Abstract
In vivo biomedisch onderzoek is cruciaal om te vertalen in vitro bevindingen naar klinische vooruitgang. Kleine academische instellingen met beperkte middelen vinden het vrijwel onmogelijk om te bouwen en typische knaagdieren faciliteiten voor onderzoek te blijven. Zebravis onderzoek is aangetoond een waardevol alternatief voor in vivo onderzoek farmacologie, fysiologie, ontwikkeling en genetische studies. Dit artikel toont aan dat een functionele zebravis faciliteit kan worden gebouwd in een eenvoudige en betaalbare manier. We tonen aan dat een dergelijke voorziening kan worden gebouwd rond een werkdag met minimale hulpmiddelen en expertise. De kosten van de 27 1.8 L aquarium zebravis faciliteit gebouwd in deze studie was ongeveer $ 1500. We schatten dat het onderhoud van een eerste werkende 150 vis kolonie gedurende 3 maanden is $ 1.000. Dit project betrokken studenten, die werden ingevoerd om aquaculturing van zebravissen voor onderzoek voorstelt.
Introduction
In vivo modellen zijn essentieel in het uitvoeren van uitgebreide biomedisch onderzoek, omdat zij toestaan dat in vitro onderzoek worden vertaald op het systeem en organismaal niveau. Bijvoorbeeld heeft onderzoek met kleine zoogdieren, namelijk knaagdieren, zijn noodzakelijk gebleken bij de ontwikkeling van geneesmiddelen en de verbetering van de beschikbare geneesmiddelen. Het is echter mogelijk de complexiteit (financieel en logistiek) maken het vrijwel onmogelijk om te bouwen en te onderhouden knaagdieren faciliteiten voor experimenten stelt bij kleine onderzoek academische instellingen. Toch kunnen in vivo onderzoek worden uitgevoerd op andere diersoorten die minder uitgebreid logistiek vereisen. Zebravis (Danio rerio) zijn met succes gebruikt als een in vivo model genetica, ontwikkeling, pathofysiologie en farmacologie 1,2,10,11,12 bestuderen. De voor zebravis experimenteren huis faciliteiten zijn relatief eenvoudig en aanzienlijk goedkoper in vergelijking met rOdent faciliteiten. Kim et al. 3 onlangs beschreven een 80 tank zebravis behuizing dat kan worden gebouwd voor ongeveer $ 1500, welke beide delen en arbeidskosten omvat. Dit staat in schril contrast met de bijna $ 8500 die nodig zou zijn om een kant en klare, 80 tanksysteem kopen bij een aantal commerciële leveranciers. Echter, de beschrijving door Kim et al. kan ingewikkeld en moeilijk te volgen voor beginners vis onderzoek. Wij geloven dat een zebravis faciliteit in vereenvoudigde manier kan worden geconstrueerd voor een investering van $ 1.500.
De oprichting van een in vivo faciliteit in kleine academische instellingen biedt hun faculteiten een extra instrument om krachtiger en grondig onderzoek te leveren. In vitro gegevens ondersteund door in vivo resultaten produceren in het algemeen uitgebreider biomedisch onderzoek dan gegevens die zijn verkregen met behulp van alleen in vitro benaderingen. Daarom is deuitvoering van een in vivo onderzoek faciliteit zal een aanzienlijke verbetering van de instelling succes in haar algemene onderzoek inspanningen (blootstelling student aan onderzoek, publicaties, communicatie, de uitoefening van externe financiering, enz.).
De bouw van een zebravis faciliteit zoals die in deze studie beschreven is ideaal voor onderzoek academische instellingen met beperkte faciliteiten (of instellingen zonder in vivo onderzoeksfaciliteiten) tijdens vernauwen financiële tijden.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
LET OP: Deze protocollen volgen de richtlijnen van IACUC van Presbyterian College.
1. Acquire Materialen Vermeld in tabel 1.
2. Zet de 5 Shelf Chrome Volgens instructies van de fabrikant. Dit wordt gebruikt om de faciliteit huis.
3. Construct het waterreservoir en de filtratie-systeem (de figuren 1A en 2).
- Met behulp van Figuur 1A als een gids, lay-out van de 18 liter emmer, pomp, filters en UV-lamp tot de uiteindelijke installatie locatie en grootte te bepalen.
- Zodra onderdelen worden aangelegd, meten en snijd de ¾ "PVC buis om de lengte die nodig is voor de montage. Variëren de lengtes van alle buizen volgens bepaalde ruimte behoeften en beperkingen.
