Name: Métastases expérimentales et CTL Modèle adoptifs souris Transfert immunothérapie (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-11-26T15:03:00.000+00:00
Duration: 8 min 6 s
Description: Découvrez l'immunothérapie par transfert adoptif de lymphocytes T cytotoxiques chez la souris pour étudier les métastases pulmonaires. Cette méthode permet d'évaluer l'efficacité thérapeutique in vivo.

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Soutenu par des subventions du National Institutes of Health (CA133085 à KL) et l&#39;American Cancer Society (RSG-09-209-01-TBG à KL).

1. Modèle expérimental de la souris Métastases <ol><li> Le jour avant les injections de cellules tumorales, une graine flacon T75 avec un maximum de 1 x 10 7 CMS4-Met cellules dans 10 ml de milieu RPMI contenant 10% de sérum pour obtenir croissance rapide des cellules tumorales. Incuber une nuit à 37 ° C. </li><li> Le jour de l'injection, éliminer le milieu et rincer les cellules une fois avec du PBS, puis la récolte des cellules tumorales avec 0,05% de trypsine-EDTA à 37 ° C pendant 5 minutes. Arrêter la réaction avec 10 ml de milieu RPMI contenant 10% de sérum. Transfert des cellules à un tube conique. </li><li> Isoler les cellules à 1300 rpm dans une centrifugeuse Sorvall Legend RT pendant 3 minutes à température ambiante. Enlever le surnageant. Resuspendre les cellules dans 10 mL frais 1X HBSS à laver, puis à nouveau spin-down et remettre de la même manière. </li><li> Compter les cellules tumorales sur un hématimètre. Diluer les cellules dans HBSS, de sorte que les cellules nécessaires à chaque injection sont remis en suspension dans un volume total de 100 ul. </li><li> Chauffer le 6-8 semaines vieilles souris Balb / c dans un bécher immergé dans l'eau chaude pour dilater la veine de la queue. Placez la souris sur une veine de la queue de contention sur le banc. Utilisez une microseringue à injecter 100 ml de cellules tumorales dans la veine latérale de la queue. Utiliser une technique aseptique pour éviter l'infection. Après l'injection, appliquez une légère pression au site d'injection jusqu'au saignement s'est arrêté. </li><li> Retour de la souris dans la cage, et permettre à la tumeur de croître sur la scène désirée. </li></ol> 2. Lymphocytes T cytotoxiques (CTL) Immunothérapie transfert adoptif <ol><li> Le jour du transfert, une pipette de haut en bas pour resuspendre cytotoxique des lymphocytes T purifiés, ou CTL, préparé comme décrit dans le texte. Transfert de toutes les cellules d'une plaque à un tube de 15 ml coniques, ne laissant pas le volume dépasse de plus de 2 / 3 du tube. </li><li> Insérer une pipette Pasteur stérile dans le tube conique et laïcs milieu de séparation des lymphocytes, ou de LSM, sous les cellules jusqu'à ce que le volume total se rapproche de 14 ml. </li><li> Soyez prudent de ne pas déranger les couches. Centrifuger à 2000 rpm pendant 20 minutes à température ambiante. Ne pas utiliser le frein pour ralentir le rotor après le filage. </li><li> Transfert des CTL à un nouveau 15 ml tube conique. Ajouter HBSS à un volume d'environ 10 ml à laver. </li><li> Compter les cellules. Isoler à 1300 rpm pendant 5 minutes à température ambiante. Remettre en suspension dans HBSS à la densité de cellules nécessaires pour les injections, en gardant le volume total par injection à 100 pi. </li><li> Utilisez la technique d'injection queue mêmes comme vu plus tôt dans cette vidéo pour injecter le CTL en souris porteuses de tumeurs. </li><li> Retour de la souris dans la cage, et permettre au CTL à interagir avec la tumeur. Les souris sont souvent sacrifiés pour l'analyse de 14-21 jours après le traitement de CTL. </li></ol> 3. Visualisation des métastases pulmonaires <ol><li> Pour visualiser les métastases pulmonaires, placer une souris sacrifiées sur son dos sur une planche en mousse de polystyrène. Pin des jambes pour assurer un libre accès à la trachée. Vaporisez la face ventrale avec de l'éthanol à 70%. </li><li> A partir du milieu de l'abdomen, utilisez des ciseaux pour couper le long de la ligne médiane, à travers la cage thoracique, et jusqu'à vers les glandes salivaires. Exposer la trachée. Utilisez une pince pour retirer les tissus entourant la trachée. </li><li> Enfilez une pointe de pipette 200 uL sous la trachée. Tenir la pointe d'une main, soulevez doucement la trachée et