Quantification de la charge bactérienne tissulaire dans un modèle murin d’infection intestinale chronique

Commencez par une souris euthanasiée infectée par une souche bactérienne résistante aux antibiotiques qui modélise une infection intestinale chronique.

Exposez la cavité abdominale pour accéder au cécum et à la rate.

Prélèvez les tissus cecals et spléniques, qui représentent les sites intestinaux et systémiques de colonisation bactérienne.

Placez chaque mouchoir dans un tube séparé contenant un tampon et une bille en acier.

Homogénéisez le tissu en agitant rapidement les tubes, ce qui provoque la collision des billes d’acier avec le tissu, la dégradation et la libération de bactéries dans la suspension.

Effectuer des dilutions en série des homogénéats dans le tampon afin de réduire la concentration bactérienne.

Les aliquotes de plaque de chaque dilution sur l’agar nutritif complétés par un antibiotique pour récupérer sélectivement les bactéries résistantes aux antibiotiques.

Incubez les plaques pour permettre aux bactéries viables de se développer en colonies.

Comptez les colonies pour estimer le nombre de bactéries viables par gramme de tissu et comparez les charges bactériennes dans le cécum et la rate.

D’abord, installez des microtubes à fond rond à verrouillage sécurisé de 2 millilitres