de los datos de seguimiento.

La adquisición de fluorescencia Time-lapse películas de levadura en ciernes y el análisis de la dinámica de una sola célula con injertos

La levadura de fisión, Schizosaccharomyces pombe es un excelente sistema modelo para estudiar la citocinesis, la etapa final en la división celular. Aquí se describe un método de microscopía para analizar diferentes eventos cytokinetic en células de levadura de fisión en vivo.

Análisis espacio-temporal de cytokinetic Eventos en la levadura de fisión

Levadura en ciernes es un modelo ventajoso para el estudio de la dinámica de microtúbulos in vivo debido a sus potentes genética y la simplicidad de su citoesqueleto de microtúbulos. El siguiente protocolo describe cómo transformar células de levadura y la cultura, adquirir imágenes de microscopía confocal, y analizar cuantitativamente la dinámica de microtúbulos en las células vivas de levadura.

Imágenes de alta resolución y análisis de la dinámica de microtúbulos astrales individuales de levadura en ciernes

Inherent Dynamics Visualizer es un paquete de visualización interactiva que se conecta a una herramienta de inferencia de red reguladora de genes para una generación mejorada y optimizada de modelos de red funcionales. El visualizador se puede utilizar para tomar decisiones más informadas para parametrizar la herramienta de inferencia, aumentando así la confianza en los modelos resultantes.

Inherent Dynamics Visualizer, una aplicación interactiva para evaluar y visualizar los resultados de una canalización de inferencia de red reguladora de genes

La microscopía de lapso de tiempo es una herramienta valiosa para estudiar la meiosis en levaduras en ciernes. Este protocolo describe un método que combina la sincronización del ciclo celular, la microscopía de lapso de tiempo y el agotamiento condicional de una proteína diana para demostrar cómo estudiar la función de una proteína específica durante la segregación cromosómica meiótica.

Uso de microscopía de lapso de tiempo y agotamiento nuclear de proteínas en etapa específica para estudiar la meiosis en S. cerevisiae

Un desafío de analizar experimentos sincronizados de series de tiempo es que los experimentos a menudo difieren en la duración de la recuperación de la sincronía y el período del ciclo celular. Por lo tanto, las mediciones de diferentes experimentos no pueden analizarse en conjunto o compararse fácilmente. Aquí, describimos un método para alinear experimentos para permitir comparaciones específicas de fase.

Alineación de datos sincronizados de series temporales utilizando el modelo de caracterización de la pérdida de sincronía del ciclo celular para comparaciones entre experimentos

En este artículo presentamos un protocolo general para la medición de la duración de la vida replicativa de las células madre de la levadura.

Medición de Span replicativa vida en la levadura en ciernes

Cuantitativa de células vivas por fluorescencia microscopia análisis de la levadura de fisión

Aprende a sincronizar ciclos celulares en Saccharomyces cerevisiae mediante arresto con alfa-factor para estudiar la segregación cromosómica. Este método revela cambios dinámicos en la localización proteica durante la mitosis.

Manipulación y análisis de procesos dependientes del ciclo celular en levaduras en ciernes

Explorar más videos