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Placez une grille de microscopie électronique à transmission ou de MET recouverte de résine polyvinyle formelle sur un film plastique propre.
Ajoutez une suspension de vésicules extracellulaires ou EV concentrées et purifiées, des particules nanométriques liées à une membrane, sur la grille.
Ces VE sont sécrétés par les cyanobactéries et transportent des macromolécules à l’intérieur de leurs membranes.
Incuber la grille pour permettre aux VE de s’adsorber sur sa surface recouverte de résine.
Touchez le bord de la grille avec un papier filtre propre pour absorber l’excès de suspension.
Faites flotter la grille sur de l’acétate d’uranyle pour colorer les vésicules collées.
L’acétate d’uranyle entoure les vésicules, créant un contour sombre qui améliore le contraste pendant l’imagerie.
Retirez la grille et utilisez du papier filtre pour absorber l’excès de tache.
Lavez la grille avec de l’eau ultra-pure pour éliminer toute tache résiduelle. Répétez le lavage, puis laissez-le sécher à l’air.
Enfin, visualisez les VE à l’aide de la MET pour évaluer leur morphologie, leur taille et leur pureté.
Appliquez soigneusement cinq microlitres de vésicule et laissez reposer pendant cinq minutes. Retirez l’échantillon en touchant le bord d’une grille sur un morceau de papier filtre propre.
Pipetez 20 à 50 microlitres d’acétate d’uranyle à 2 % sur une surface plane recouverte d’un film plastique. Placez ensuite la grille flottant dessus pendant deux minutes. Retirez l’acétate d’uranyle à l’aide de papier filtre et faites flotter brièvement sur une goutte d’eau ultrapure pour le laver.