Isolement de vésicules extracellulaires bactériennes à l’aide de la chromatographie d’exclusion stérique

Prenez une chromatographie d’exclusion stérique ou une colonne SEC remplie de billes de résine poreuse de taille définie. Il contient un réservoir d’échantillons au sommet.

Ajoutez une solution saline tamponnée au phosphate ou du PBS pour équilibrer les billes de la colonne et jetez le flux.

Chargez un filtrat de culture bactérienne concentré qui contient des vésicules extracellulaires ou VE, des protéines sécrétées et des contaminants.

Les VE sont des nanovésicules à base de lipides qui transportent des molécules bioactives et sont sécrétées par des bactéries.

Une fois que le filtrat pénètre dans les billes, ajoutez du PBS pour le faire passer à travers le lit de résine.

Jeter l’éluat initial contenant de gros contaminants non vésiculaires.

Placez un tube de collecte sous la sortie et ajoutez séquentiellement du PBS.

Les VE de grande taille évitent les pores de résine plus petits, se déplacent à travers les espaces interparticulaires entre les billes et éluent en premier.

Les protéines et les contaminants plus petits pénètrent dans les pores, suivent des chemins plus longs et éluent plus tard.

Collecter les fractions à élution précoce contenant des VE et les stocker pour analyse.

Pour l’iso