loin du corps. </li><li> Tournez la plate-forme de 180 °. Utiliser une seringue de 50 ml à injecter l'encre de Chine dans les poumons par la trachée. Complètement gonfler les poumons avec de l'encre jusqu'à ce que vous sentez une forte résistance. </li><li> Utilisez des ciseaux pour couper la trachée. Faites glisser une paire de pinces dans les poumons et les sortir de la souris. Rincez les poumons brièvement dans un bécher de 1 litre d'eau. </li><li> Dans une hotte, le transfert des poumons à un flacon à scintillation en verre contenant 5 ml de solution de Fekete. Le tissu tumoral va s'imposer comme des nodules blancs sur les poumons noirs après quelques minutes. Les tumeurs peuvent maintenant être comptés et enregistrés dans une solution de Fekete indéfiniment. </li></ol> 4. Métastases Représentant en Poumons visualisé <ol><li> Ici, les poumons des souris qui ont été injectés avec 4T1 carcinome mammaire lignée cellulaire montrent des taches blanches indiquant les tumeurs. Les souris qui ont été injectées avec des cellules 4T1 transfectées avec un IRF8 dominante-négative K79E mutant montrer le potentiel améliorée métastatique des cellules tumorales. </li><li> Ces images montrent une analyse histologique de l'efficacité de l'immunothérapie adoptive de transfert de CTL. Souris porteuses de tumeurs injectées avec une solution saline a montré de multiples tumeurs 6 jours plus tard, indiquées par des flèches jaunes (A). Souris injectées avec des cellules T spécifiques de la tumeur, d'autre part, a montré une réduction de tumeurs (B). </li><li> Dans la même expérience, le traitement encre de Chine donne un moyen plus simple pour mesurer l'efficacité du transfert adoptif de CTL. Ici, les nodules tumoraux blanc sur porteurs de tumeurs des poumons clairement les distinguer des poumons qui ont subi avec succès le transfert adoptif de CTL, et en comptant les nodules permet un degréde quantification n'est pas possible avec l'histologie. </li></ol> 5. Les résultats représentatifs <img src="/files/ftp_upload/2077/2077fig1.jpg" alt="Figure 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 1"> Figure 1. Dispositif expérimental pour la métastase des tumeurs expérimentales et de transfert de CTL adaptative immunothérapie modèle de souris. Les points rouges indiquent les cellules tumorales et des points verts indiquent les CTL. <img src="/files/ftp_upload/2077/2077fig2.jpg" alt="Figure 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 2"> Figure 2. Perturbation des fonctions améliorées IRF8 le potentiel métastatique des cellules tumorales. Mammaire de souris 4T1 carcinome ligne a été transfectées de façon stable avec le vecteur (4T1.Vector) ou vecteur exprimant une IRF8 mutant dominant négatif K79E (4T1.IRF8K79E) (15, 16). Les cellules tumorales ont été injectées dans les veines de souris iv latérale de la queue. Porteurs de tumeurs des poumons étaient gonflés à l'encre de Chine de visualiser des nodules tumoraux. Nodules tumoraux sont facilement considérées comme des taches blanches sur le fond noir du tissu pulmonaire. <img src="/files/ftp_upload/2077/2077fig3.jpg" alt="Figure 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 3"> Figure 3. L'analyse histologique de l'efficacité de l'immunothérapie adoptive de transfert de CTL. Lignée cellulaire de souris sarcome de CMS4-Met a été injecté dans les veines de souris iv latérale de la queue. Trois jours plus tard, une solution saline (A) ou spécifiques d'une tumeur des cellules T (B) ont été injectées dans des souris porteuses de tumeur. Poumons ont analysé six jours après le traitement de CTL par coloration H &amp; E conventionnels histologique. Nodules tumoraux sont indiquées par des flèches. <img src="/files/ftp_upload/2077/2077fig4.jpg" alt="Figure 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 4"> Figure 4. Visualisation des nodules tumoraux par l'inflation encre de Chine. Lignée cellulaire de souris sarcome de CMS4-Met a été injecté dans les veines de souris iv latérale de la queue. Trois jours plus tard, une solution saline (contrôle) ou une tumeur des cellules T spécifiques (+ CTL) ont été injectées dans des souris porteuses de tumeur. Poumons ont été analysés quatorze jours après le traitement de CTL. Les taches blanches, qui sont des nodules tumoraux, permettant la quantification aisée de l'efficacité du traitement de CTL.

