Isolement des îlots pancréatiques par perfusion de collagénase : une méthode enzymatique pour isoler les cellules des îlots pancréatiques

- Les cellules des îlots pancréatiques produisent des hormones essentielles impliquées dans les fonctions endocriniennes. Pour isoler les îlots, il faut d’abord sécuriser une souris euthanasiée et exposer chirurgicalement sa cavité abdominale. Brossez le foie et les intestins pour localiser et clamper le canal cholédoque. Identifiez l’ampoule de Vater, le canal formé par l’union des canaux pancréatiques et cholaires.

Ensuite, injectez une solution d’enzyme collagénase dans le canal cholédoque. Le reflux du canal gonfle avec succès le pancréas, facilitant la dissociation des tissus pancréatiques induite par la collagénase. Exciser le pancréas dans un tube contenant plus de solution de collagénase. Hachez mécaniquement le tissu et incubez pour faciliter la digestion des tissus par la collagénase.

Une fois la suspension homogène obtenue, arrêtez la digestion enzymatique en ajoutant une solution contenant des protéines qui inhibent l’activité de la collagénase. Centrifugeuse pour recueillir une pastille de tissu. Remettez la pastille en suspension dans un milieu à gradient de densité approprié, superposez-la d’un tampon approprié et centrifugez-la pour générer des couches de gradient

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