Ici, nous démontrons la fabrication de base de collagène, le tissu des constructions contenant myoblastes squelettiques. Ces constructions en 3-D modifiés peuvent être utilisés pour remplacer ou réparer des tissus In vivo. Pour nos fins, nous avons conçu ces comme un conduit auriculo-ventriculaire électriques pour la réparation de bloc cardiaque complet [1].
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Article de méthode
Fabrication de constructions myogéniques de l'ingénierie tissulaire
Dans cet article
Résumé
Résumé
Malgré le fait que les stimulateurs électroniques sont des dispositifs de sauvetage médical, leur performance à long terme chez les patients pédiatriques peut être problématique du fait des restrictions imposées par la petite taille de l'enfant et leur croissance inévitable. Par conséquent, il ya un véritable besoin pour des thérapies innovantes conçues spécifiquement pour les patients pédiatriques atteints de troubles du rythme cardiaque. Nous proposons qu'une alternative conducteur biologiques constitués d'une matrice à base de collagène autologue contenant des cellules dérivées pourrait mieux s'adapter à la croissance, réduire le besoin de chirurgies récurrentes, et d'améliorer grandement la qualité de vie de ces patients. Dans la présente étude, nous décrivons une procédure pour intégrer primaires du squelette des cultures de cellules myoblastes dans une matrice d'hydrogel à la mode d'une construction des tissus implantables chirurgicalement qui servira comme un conduit électrique entre les chambres supérieures et inférieures du cœur. Finalement, nous prévoyons d'utiliser ce type d'ingénierie tissulaire pour restaurer la conduction électrique auriculo-ventriculaire chez les enfants présentant un bloc auriculo-ventriculaire complet. Compte tenu de cela, nous isolons les myoblastes dans les muscles squelettiques de rats Lewis néonatale et la plaque-les sur la laminine revêtement des boîtes de culture tissulaire en utilisant une version modifiée de protocoles établis
Protocole
Partie 1: Réunir construire des moules de fonderie
- Utilisez une lame de rasoir pour réduire de moitié tube en silicone (VWR) et le couper en 3 morceaux cm de long.
- Déposer une goutte d'implant de qualité adhésive silicone RTV (Rhodia) à l'intérieur de chaque extrémité du tube.
- Vite placer un petit morceau (1 cm x 1 cm) de filet de polyester (McMaster-Carr) sur la chute d'adhésif de silicone et de l'aligner avec le bout du tuyau. Cela fournira une surface légèrement surélevé et plate pour la fixation de construire. Répétez l'opération pour l'autre extrémité.
- Laisser le moule à sécher à température ambian....
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Discussion
Les moules dans lesquels la construction des tissus seront jetés peuvent être faites dans n'importe quelle forme et taille, mais il doit y avoir au moins deux points de fixation. Sinon, la matrice et les cellules forment une structure sphérique et les cellules meurent. Dans le présent protocole, nous décrivons l'utilisation d'un maillage de polyester à cet effet, mais nous avons aussi utilisé avec succès maille d'acier inoxydable. Évidemment, les grands moules, il faudra plus de cellules et un plus grand.......
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Déclarations de divulgation
Expériences sur les animaux ont été effectuées en conformité avec les directives et les règlements énoncés par le soin des animaux et du Comité institutionnel utilisation à l'Hôpital pour enfants de Boston.
Remerciements
Ce travail est soutenu par des subventions de recherche du National Institutes of Health (HL068915; HL088206), un Prix du nouveau chercheur du Fonds de recherche Thrasher, et les contributions au Fonds de la conduction cardiaque au Centre hospitalier pour enfants de Boston.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Tuyau en silicone | VWR international | 60985-724 | |
| Adhésif en silicone | Rhodia Silicones | MED ADH 4300 RTV | |
| Maille en polyester | McMaster-Carr | 93185T17 | |
| Lamine | Sigma-Aldrich | L2020 | |
| Milieu nutritif F-10 HAM | Sigma-Aldrich | N6908 | |
| Sérum de veau fœtal | Atlanta Biologicals | S11550 | |
| Pénicilline/streptomycine | Invitrogen | 15140 | |
| Fungizone | Invitrogen | 15290-018 | |
| Dispase-2 | Roche Group | 10295825001 | |
| Collagénase 2 | Worthington Biochemical | 46H8863 | |
| Facteur de croissance des fibroblastes de base | Promega Corp. | G5071 | |
| Plaques de culture de 150 mm | BD Biosciences | 353025 | |
| Trypsine-EDTA 0,05 % (1X) | GIBCO, by Life Technologies | 25300 | |
| Solution saline tamponnée de Hanks 1X | Invitrogen | 14170-112 | |
| NaHCO3 à 7,5 % | GIBCO, by Life Technologies | 25080-094 | |
| Filtre cellulaire de 70 μm | BD Biosciences | 352350 | |
| Plaques à 6 puits | BD Biosciences | 353046 | |
| Flacon conique de 50 mL | BD Biosciences | 352098 | |
| Flacon conique de 15 mL | BD Biosciences | 352099 | |
| Filtre de 0,2 μm | Nalge Nunc international | 194-2520 |
Références
- Choi, Y. H. Cardiac conduction through engineered tissue. Am J Pathol. 169 (1), 72-85 (2006).
- Rando, T. A., Blau, H. M. Primary mouse myoblast purification, characterization, and transplantation for cell-mediated gene therapy. J Cell Biol. 125
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Réimpressions et autorisations