- Monteer de buizen en hulpstukken zoals eerder aangelegd met behulp van de PVC-primer en cement, zie hieronder (3.3.2 en 3.3.3).
- Schuur de snijkanten van de pijp met schuurpapier totdat ze glad eend er geen puin.
- Prime de buitenkant van de buis en de binnenkant van de fitting met het gekochte PVC primer met de meegeleverde wattenstaafje uit de PVC primer.
- Cement de buis en fitting elkaar door toepassing van de PVC cement aan de buitenkant van de buis met de meegeleverde wattenstaafje. Herhaal dit voor alle stappen die PVC cementeren nodig.
- Plaats de 18 liter emmer aan een kant van de schapconstructie.
- Installeer een schutbordconnector in de zijkant van het reservoir.
- Bevestig een ¾ "PVC pijp aan het schutbord.
- Sluit het andere uiteinde van de ¾ "pijp aan de inlaat van de pomp met behulp van een ¾" schroefdraad maken fitting.
- Sluit de filters aan de pomp met behulp van twee 90 graden bochten en ¾ "PVC pijp.
- Gebruik een papieren filter gevolgd door een actieve koolfilter om filteren vuil en verminderen chloor en chemische niveaus in het water.
- Sluit de UV-lamp om de filters te according de instructies van de fabrikant.
- Bevestig de pomp en filtersysteem om de bovenkant van de eerste plank van het rek met behulp van draad banden. Variëren de volgorde van de montage en bevestiging volgens de grootte en de indeling van de plank / rek gekozen.
- Voeg 1 bioball per liter water aan het waterreservoir zodra de pomp en filtersysteem zijn gemonteerd en bevestigd aan de plank.
4. Construeer de belangrijkste toevoerleiding (figuren 1B en 2).
- Meten en snijd een stukje van ¾ "PVC pijp naar de UV-lamp aan te sluiten op de stroomvoorziening
- Gebruik een ¾ "PVC T-stuk op de stroomvoorziening lijn beginnen met het aansluiten van de tee tot de ¾" PVC uitlaatgassen afkomstig van de UV-filter. .
- Toevoegen aan-uit klep op de bodem van de PVC T-stuk om te dienen als een afvoer voor het onderhoud spoelen van het systeem.
- Start de belangrijkste toevoerleiding vanaf de top van de ¾ "PVC T-stuk door het meten en snijden ¾" PVCbuis op de gewenste lengte toevoerleidingen voor elk van de planken op het rek.
- Installeer ¾ "PVC-stukken voor de horizontale lijnen die elke plank van het rek zal treden.
- Optioneel (en voorgesteld), voeg een ¾ "aan-uit afsluiter voor elk schap toevoerleiding om voor isolatie van elk schap en een modulaire opbouw van het systeem.
- Gebruik een ¾ "PVC pijp als een drukverlagende lijn op de bovenste plank. Indien deze lijn loopt aan de achterzijde van de plank, deze plank voor opslag. Eindigen de drukverlagende lijn in de belangrijkste uitlaatlijn (Figuur 1B) met een ¾ "on-off ventiel.
- Zodra de bovenstaande stappen zijn voltooid, prime en cement de PVC pijp samen zoals eerder gedaan bij de bouw van het reservoir en filtersysteem.
5. Construeer de belangrijkste uitlaatlijn (figuren 1C en 2).
- Voer de verticale lengte van de belangrijkste uitlaatleiding aan de andere kant van het rooster FROM De belangrijkste toevoerleiding. Gebruik 2 "PVC pijp voor deze verticale lijn aan de hoofdtoevoerleiding ontvangt bovenaan afvoerleidingen van de aquaria van elk schap.
- Snijd de stukken van 2 "PVC pijp voor de verticale belangrijkste uitlaatlijn en gebruik 2" PVC-stukken aan het aquarium afvoerleidingen van elke plank te ontvangen. Beëindig de belangrijkste uitlaat lijn in de voorraad tank om het gerecycleerde water te verdrijven dan een spons filter.
- Snijd een één inch openen van de gehele lengte van de 2 "PVC pijp stukken en hechten aan verticale belangrijkste uitlaatlijn met PVC-stukken voor de horizontale afvoerleidingen van de aquaria.
- Cap de 2 "horizontale afvoerleidingen met een 2" PVC-cap.
- Prime en cement de stukken met behulp van de nodige hulpstukken (connectoren, tepels of ellebogen).
6. Construct kweekvijvers (figuur 3).
- Met de boor, snijd een 1 1/8 "opening aan de achterkant van het aquarium 1" onder de bovenkant met een gatenzaag.