<ol><li>Ryan, M. H., Bristol, J. A., McDuffie, E., Abrams, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regression+of+extensive+pulmonary+metastases+in+mice+by+adoptive+transfer+of+antigen-specific+CD8%28%2B%29+CTL+reactive+against+tumor+cells+expressing+a+naturally+occurring+rejection+epitope%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Regression of extensive pulmonary metastases in mice by adoptive transfer of antigen-specific CD8(+) CTL reactive against tumor cells expressing a naturally occurring rejection epitope.</a> J Immunol. 167 (8), 4286-4292 (2001).</li>
<li>Caldwell, S. A., Ryan, M. H., McDuffie, E., Abrams, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Fas%2FFas+ligand+pathway+is+important+for+optimal+tumor+regression+in+a+mouse+model+of+CTL+adoptive+immunotherapy+of+experimental+CMS4+lung+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">The Fas/Fas ligand pathway is important for optimal tumor regression in a mouse model of CTL adoptive immunotherapy of experimental CMS4 lung metastases.</a> J Immunol. 171 (5), 2402-2412 (2003).</li>
<li>Liu, K., Caldwell, S. A., Greeneltch, K. M., Yang, D., Abrams, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CTL+Adoptive+Immunotherapy+Concurrently+Mediates+Tumor+Regression+and+Tumor+Escape%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">CTL Adoptive Immunotherapy Concurrently Mediates Tumor Regression and Tumor Escape.</a> J Immunol. 176 (6), 3374-3382 (2006).</li>
<li>Yang, D., Stewart, T. J., Smith, K. K., Georgi, D., Abrams, S. I., Liu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Downregulation+of+IFN-gammaR+in+association+with+loss+of+Fas+function+is+linked+to+tumor+progression%5BTitle%5D)+AND+%22International+journal+of+cancer%22%5BJournal%5D)">Downregulation of IFN-gammaR in association with loss of Fas function is linked to tumor progression.</a> International journal of cancer. 122 (2), 350-362 (2008).</li>
<li>Pages, F., Berger, A., Camus, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effector+memory+T+cells%2C+early+metastasis%2C+and+survival+in+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Effector memory T cells, early metastasis, and survival in colorectal cancer.</a> N Engl J Med. 353 (25), 2654-2666 (2005).</li>
<li>Galon, J., Costes, A., Sanchez-Cabo, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type%2C+density%2C+and+location+of+immune+cells+within+human+colorectal+tumors+predict+clinical+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Type, density, and location of immune cells within human colorectal tumors predict clinical outcome.</a> Science. 313 (5795), 1960-194 (2006).</li>
<li>Strater, J., Hinz, U., Hasel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+CD95+expression+predisposes+for+recurrence+in+curatively+resected+colon+carcinoma%3A+clinical+evidence+for+immunoselection+and+CD95L+mediated+control+of+minimal+residual+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Impaired CD95 expression predisposes for recurrence in curatively resected colon carcinoma: clinical evidence for immunoselection and CD95L mediated control of minimal residual disease.</a> Gut. 54 (5), 661-665 (2005).</li>
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<li>Nagaraj, S., Gabrilovich, D. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+escape+mechanism+governed+by+myeloid-derived+suppressor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+research%22%5BJournal%5D)">Tumor escape mechanism governed by myeloid-derived suppressor cells.</a> Cancer research. 68 (8), 2561-2563 (2008).</li>
<li>Nguyen, D. X., Bos, P. D., Massague, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metastasis%3A+from+dissemination+to+organ-specific+colonization%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews%22%5BJournal%5D)">Metastasis: from dissemination to organ-specific colonization.</a> Nature reviews. 9 (4), 274-284 (2009).</li>
<li>Heijstek, M. W., Kranenburg, O., Rinkes, B. orel, H, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+colorectal+cancer+and+liver+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Digestive+surgery%22%5BJournal%5D)">Mouse models of colorectal cancer and liver metastases.</a> Digestive surgery. 22 (1-2), 1-2 (2005).</li>
<li>Yang, D., Ud Din, N., Browning, D. D., Abrams, S. I., Liu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+lymphotoxin+beta+receptor+with+tumor-specific+T+lymphocytes+for+tumor+regression%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Targeting lymphotoxin beta receptor with tumor-specific T lymphocytes for tumor regression.</a> Clin Cancer Res. 13 (17), 5202-5210 (2007).</li>
<li>Yang, D., Thangaraju, M., Browning, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IFN+Regulatory+Factor+8+Mediates+Apoptosis+in+Nonhemopoietic+Tumor+Cells+via+Regulation+of+Fas+Expression%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">IFN Regulatory Factor 8 Mediates Apoptosis in Nonhemopoietic Tumor Cells via Regulation of Fas Expression.</a> J Immunol. 179 (7), 4775-4782 (2007).</li>
<li>Yang, D., Thangaraju, M., Greeneltch, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repression+of+IFN+regulatory+factor+8+by+DNA+methylation+is+a+molecular+determinant+of+apoptotic+resistance+and+metastatic+phenotype+in+metastatic+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+research%22%5BJournal%5D)">Repression of IFN regulatory factor 8 by DNA methylation is a molecular determinant of apoptotic resistance and metastatic phenotype in metastatic tumor cells.</a> Cancer research. 67 (7), 3301-3309 (2007).</li>
<li>Wexler, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accurate+identification+of+experimental+pulmonary+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+National+Cancer+Institute%22%5BJournal%5D)">Accurate identification of experimental pulmonary metastases.</a> Journal of the National Cancer Institute. 36 (4), 641-645 (1966).</li>
</ol>

