Montaggio di cervelli drosofili adulti: un metodo per preparare diapositive per l'imaging confocale

- Su uno scivolo al microscopio caricato positivamente, aderire a due scivolamenti di copertura con una distanza sufficiente tra di loro per creare uno spazio per il cervello Drosophila da montare. Al microscopio stereo, pipettare il cervello nel mezzo di montaggio in quello spazio. La carica negativa del tessuto aiuterà il cervello ad aderire alla carica positiva sulla superficie dello scivolo.

Rimuovere il mezzo di montaggio in eccesso per consentire un posizionamento preciso del cervello sullo scivolo in un modello a griglia con i lobi antennali rivolti verso l'alto, quindi collegare i due scivolamenti di copertura aderendo a un terzo coperchio scivolare attraverso per coprire il cervello.

Per riempire la cavità, posizionare il mezzo di montaggio una goccia alla volta nel bordo della cavità e lasciarla diffondere con il movimento capillare in modo che non disturbi il cervello.

Sigillare la cavità con smalto per unghie e conservare a -20 gradi Celsius al buio per preservare la fluorescenza dei tessuti macchiati.

Nel protocollo di esempio, monteremo cervelli Drosophila per l'imaging confocale di neuroni immunososteniati.

- Per montare il cervello, costruire uno scivolo a ponte. Posizionare due coperture di base che scivolano a circa un centimetro di distanza su uno scivolo caricato positivamente. Assicurarsi che il lato caricato positivamente sia a faccia in su. Quindi aderire al coperchio scivola allo scivolo con smalto per unghie e lasciare asciugare completamente lo smalto prima di procedere.

Quindi, posizionare lo scivolo sotto un microscopio stereo e il cervello delle pipette in mezzo nello spazio tra gli scivolamenti della copertura. Assicurarsi di regolare l'illuminazione per migliorare la visualizzazione del cervello.

Successivamente, aspirate i supporti di montaggio extra dalla diapositiva, facendo attenzione a evitare il cervello. Quindi, assorbite i supporti di montaggio in eccesso rimanenti. Ciò consentirà al cervello di essere posizionato in modo più preciso. Ora, usando le forcep, orientare il cervello in un modello a griglia con i loro lobi antennali rivolti verso l'alto.

Quindi, posizionare una copertura scivolare sul cervello e utilizzare lo smalto per unghie per sigillare i bordi dello scivolo del coperchio superiore attaccati ai foglietti di copertura di base.

Ora, caricare la cavità centrale con un nuovo supporto di montaggio per quanto riguarda la caduta, consentendo al supporto di essere disegnato sotto lo slittamento del coperchio per azione capillare. Quando la cavità è riempita, sigillare completamente utilizzando lo smalto chiaro per unghie.