- Beugel en draai een 90 graden 3/4 "schroefdraad PVC elleboog aan de mannelijke adapter aan het aquarium uitlaatpijp te creëren. Voeg een stuk fijn gaas voor vastschroeven van de deelneming moer aan zebravis gaan door het uitlaatsysteem voorkomen.
- Leg de vis tank met zijn uitlaatpijp einde in de open ruimte van de drooglegging lijn achter de tanks
7. Vanaf het watersysteem
- In verscheidene houders, zoals die waarmee het reservoir meten driemaal de hoeveelheid water aanwezig in het systeem. Laat dit water staan bij kamertemperatuur gedurende 48 uur conditioneren.
- Water toe te voegen aan het systeem en laat het circuleren voor een minimum van 3 dagen.
- Verander het water in het systeem krachtig gedurende de eerste 3 dagen na de mededeling om het stelsel van verontreinigingen ontdoen that wonen in de leidingen.
- Voeg starter zebravis en laat de stikstofcyclus te krijgen gevestigd. Normaliseren pH op een consistente 7. Houd zeven zebravis per 1,8 L, en voer ze twee keer per dag door de week en één keer per dag in het weekend, zoals voorgesteld door Linbo 4 en McNabb 6.
- Toezien op de nitraat (<75 mg / l), nitriet (<10 mg / l), en ammonium (0 mg / l) per dag gedurende de eerste week na het toevoegen van vis, en twee keer per week een keer gewenste niveaus zijn gehandhaafd met regelmatige waterverversingen .
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
De bouw van de pomp en flters System
Zodra de tandheugel is gemonteerd en ingesteld als eerste stap de pomp en filter te bouwen. De filters zijn aangesloten op de pompinstallatie en bevinden zich boven het onderste niveau van de eerste plank, waarmee eenvoudig filter onderhoud en vervanging. Evenzo wordt de UV-lamp verbonden met PVC pijp aan het filter en plaats gehouden met plastic draad banden zorgen voor een gemakkelijke vervanging van de UV-lamp als nodig is (figuur 4A). Onmiddellijk na de pomp een papieren filter, actief koolfilter, en een UV-lamp worden geïnstalleerd via PVC pijp. Bioballs worden toegevoegd aan de tank oppervlak voor de groei van bacteriën, waarbij ammoniak giftig afval wordt omgezet in nitraten. Een bioball per liter water in het systeem voldoende oppervlak om bacteriegroei te kunnen beoordelen. Het deksel van de plastic reservoir kan worden aangebracht zodat in geval van overloop de bioballen in het reservoir zal blijven en de kans op verontreinigingentie worden geminimaliseerd. Hoewel een overloop gebeurtenis onwaarschijnlijk, een afvoersysteem (toevoegen van een buis afvoer aan de bovenzijde van het reservoir) is een eenvoudige toevoeging die kan worden aan het systeem.
De bouw van de hoofdtoevoerleiding
De tweede stap is om de belangrijkste waterleiding dat elk compartiment dat de zebravis tanks (Figuur 4B) zal bevatten zal voeden monteren. Deze is aangesloten op de UV lamp met een stuk PVC pijp. Deze lijn loopt verticaal en zijwaarts naar het rek via een PVC T-stuk. Het ondereinde van de T wordt gebruikt om een stuk pvc buis dient als afvoerklep voor het hele systeem te verbinden.
De belangrijkste lijnen die de tanks horizontaal draaien tot vier compartimenten te voeden: de top van de tweede plank, boven op de derde plank, boven op de derde plank, en de onderkant van de vijfde plank. Aangezien de bovenzijde van de tweede, derde en vierde plank lijnen verstrekken water aan de aquaria die draaien op Midline van de planken. Elk van deze lijnen individueel aan-uit afsluiters, die de controle van afzonderlijke compartimenten toestaat.
Een 9 poort irrigatie verdeelstuk aan het einde van de horizontale lijnen bevestigd en deze irrigatoren Watervoorziening kweekvijvers via flexibele ¼ "buis (figuur 4B). Elke poort van de irrigatie spruitstuk heeft een ingebouwde on-off ventiel. Bovendien is een aan-uit afsluiter aan het einde van de buis aan elke haven, nabij de ingang aquarium voor gemakkelijke toegang en waterhoeveelheid. De buis wordt in de tank worden ingebracht door een gat in het deksel. Dit zal helpen bij het houden van de buis stevig in de tank geplaatst.