Les souris ont été achetés auprès de l&#39;Institut national du cancer (Friderick, MD) et logé dans le Medical College of Georgia animalerie. Les expériences et les soins / bien-être sont en accord avec les règlements fédéraux et d&#39;un protocole approuvé par le Medical College of Georgia IACUC comité.

Solutions: Solution d&#39;encre en Inde (17): <ol><li> Verser 150 ml d&#39;eau distillée dans un flacon de 250 ml. </li><li> Ajouter 4 gouttes d&#39;hydroxyde d&#39;ammonium à l&#39;eau distillée. </li><li> Ajouter 30 ml d&#39;encre en Inde stocks (Sanford Black Magic dessin à l&#39;encre imperméable 4465 Item 44011) au mélange d&#39;ammoniaque et d&#39;eau. </li><li> Terminez avec de l&#39;eau distillée pour un volume de 200 ml. La solution est prête pour l&#39;injection. </li></ol> La solution Fekete (17): Solution de Fekete est utilisé pour blanchir l&#39;encre de Chine-gonflés porteurs de tumeurs des poumons pour distinguer les nodules tumoraux blanc du fond noir des tissus normaux. <ol><li> Ajouter 350ml EtOH 95% à bouteille en verre 1L. </li><li> Ajouter 150ml d&#39;eau distillée </li><li> Ajouter 50 ml de formaldéhyde </li><li> Ajouter 25 ml d&#39;acide glaciaire acides </li></ol>

métastases expérimentales et ctl modèle adoptifs souris transfert immunothérapie

Experimental Metastasis and CTL Adoptive Transfer Immunotherapy Mouse Model

Experimental modèle de souris est un modèle de métastases métastases simple et pourtant physiologiquement pertinents. Les cellules tumorales sont injectées par voie intraveineuse (iv) dans les veines queue de souris et de coloniser dans les poumons, ce qui, ressemblant à la dernière étape de la métastase des cellules tumorales spontanées: la survie dans la circulation, l&#39;extravasation et la colonisation dans les organes distaux. D&#39;un point de vue thérapeutique, le modèle expérimental de métastases est le modèle le plus simple et idéale puisque la cible de thérapies est souvent le point final de la métastase: tumeur métastatique établie dans l&#39;organe distal. Dans ce modèle, les cellules tumorales sont injectées dans les veines iv queue de souris et a permis de coloniser et à croître dans les poumons. Spécifiques de la tumeur CTL sont ensuite injectés iv dans la souris porteuses de métastases. Le nombre et la taille des métastases pulmonaires peuvent être contrôlés par le nombre de cellules tumorales doit être injecté et le temps de la croissance tumorale. Par conséquent, les différentes étapes de la métastase, de métastases minimale de métastases étendues, peuvent être modélisés. Métastases pulmonaires sont analysés par l&#39;inflation avec de l&#39;encre, permettant ainsi plus facile l&#39;observation visuelle et de quantification.

