Visualisation de l’expression des protéines basée sur CUBIC : une procédure de visualisation de l’expression des protéines dans des biopsies de peau de souris de pleine épaisseur

- La peau est un organe complexe composé de populations cellulaires variées disposées en plusieurs couches. CUBIC, une technique d’imagerie tridimensionnelle basée sur le nettoyage des tissus, aide à visualiser les modèles d’expression des protéines à l’intérieur de ces cellules cutanées à l’aide de biopsies de peau entière. Commencez par prendre une souris euthanasiée et enlever les poils de la région dorsale de son cou. Excisez un morceau de peau et coupez-le en petits morceaux.

Immergez les morceaux dans une solution de nettoyage CUBIC1 et incuberez. Les cellules de la peau ne sont pas transparentes, en raison de la présence de chromophores et de lipides qui provoquent la diffusion de la lumière. Les produits chimiques contenus dans la solution CUBIC éliminent ces molécules, réduisant ainsi la diffusion de la lumière et rendant le tissu transparent.

Ensuite, traitez le tissu avec les anticorps primaires souhaités qui se lient spécifiquement à leurs protéines intracellulaires cibles exprimées dans les cellules de la peau. De plus, traitez avec des anticorps secondaires marqués par fluorescence qui se lient aux complexes protéine-anticorps primaires. Contre-colorez le tissu avec u