De lijn die op de bovenkant van de vijfde plank loopt, wordt gebruikt als een ontspanning geplaatst en wordt met een individuele afsluiter. Het wordt aanbevolen om deze lijn draaien op de achterkant van de vijfde plank hebben, zodat dit gebied kan worden gebruikt voor opslag. Sinds de main lijn loopt aan de middellijn van de zijde van het rek, is het aan de achterkant met een PVC elleboog en een stuk PVC buis gebracht en dan loopt longitudinaal (horizontaal) als de druk verlichter lijn met een andere PVC elleboog en een stuk van PVC pijp. De druk reliever lijn eindigt in de grote uitlaat lijn die verticaal loopt aan de andere kant van de rekken en eindigt in het waterreservoir (deze uitlaat lijn is gemaakt van 2 "PVC pijp, zie hieronder).
Aanleg van het Main uitlaatlijn
De derde stap is het uitlaatsysteem, die zijdelings loopt aan het rek monteren, aan de zijde waar het waterreservoir is geplaatst (figuur 4C). Dit systeem is gebouwd met behulp van 2 "PVC pijp en verzamelt het water dat afkomstig is van de druk reliever lijn, en uit het aquarium aftappen (zie aquarium bouw hieronder). De belangrijkste uitlaatlijn verticaal loopt, verbindt de druk verlichter lijn op de top van het rek en eindigt in het water reservoir. Ook de belangrijkste uitlaat lijn ontvangt de afvoer van de vis tanks door horizontale 2 "PVC-buizen die verbinding maken met de belangrijkste uitlaatlijn via PVC-stukken. Deze horizontale afvoerleidingen een 1 'langsdoorsnede het afvalwater ontvangt van de aquaria (zie hieronder). Deze horizontale afvoerleidingen draaien op de rug en op de onderste delen van de planken en een kleine helling waardoor het afvoerwater te lopen naar de belangrijkste uitlaatpijp door zwaartekracht. Spons filter pads worden toegevoegd aan de horizontale afvoerleidingen, zodat de vis tank drain water valt op de sponzen en filtert puin. Een hele samengestelde systeem is afgebeeld in figuur 5.
Bouw van aquaria
Een vertegenwoordiger aquarium is weergegeven in figuur 6. Is het einde van het aquarium afvoerleiding geplaatst in de horizontale afvoerleiding (zie hierboven paragraaf over uitlaatpijp). Een gaas wordt in de afvoerleiding ingebracht in het aquarium aan het voorkomenzebravis van zwemmen uit de tank. Deze bijzondere tanks hebben deksels die voorkomen dat de vis ontsnapt en ook vervuiling kansen te minimaliseren. Als overflow optreedt tank deksels zal voorkomen dat vis uit te vallen op de grond. Tanks met deksels zijn ideaal, maar als een stelsel wordt gebouwd die de houders bevat zonder deksel dan een klein gat worden geboord nabij de bovenkant van de tank. Dit zal toelaten het water te ontsnappen, terwijl voorkomen dat vissen ontsnappen.
Functionerende
Een zebravis kolonie kon worden gehandhaafd door de beschikbare en vastgestelde protocollen elders 3- 6 beschreven. Kort onze faciliteit kan het systeem pomp het systeem volume ongeveer 75 maal per uur circuleren, door aanpassing van de stroomsnelheid per volwassene (of larvale aquarium) bij ongeveer 85 ml / min (of 45 ml / min larven aquarium) . Waterkwaliteit wordt onderhouden door actieve biologische filtratie en kleinschalige water veranderingen (~ 5% van het systeemvolume) indien nodig. Dagelijkse controlepH, geleidbaarheid, opgeloste zuurstof (DO) niveaus, en temperatuur noodzakelijk omstandigheden consistent te houden. Kits zijn commercieel verkrijgbaar pH meten en DO niveau. Geleidbaarheid meter zijn ook beschikbaar voor aankoop. Om deze variabelen testen dagelijks, in 250 ml water uit het reservoir en analyse. De pH-waarde moet op 7,2 worden gehandhaafd, zou moeten doen minder dan 6 mg, en geleidbaarheid tussen de 500 en 1.300 mS mS zijn. (BRON HIER) Temperatuur moet worden gehandhaafd op 28,5 ° C. Regelmatig onderhoud van het systeem (3-4 weken) omvat een geschatte 30% water verversen en het schoonmaken en vervangen van filter pads en houtskool.