Une métastase pulmonaire expérimentale et CTL modèle de souris d&#39;immunothérapie pour l&#39;analyse de l&#39;interaction des cellules tumorales des cellules-T<em&gt; In vivo</em&gt;.

Métastases expérimentales et CTL Modèle adoptifs souris Transfert immunothérapie

Le modèle murin de métastase expérimentale est un modèle de métastase simple et pourtant physiologiquement pertinent. Les cellules tumorales sont injectées par voie intraveineuse (i.v.) dans...

L'objectif général de cette procédure est d'évaluer l'efficacité d'une immunothérapie par transfert adoptif de lymphocytes T spécifiques de tumeur in vivo. Cela est réalisé en premier lieu en transplantant des cellules tumorales par injection intraveineuse dans la veine caudale latérale des souris afin d'induire des métastases pulmonaires. La deuxième étape de la procédure consiste à traiter les souris porteuses de tumeur par des lymphocytes T cytotoxiques (CTL) spécifiques de la tumeur.La dernière étape consiste à utiliser de l'encre de Chine afin de visualiser et de quantifier les nodules tumoraux. En fin de compte, on peut obtenir des résultats montrant l'IEC de différents traitements en mesurant la taille des tumeurs et en quantifiant le nombre de nodules tumoraux. Bonjour, je m'appelle Mary Zimmerman et je suis membre du laboratoire du Dr Kevin Lu à la Medical College of Georgia.Bonjour, je m'appelle Shelene Hu. Je suis étudiante en deuxième année et je travaille également dans le laboratoire du Dr Lou. Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes traditionnelles, telles que les courbes de survie, est que cette procédure est à la fois qualitative et quantitative. Les implications de cette technique pourraient s'étendre à la thérapie anticancéreuse, car elle imite l'immunothérapie adoptive par lymphocytes T chez les patients humains atteints de cancer.Commençons donc. La veille des injections de cellules tumorales, ensemencez un flacon T75 avec jusqu'à 1 × 10⁷ cellules CMS4-MET dans 10 millilitres de milieu RPMI contenant 10 % de sérum. Pour obtenir des cellules tumorales en prolifération rapide, incubez toute la nuit à 37 °C le jour de l'injection.Éliminer le milieu et rincer les cellules une fois avec du PBS, puis récolter les cellules tumorales avec une solution de trypsine-EDTA à 0,05 % à 37 degrés Celsius pendant cinq minutes. Arrêter la réaction avec 10 millilitres de milieu RPMI contenant 10 % de sérum. Transférer les cellules dans un tube conique.Faire centrifuger les cellules à 1300 tr/min dans une centrifugeuse val legend RT pendant trois minutes. À température ambiante, retirer le surnageant, resuspendre les cellules dans 10 millilitres de milieu frais 1 XHB Ss pour un lavage. Puis centrifuger à nouveau et resuspendre de la même manière.Compter les cellules tumorales au hémocytomètre. Diluer les cellules dans du HBSS de manière à ce que les cellules nécessaires pour chaque injection soient resuspendues. Dans un volume total de 100 microlitres, réchauffer les souris B SEA âgées de six à huit semaines dans un bécher immergé dans de l'eau tiède.Pour dilater la veine de la queue, placer la souris dans un dispositif de contention de la veine caudale sur le plan de travail. Utiliser une microsyringe pour injecter 100 microlitres de cellules tumorales dans la veine latérale de la queue. Appliquer une technique aseptique afin d'éviter toute infection après l'injection.Appliquez une légère pression sur le site d'injection jusqu'à l'arrêt du saignement. Replacez la souris dans la cage et laissez la tumeur se développer jusqu'au stade souhaité. Le jour du transfert, pipetez plusieurs fois vers le haut et vers le bas pour resuspendre les lymphocytes T cytotoxiques purifiés, ou CTL, préparés.Comme indiqué dans le texte, transférez toutes les cellules d'une plaque dans un tube conique de 15 millilitres, sans dépasser les deux tiers du volume du tube. Insérez une pipette Pasteur stérile dans le tube conique et superposez le milieu de séparation des lymphocytes. Ajoutez le milieu ou le LSM sous les cellules jusqu'à ce que le volume total approche 14 millilitres.Veillez à ne pas perturber les couches. Faites centrifuger à 2000 tr/min pendant 20 minutes à