Injection de mouches drosophiles adultes : méthode d’administration d’un composé ou d’une étiquette

Résumé

Source : Nazario-Toole, A. E., Wu, L. P. Évaluation de la réponse immunitaire cellulaire de la mouche des fruits, Drosophila melanogaster, à l’aide d’un test de phagocytose in vivo. J. Vis. Exp. (2019).

Cette vidéo décrit comment effectuer une injection de mouches adultes vivantes et comprend un exemple de protocole dans lequel des particules marquées et du bleu de trypan sont injectés dans l’abdomen des mouches pour doser la phagocytose.

Protocole

Ce protocole est un extrait de Nazario-Toole et Wu, Assessing the Cellular Immune Response of the Fruit Fly, Drosophila melanogaster, Using an In Vivo Phagocytosis Assay, J. Vis. Exp. (2019).

1. Préparer les particules de fluorescéine pour l’injection

1. Reconstituer 10 mg de particules de bactéries tuées par la chaleur disponibles dans le commerce, marquées à la fluorescéine (voir le tableau des matières) jusqu’à une concentration de base de 10 mg/mL en ajoutant 990 μL stériles 1x PBS et 10 μL 50 mM d’azoture de sodium. Vortex à mélanger.
   1. Diviser en aliquotes à usage unique d....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
5430-10 Kit PicoNozzle	World Precision Instruments	5430-10	Support pour pipette de 1,0 mm
E. coli (souche K-12) Bioparticules, conjuguée de fluorescéine	Invitrogen	E2861	E. coli tué marqué avec FITC (Fluorescéine). À utiliser pour tester la reconnaissance des phagocytes et l’absorption des bactéries à Gram négatif. (~494/~518 nm)
Extracteur de pipette à aiguille	David Kopf Instruments	Modèle 725
Pompe pneumatique PicoPump PV820	World Precision Instruments	SYS-PV820	La PicoPump pneumatique PV820 de World Precision Instruments utilise des pressions différentielles pour retenir le liquide dans l’aiguille de verre entre les injections. L’utilisateur contrôle manuellement de courtes rafales de pression de gaz pour expulser le liquide, ce qui permet de fournir des volumes inférieurs au nanolitre. La quantité de liquide délivrée dépend de deux variables principales : la taille de l’ouverture de l’aiguille de verre et la durée pendant laquelle la pression d’injection est appliquée. réglez l’instrument sur le mode « TIMED » de 100 ms.
Capillaires en verre à paroi mince	World Precision Instruments	TW100F-3	Aiguilles pour injection. Diamètre extérieur = 1,0 mm
Trypan Blue Solution (0,4 %)	Sigma	T8154	Utilisé pour éteindre la fluorescence extracellulaire des particules marquées Fluorescéine, Alexa Fluor ou Texas Red.