Figuur 1: Drie belangrijke onderdelen van een zebravis faciliteit. A. De pomp en filtersysteem bevinden zich aan de onderzijde van de plank (eersteplank) en sluit het water stock tank met de grote toevoerleiding. B. De belangrijkste aanvoerlijn is afgeleid van de UV-lamp en levert water aan de bovenste drie planken die de vis tanks bevatten. Merk op dat elke plank compartiment onafhankelijk toegevoerd en afzonderlijk worden bestuurd (aan of uit) via een klep. Deze hoofdleiding ook de belangrijkste afvoer klep aan het ondereinde en aan het boveneinde verder als ontspanning geplaatst lijn die eindigt in de belangrijkste uitlaatpijp. C. De belangrijkste uitlaatlijn ontvangt water uit de druk reliever lijn en uit verschillende aquarium compartimenten en eindigt in het water stock tanks. Merk op dat elke plank heeft een aquarium uitlaat lijn die PVC buizen zijn en zijn in de lengte open voor water ontvangen voor individuele aquaria. Deze lijnen zijn licht geneigd om water te laten lopen door de zwaartekracht naar de belangrijkste uitlaat lijn.Klik hier om een grotere versie van deze afbeelding te bekijken.
Figuur 2:. Drie belangrijke onderdelen van een zebravis faciliteit gemonteerd en gemakkelijk functionele Merk op dat het water stock tank heeft al bioballen. Het water van de belangrijkste uitlaat lijn zal op een spons filter geplaatst op gaas boven het waterniveau (voor de duidelijkheid dit niet is afgebeeld in de figuur) vallen. Merk op dat voor de duidelijkheid de tweede plank heeft slechts een aantal aquaria afgebeeld, de getoonde monddouche heeft slechts 4 toevoer buizen, en het aquarium uitlaatlijn is transparant. Elke plank van het rek kunt negen 1 L aquaria te houden en hebben een 9-poort monddouche.
Figuur 3:. Fish tank unit Het aquarium is verworven in een gewone dierenwinkel en het heeft een 2 liter capaciteit A. De vis tank aftappen systeem wordt geconstrueerd door het boren van een 1 1/8 "gat in de achterkant van. de tank, dan 3/4 "PVC pijp stukken worden geplaatst in een omgekeerde" L "vorm met behulp van een 3/4" PVC elleboog. Het drainagesysteem wordt in de open zijde van het aquarium afvoerleidingen aan de achterkant van de aquaria vallen. B. afbeelding van het installeren van een maas in het aquarium afvoersysteem. Het gaas voorkomt dat de zebravis van wordt afgevoerd naar de uitlaat lijnen.
Figuur 4: Individuele onderdelen bouw. A. De drie filter en pompsysteem is op het onderste rek van het systeem. De pomp is verbonden met drie MechaniCal filters gevolgd door een UV-filter om verontreinigingen uit het systeem water te elimineren. B. De horizontale toevoerleiding eindigt in een 9-poort irrigatie spruitstuk, die zoet water en zuurstof zal leveren aan elke tank. De toevoerleiding naar elke plank heeft een on-off klep die kan worden gebruikt om water te stoppen aan elke plank voor het reinigen en quarantaine doeleinden. C. De aquarium uitlaatlijn uitmondt in de belangrijkste uitlaatlijn om de circulatie opnieuw in te voeren. Het overdrukventiel lijn leegt ook in de belangrijkste uitlaatlijn.
Figuur 5:. Voltooide systeem Het voltooide systeem bevat een pomp en filters systeem, een verticale toevoerleiding, een horizontale toevoerleiding voor elk schap, een tank uitlaat lijn, een overdrukventiel lijn, en een van de belangrijkste uitlaat lijn voor een ingeperkt circulatiesysteem .
Figuur 6:. Vertegenwoordiger aquarium Het aquarium bevat een drainerende lijn die zal verbinden met de horizontale drainage lijnen in het systeem.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Het belangrijkste doel van dit artikel is om aan te tonen dat de bouw van een functionele zebravis faciliteit is niet ingewikkeld en kan worden gebouwd door beginnende vis onderzoekers met minimale constructie van kennis. Bovendien is dit artikel laat zien dat het materiaal voor dit functionele zebravis faciliteit gemakkelijk en betaalbaar kan worden verkregen van de plaatselijke huisdier aanbod winkels of bouwmarkten. Zodra alle materialen en gereedschappen zijn verworven met de bouw van het systeem en de vis tanks duurt ongeveer een werkdag. De 72 hr eerste run kan elke storing in het systeem, zoals lekkages of lage waterdruk, worden bepaald. Deze eerste run maakt het ook mogelijk voor verontreinigingen in het systeem uit de circulatie worden verwijderd. Bijvoorbeeld kan de PVC lijm gevaarlijke organisch materiaal dat gedurende de eerste paar uren van circulatie verwijderd bevatten. Het systeem heeft een belangrijke aftapkraan waarmee en vergemakkelijkt het inregelen van water en vervanging verzorgi komstig. Bovendien heeft het systeem een druk reliever lijn die ook vergemakkelijkt de aanpassing van de waterdruk. Deze lijn is nuttig wanneer slechts één of twee compartimenten (rekken) gebruikt aangezien het de regeling van waterdruk.