température ambiante. N'utilisez pas le frein pour ralentir le rotor après la centrifugation ; transférez les CTL dans un nouveau tube conique de 15 millilitres.Ajouter du HBSS jusqu'à un volume d'environ 10 millilitres. Pour laver. Compter les cellules, puis centrifuger à 1300 tr/min pendant cinq minutes. À température ambiante, resuspendre dans du HBSS à la densité cellulaire requise pour les injections.En maintenant le volume total par injection à 100 microlitres. Utilisez la même technique d'injection par la queue que celle observée précédemment dans cette vidéo. Pour injecter les lymphocytes T cytotoxiques (CTL) chez des souris porteuses de tumeur, remettez la souris dans sa cage et laissez les CTL interagir avec la tumeur.Les souris sont généralement sacrifiées pour analyse entre 14 et 21 jours après le traitement par les CTL. Pour visualiser les métastases pulmonaires, placez une souris sacrifiée sur le dos sur une planche en polystyrène. Épinglez les pattes afin d'assurer un accès dégagé à la trachée.Pulvérisez la face ventrale avec de l'éthanol à 70 % en partant de l'abdomen médian. Utilisez des ciseaux pour inciser le long de la ligne médiane à travers la cage thoracique et remonter vers les glandes salivaires. Exposez la trachée.Utilisez une pince pour retirer les tissus entourant la trachée. Passez la pointe d'une pipette de 200 microlitres sous la trachée en tenant la pointe d'une main. Soulevez délicatement la trachée vers le haut et loin du corps.Faites tourner la plateforme de 180 degrés. Utilisez une seringue de 50 millilitres pour injecter de l'encre de Chine dans les poumons par la trachée. Gonflez complètement les poumons avec l'encre jusqu'à ressentir une forte résistance.Utilisez des ciseaux pour couper la trachée. Glissez une paire de forceps sous les poumons et soulevez-les hors de la souris. Rincez brièvement les poumons dans un bécher d'un litre d'eau sous une hotte chimique.Transférez les poumons vers une installation en verre contenant cinq millilitres de solution FTI. Le tissu tumoral apparaîtra sous forme de nodules blancs sur les poumons noirs. Après quelques minutes, les tumeurs peuvent désormais être comptées et conservées indéfiniment dans la solution FTI. Ici.Poumons de souris transfectées avec un carcinome mammaire. La lignée cellulaire four T one présente des taches blanches indiquant des tumeurs. Les souris transfectées avec un IRF eight dominant négatif résistant au K 79 E montrent un potentiel métastatique accru des cellules tumorales.Ces images montrent une analyse histologique de l'efficacité de l'immunothérapie par transfert adoptif de CTL. Chez les souris porteuses de tumeurs injectées avec du sérum physiologique, on observe plusieurs tumeurs six jours plus tard, indiquées par des flèches. En revanche, chez les souris injectées avec des lymphocytes T spécifiques de la tumeur, on observe une réduction des tumeurs au cours de la même expérience.Le traitement à l'encre de Chine offre un moyen plus simple de mesurer l'efficacité du transfert adoptif de lymphocytes T cytotoxiques (CTL). Ici, les nodules tumoraux blancs présents sur les poumons porteurs de tumeur les distinguent clairement des poumons ayant correctement subi un transfert adoptif de CTL, et le comptage des nodules permet une quantification impossible à obtenir par histologie. Lors de la réalisation de cette procédure, il est important de se rappeler de réchauffer les souris afin de faciliter et d'améliorer la précision des injections intraveineuses par la queue.Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez bien comprendre comment évaluer l'efficacité du traitement à l'aide de cette procédure simple permettant de quantifier la taille et le nombre de tumeurs. Merci d'avoir regardé et bonne chance dans vos expériences.

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La dissémination métastatique du cancer est la principale cause de décès liés au cancer. Nous fournissons une description en profondeur de notre méthodologie de chirurgie de survie pour établir un système orthotopique "patient comme" modèle de souris syngénique pour étudier les mécanismes de métastases dans les tumeurs d'organes solides.

