Overview
此视频描述了使用脑内注射将化合物输送到成年斑马鱼心脏的技术。
Protocol
1. 准备鱼进行体内注射
- 用网捕捉成年斑马鱼（达尼奥·雷里奥），并将其转移到麻醉液中。
- 1−2分钟后，当鱼停止游泳，操作体的运动减少时，用塑料勺触摸鱼，以确保它不会对任何接触做出反应。
- 快速小心地将鱼用勺子转移到湿海绵的凹槽中，并向上输送腹腔。鱼头应该远离操作员的主导手。
2. 微投入佩里卡迪姆
- 在立体显微镜下，仔细观察鱼皮下跳动的心脏的运动。视觉上确定跳动的心脏上方的注射点，并在由心室软皮质板定义的三角形中间 （图1D）。相对于身体轴（ 图1E）的30−45°度角插入毛细毛。轻轻穿透皮肤与微胶囊的尖端进入围膜 （图1C）。最佳切入点更接近腹部，而不是头部。
注： 不要将毛细管插入身体和心脏太深，因为这会对器官造成伤害。在心脏穿刺的情况下，针头通常充满血液。如果发生这种情况，取出毛细毛，将鱼排除在实验之外。 - 一旦针头在腹膜内，通过按下微注射器装置的踏板进行完全注射。
注： 小心不要将空气注入胸腔。 - 注射后，轻轻地从胸腔中取出毛细毛，并立即将鱼转移到带系统水的鱼缸中以进行回收。
- 监测鱼，直到从麻醉中完全恢复。
- 在所需的时间点收集心脏，并准备进一步分析。
注： 如果鱼在30年代内不能恢复手术器的运动，用塑料移液器将水挤入刺中，使鱼复活。
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Representative Results
图1：成年斑马鱼的宫内注射（ IT） 。 （A） 用细丝（6英寸，直径1.0毫米）拉微注射毛细细和使用的针拉程序值的照片。（B） 用细丝（6英寸，直径1.0毫米）拉微注射毛细长的照片，里面装满了含有10%苯酚红色的2.5μL溶液。针头的拉尖最大长7毫米。（C） IT 注射程序的示意图表示。（D） IT 注射过程的照片。这个数字已经从比塞等人修改。面板 C 和 D 中的数字与程序的相同步骤相对应：（1） 鱼被放在湿海绵上的腹侧。穿刺部位（三角形中的红点）位于靠近刺的胸部中心。（2） 针头渗透到围膜中。红点表示穿刺部位。（3） 通过观察红溶液在围膜腔中的扩散来监测注射。（E） IT 注射方案。注射毛细细线和身体轴之间的角度应在 30° 到 45° 之间，以避免心脏穿刺。（F） 在 IT 注入指示体积后 1 小时拍摄鱼胸的照片。白色箭头指向红色组织，这可能表示内出血
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Macroscope (binocular) | M400 | with Apozoom | |
| Micro-injector femtojet | Eppendorf | 5247 0034 77 | |
| Microloaders femtotips | Eppendorf | 5242 956.003 | |
| Micropipette glass needles type C | WPI | TW100F-6 | thin-wall capillary |
| Micropipette puller model P-87 | Flaming/Brown | 20081016 | filament box 2.5 mm x 4.5 mm |
| Sponge | any | any | dim. carved sponge 7cm x 3 cm x 1 cm |
| Tricaine (Anestethic) | Sigma | E10521 |