De inrichting is modulair opgebouwd waardoor het gebruik van 1, 2 of 3 compartimenten (36 aquaria 1,8 L) aan de behoeften van de afzonderlijke onderzoekers op. De aan-uit afsluiters geplaatst in elk compartiment vergemakkelijken van de isolatie van de verschillende onderdelen van het systeem. Het klepsysteem is ook nuttig voor mogelijke infecties verspreiding te voorkomen, en het reinigen van het systeem compartimenten vergemakkelijken. Bovendien heeft elke aquarium water heeft twee kleppen, een op de 9 haven irrigator en één aan de flexibele buis aan de ingang van het aquarium. Deze dubbele klep systeem maakt fijnafstelling van de waterdruk en ook procedures schoonmaken of vis extractie of manipulatie te vergemakkelijken.
t "> Een goede documentatie van ammoniak, nitriet en nitraat is essentieel voor de goede werking van de inrichting. Hiervoor de bioballen zijn belangrijk omdat zij voldoende oppervlak voor nitrificerende bacteriën groei. Zodra de vis kolonie stabiel, de inrichting kan gemakkelijk worden aangepast om grotere of kleinere aquaria gebruikt. Ook kan de inrichting worden aangepast aan zebravis kweken na de in de literatuur 5 protocollen. Verder kan de inrichting worden aangepast aan andere modules of rekken aan de mogelijkheden van het systeem uit te breiden .De stroom vers water in het reservoir biedt voldoende verse zuurstof zodat er geen noodzaak om een extra oxygenator voegen. De lucht uitwisseling die op het waterreservoir is voldoende zuurstofbron. Als grotere tanks vervolgens worden gebruikt tegen zuurstofbron worden toegevoegd. Er moet ook worden opgemerkt dat zonder stroom van zoet water in de tank van de vis zal stik, dus het is van vitaal belang dat de waterstroom be nauwlettend gevolgd om niets te verzekeren is het blokkeren van de waterleidingen. Het is essentieel dat de watertemperatuur bij 28.5 ° C gehandhaafd. Een constante temperatuur kan worden bereikt door het handhaven van de temperatuur waarin het systeem is gehuisvest bij 28,5 ° C. Als alternatief kan een aquarium verwarmingsbron worden aangekocht om een constante temperatuur te handhaven. Handhaving waterkwaliteit essentieel consistente experimentele resultaten. Er zijn veel bronnen beschikbaar om te helpen bepalen exacte parameters voor de waterkwaliteit op basis van experimentele omstandigheden.
Vissen tanks worden schoongemaakt elke 7-10 dagen en vervolgens besproeid met alcohol 70% voor hergebruik. Er wordt ook gesuggereerd dat de chromen rek worden gereinigd en gedroogd op dit punt om roestvorming te voorkomen en op te bouwen. Als tekenen van verontreiniging worden waargenomen, worden de individuele tanks ontsmet met een 2% bleekwateroplossing 8. Algemene gezondheid wordt gecontroleerd met speciale aandacht voor tekenen van infectie (zwelling, huidzweren, exolpthalmia, kleur af, enz.), gasbel ziekte (vanwege oververzadigde gasconcentraties, snelle veranderingen in de temperatuur van het water, problemen in het sanitair systeem), kieuw hyperplasie (hoge niveaus van ammoniak, koper, zink of actieve chloor in het water) , scoliose (als gevolg van tekort aan vitamine C) of ei bijbehorende ontsteking en fibroplasias (als gevolg van vrouwelijke retentie ei dat duwt de buikwand).
