Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
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Commencez par une culture d’E. coli prétraitée avec un antibiotique.
Cet antibiotique bloque la division cellulaire, ce qui entraîne la formation de cellules filamenteuses allongées avec une teneur accrue en ADN.
Déposer une partie de la culture sur une plaque de gélose riche en nutriments et incuber.
Les cellules filamenteuses ne se divisent pas malgré une croissance continue ; Seules les cellules non filamenteuses forment des colonies, ce qui entraîne un faible nombre de colonies.
Diluez la culture bactérienne restante et ajoutez un colorant fluorescent de liaison à l’ADN. Ensuite, incubez dans l’obscurité.
Le colorant pénètre dans les cellules et se lie à l’ADN.
Vortex l’échantillon, puis passez-le dans un cytomètre en flux.
La quantité de lumière diffusée par chaque cellule correspond à sa taille.
De même, la fluorescence émise par les acides nucléiques liés aux colorants indique le contenu en ADN bactérien.
Les cellules traitées aux antibiotiques présentent une diffusion et une fluorescence accrues, reflétant une croissance filamenteuse et une réplication continue de l’ADN sans division.
Cela démontre des modifications de la physiologie bactérienne causées par les antibiotiques inhibite
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