Un «Patient-Like&quot; Orthotopique Syngénique modèle de souris de carcinome hépatocellulaire Métastases

Un modèle de tumeur primaire du cancer du sein orthotopique et l'ablation chirurgicale de la tumeur primitive pour prolonger la vie de la souris pour générer des métastases spontanées sont décrites. La croissance et la progression tumorale sont surveillés et quantifiés par imagerie par fluorescence luciférase.

Un modèle de souris orthotopique du sein spontané Cancer Métastase

La capacité des clones métastatiques à coloniser des sites distants dépend de leur capacité de prolifération et/ou de leur capacité à survivre dans le microenvironnement hôte sans prolifération significative. Ici, nous présentons un modèle animal qui permet une visualisation quantitative des deux types de colonisation hépatique par des clones métastatiques.

Avancée Modèle animal de colorectal métastatique du foie: Techniques d&#39;imagerie et propriétés des métastatiques Clones

Ici, nous décrivons un modèle de xénogreffe murine qui ressemble fonctionnellement à un réservoir ommaya chez les patients. Nous avons développé le Murine Ommaya pour étudier de nouvelles thérapies pour la maladie leptoméningée universellement mortelle.

Un modèle murin de xénogreffe d’Ommaya pour étudier le traitement ciblé direct de la maladie leptoméningée

Ici, nous présentons un protocole de transplantation tumorale pour la caractérisation des lymphocytes infiltrés tumoraux inhérents à la tumeur et dérivés de la périphérie dans un modèle tumoral murin. Le traçage spécifique de l’afflux de cellules immunitaires dérivées du receveur avec cytométrie en flux révèle la dynamique des changements phénotypiques et fonctionnels de ces cellules au cours des réponses immunitaires antitumorales.

Transplantation tumorale pour évaluer la dynamique des lymphocytes T CD8+ infiltrant la tumeur chez la souris

Cet article décrit un flux de travail de techniques utilisées pour tester de nouveaux médiateurs candidats de métastases de mélanome et leur(s) mécanisme(s) d’action.

Une plateforme de découverte robuste pour l’identification de nouveaux médiateurs de métastases de mélanome

Le protocole présente un modèle d’immunothérapie du cancer utilisant la vaccination tumorale cellulaire avec le mélanome B16-F10 exprimant Flt3L. Ce protocole démontre les procédures, y compris la préparation de cellules tumorales en culture, l’implantation tumorale, l’irradiation cellulaire, la mesure de la croissance tumorale, l’isolement des cellules immunitaires intratumorales et l’analyse par cytométrie en flux.

Modèle expérimental d’immunothérapie du mélanome utilisant la vaccination tumorale avec une cytokine hématopoïétique

Ce protocole décrit l’implantation orthotopique de cellules cancéreuses dérivées de patients dans la paroi du caecum de souris immunodéficientes. Le modèle récapitule la maladie métastatique du cancer colorectal avancé et permet l’évaluation de nouveaux médicaments thérapeutiques dans un scénario cliniquement pertinent de métastases pulmonaires et hépatiques.

L’implantation orthotopique de cellules cancéreuses dérivées de patients chez la souris récapitule le cancer colorectal avancé

Le plan expérimental présenté ici fournit un modèle de reproduction utile pour les études des lymphocytes T CD8+ spécifiques de l’antigène au cours des métastases ganglionnaires (LN), ce qui exclut la perturbation des lymphocytes T CD8+ témoins.

Modèle de métastases ganglionnaires drainantes pour évaluer la dynamique des lymphocytes T CD8+ spécifiques de l’antigène au cours de la tumorigenèse

Nous décrivons une méthode permettant d’utiliser des lymphocytes infiltrant la tumeur (TIL) de souris par cytométrie en flux pour le transfert de cellules adoptives. Ce protocole vise à vérifier la cytotoxicité spécifique des TIL contre les tumeurs dans un modèle murin syngénique de cancer du pancréas, fournissant ainsi des informations sur le développement de thérapies cellulaires adoptives pour le cancer du pancréas.

Isolement par cytométrie en flux et évaluation thérapeutique de lymphocytes infiltrant la tumeur dans un modèle murin de cancer du pancréas

Découvrez l'immunothérapie par transfert adoptif de lymphocytes T cytotoxiques chez la souris pour étudier les métastases pulmonaires. Cette méthode permet d'évaluer l'efficacité thérapeutique in vivo.

Métastases expérimentales et CTL Modèle adoptifs souris Transfert immunothérapie

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