De constructie van deze faciliteit is flexibel en maakt een kleinere of uitgebreid systeem. Door het nemen van de basisconstructie ideeën, kan deze faciliteit worden ingericht om fundamenteel onderzoek behoeften van de verschillende maten passen. Omdat de bouw kan per instelling, de meest kritische fase in het protocol is de 72 hr eerste run, en de dagelijkse controle van ammonium, nitraat en nitriet niveaus tijdens de eerste week van de bouw. Uitstekende waterkwaliteit zal helpen bij het handhaven van de gezondheid van de vissen. Veel van de huidige protocollen beschikbaar voor een betaalbare vis system, over een open-lucht-water-flow 3. Met water beschermd tegen de open-air minimaliseert kans op verontreiniging van het water en verdamping. Onderhoud van een gesloten systeem is minimaal vergeleken met de gemeenschappelijke openlucht systemen.
Bij problemen bij de constructie van de inrichting (lekken, lage waterdruk, enz.) Kan een gecementeerde pijp vervangt door eenvoudig weggesneden aandachtsgebied in de installatie en vervanging van de onderdelen in dezelfde stapsgewijze wijze zoals hierboven omschreven . Dit systeem kan kwetsbaar zijn voor grote waterverlies te wijten zijn aan kleine lekken, wat gevaarlijk kan worden voor de vis als onopgemerkt gelaten. Voor een minimale investering zal een vlotter uitschakeling apparaat detecteren wanneer het waterniveau onder een veilige drempel gedaald is en het systeem afsluiten. Dit kan nodig zijn als een nauwkeurige controle van het systeem is niet beschikbaar. Met de juiste aanpassingen zijn er weinig beperkingen deze wordt geconfronteerd naast gebrek aan mobiliteit. Zodra dit systeem construerened is het zeer moeilijk om te bewegen zonder snijden onderdelen recementing ze op de nieuwe locatie. Dit mobiliteit beperking betekent dat het systeem idealiter moeten in een werkruimte te handhaven. Indien mobiliteit gewenst zijn kleine aanpassingen die kunnen worden aangebracht om flexibiliteit te verhogen. Voeg een vakbond aan het begin van elke levering laterale, het overdrukventiel lijn, de afvoer pomp, en boven de aftapkraan. De afvoerleidingen kan droog in plaats van te worden gemonteerd gecementeerd op zijn plaats. Het toevoegen van een flexibele koppeling met het pompgedeelte ook helpen bij mobiliteit. Dit is een extra
De eenvoudige constructie en het onderhoud van dit systeem betekent dat de huidige protocollen die in de literatuur zijn beschikbaar voor kleine onderzoeksinstellingen 1,2,10-12. Onderhoud is eenvoudig waardoor dit een ideaal systeem voor undergraduate studenten onderzoek. Dit systeem is uitstekend geschikt voor onafhankelijk onderzoek en onderwijs laboratoria, ook.
Kortom, dit soortfaciliteit is betaalbaar, eenvoudig te bouwen, en functioneel voor in vivo experimenten. Deze faciliteit is ideaal voor instellingen met beperkte middelen en beperkte veeteelt ruimte. Zebravis onderzoek is een gebied dat wordt gebruikt voor meerdere soorten studies, waaronder farmacologie, fysiologie, ontwikkeling, of zelfs genetische studies. In feite, het grote aantal beschikbare mutante of transgene zebravis ondersteunt vernieuwende onderzoek in vrijwel alle gebieden van biogeneeskunde. Bovendien kan dit systeem worden gebruikt om de mogelijkheden voor onderzoek en in de klas ervaringen voor de wetenschap majors verbeteren op kleine voornamelijk undergraduate instellingen en inspireren de volgende generatie van biomedische wetenschappers.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs verklaren geen belangenconflicten voor deze paper.
