Enrichissement de phosphopeptides à base de dioxyde de titane : une méthode d’isolement sélectif de phosphopeptides à partir d’une bibliothèque de peptides

Les phosphopeptides sont de courtes chaînes d’acides aminés contenant des résidus phosphorylés de sérine, de thréonine ou de tyrosine. Pour isoler les phosphopeptides d’un mélange de peptides, commencez par prendre des billes de dioxyde de titane dans un tube. Équilibrer pour conditionner les billes à l’aide d’un tampon de liaison acidifié approprié contenant un agent de trempe. Ajoutez la concentration souhaitée de mélange de peptides à la boue de billes.

Incuber le mélange en secouant continuellement pour éviter que les billes ne se déposent. L’état acide favorise la formation de liaisons coordonnées avec le groupe phosphate des phosphopeptides avec les billes de titane. L’agent de trempe contenu dans le tampon réduit toute liaison non spécifique de peptides non phosphorylés aux billes, les laissant en suspension.

Centrifugeuse pour granuler les billes liées au phosphopeptide, tandis que les peptides non phosphorylés restent dans le surnageant. Jetez le surnageant. Transférez les billes liées au phosphopeptide dans une colonne de filtre de spin pré-assemblée. Centrifugeuse pour éliminer le tampon de liaison et piéger les billes conjuguées au phosphopeptide.

Transférez le filtre d