Acknowledgments
De auteurs willen graag naar het Bureau voor Onderzoek van de Presbyterian College School of Pharmacy bedanken voor de financiële ondersteuning van dit project via de Kleine Apotheek Awards for Research & Collaboration (SPARC) Award. De auteurs danken de heer John Smink, Manager van de Aquatic Animal Research Laboratory, Clemson University, Clemson, SC voor zijn technische bijstand manuscript revisie.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Item | Brand | Quantity | |
| 74-in H x 48-in W x 18-in D 5-shelf Steel Freestanding Shelving Unit | Style Selections | 1 | |
| 18-Gallon General Bucket/Tote | Centrex Plastics: LLC Rugged Tote | 1 | |
| 6-Outlet Power Strip With 15-Ft. Cord | Master Electrician | 1 | |
| 9-Watt UV Water Garden Clarifier FiIter and UV lamp | Smartpond | 1 | |
| Whole House Water Replacement Filter | Whirlpool | 6 | |
| Opaque Whole-House Pre-Filtration Housing | Whirlpool | 2 | |
| Thread Seal Tape | William H Harvey | 1 | |
| 8-fl oz LO-VOC PVC Cement | Oatey | 1 | |
| 8-fl oz LO-VOC Primer | Oatey | 1 | |
| 1/4-in x 100-ft Vinyl Drip Irrigation Distribution Tubing | Mister Landscaper | 1 | |
| 1/4-in Barbed Drip Irrigation On/Off Valve | Mister Landscaper | 33 | |
| 9-Port NPT Irrigation Manifold with Filter | Mister Landscaper | 6 | |
| Drop-In Filter with House | Whirlpool | 6 | |
| 2-in Dia 90-Degree PVC Elbow | LASCO | 3 | |
| 2-in Dia 90-Degree Tee | LASCO | 3 | |
| 3/4-in Dia 90-Degree Slip Elbow | LASCO | 15 | |
| 3/4-in Dia PVC Adapter | LASCO | 7 | |
| 3/4-in Dia PVC Tee | LASCO | 12 | |
| 2-in Dia PVC Cap | LASCO | 3 | |
| 1-in Dia x 3/4-in Dia PVC Adapter | LASCO | 2 | |
| 3/4-in PVC Socket In-Line Ball Valve | American Valve | 5 | |
| 1/2-in Dia x 3/4-in Dia PVC Adapter | Lasco | 8 | |
| 3/4-in Dia PVC Cap | Lasco | 1 | |
| 2-In x 5-Ft Pvc Pipe | Charlotte Pipe | 4 | |
| ¾-In x 10-Ft Pvc pipe | Charlotte Pipe | 3 | |
| 11/16x1-7/80 PVC ring | SXT | 10 | |
| ½” PVC male adapter | SXT | 1 | |
| ¾” PVC coupling | SXT | 1 | |
| ½” PVC female adapter | SXT | 1 | |
| link | |||
| 1.8 L Dual Beta Keeper | Top Fin | 27 | |
| ¾” PVC male adapter (w/ #18 O-ring) | SXT | 28 | |
| 90-degree ¾” threaded PVC elbow | SXT | 27 | |
| Fine Mesh | N/A | 1 yard | |
| Bulkhead Connector | N/A | 1 | |
| Hacksaw | N/A | 1 | |
| Drill | N/A | 1 | |
| Hole saw | N/A | 1 | |
| Adjustable Wrench | N/A | 1 | |
| Pliers | N/A | 1 | |
| Tape Measure | N/A | 1 | |
| Safety Glasses | N/A | 1 | |
| Work Gloves | N/A | 1 |
References
- Detrich, H., Westerfield, M., Zon, L. The Zebrafish: Cellular and Developmental Biology, Part A.. , 3rd ed, Academic Press. New York, New York. (2010).
- Grim, J. M., et al. Hemogen (hemgn), a transcription factor that regulates erythropoiesis and skeletogenesis in zebrafish. Strategic Conference of Zebrafish Investigators Poster Presentation, 2013, Asilimar, CA, , (2013).
- Kim, S., Carlson, R., Zafreen, L., Rajpurohit, S. K., Jagadeeswaran, P.
- Linbo, T. L. Zebrafish (Danio rerio) husbandry and colony maintenance at the Northwest Fisheries Science Center. U.S. Dept. Commer., NOAA Tech. Memo. 62, (2009).
- Avdesh, A., et al. Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: an introduction. J Vis Exp. 69, 4196 (2012).
- McNabb, A., Scott, K., Ochsenstein, E., Seufert, K., Carl, M. Don't be afraid to set up your fish facility. Zebrafish. 9 (3), 120-125 (2012).
- Garcia, R. L., Sanders, G. E. Efficacy of cleaning and disinfection procedures in a zebrafish rerio) facility. J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (6), 895-900 (2011).
- Rivas-Boyero, A. A., et al. Pharmacological characterization of a nociceptin receptor from zebrafish (Danio rerio). J Mol Endocrinol. 46 (2), 111-123 (2011).
- Sanchez-Simon, F. M., Zhang, X. X., Loh, H. H., Law, P. Y., Rodriguez, R. E. Morphine regulates dopaminergic neuron differentiation via miR-133b. Mol Pharmacol. 78 (5), 935-942 (2010).
- Velasco, E. M., Law, P. Y., Rodríguez, R. E. Mu opioid from the zebrafish exhibits functional characteristics as those of mammalian mu opioid receptor. Zebrafish. 6 (3), 259-268 (2009).
