Récolte de DRG à partir de la colonne vertébrale du rat : une procédure pour extraire le ganglion de la racine dorsale de la colonne vertébrale d’un modèle de rat

Les ganglions de la racine dorsale ou DRG sont des amas de corps cellulaires de neurones sensoriels logés dans les vertèbres de chaque côté de la moelle épinière. Leur fonction principale est de transmettre des signaux neuronaux sensoriels du système nerveux périphérique au système nerveux central.

Pour isoler les ganglions de la racine dorsale, commencez par prélever une épine de rat fraîchement récoltée. Disséquez la colonne vertébrale pour séparer les régions cervicale, thoracique et lombaire. Conservez les sections de la colonne vertébrale dans un tampon approprié pour assurer l’hydratation des tissus.

Maintenant, positionnez la section thoracique avec sa face dorsale vers le haut. Divisez la section en deux moitiés latérales. Ensuite, fixez la moitié disséquée du segment de la colonne vertébrale, côté médial vers le haut. Détachez doucement la moelle épinière coupée en deux - une longue structure tubulaire - des os vertébraux segmentés de la section pour révéler le DRG sous-jacent.

Les DRG apparaissent sous forme de masses blanches distinctes avec des racines dorsales et ventrales intégrées dans le canal rachidien. À l’aide d’une pince fine, retirez délicatement le DRG pour le déloger du canal rachidien. Enfin, transférez le DRG récolté dans un milieu approprié pour d’autres applications en aval.

Nettoyez la peau dorsale d’un rat euthanasié avec de l’éthanol à 70 % et utilisez des ciseaux pour enlever la colonne vertébrale. Séparez les régions cervicale, thoracique et lombaire et placez les sections de la colonne vertébrale dans une boîte de culture de 10 centimètres avec PBS pour garder les échantillons de tissus hydratés.

À l’aide de ciseaux à os délicats, ouvrez les os vertébraux thoraciques et cervicaux dans les faces dorsale et ventrale pour séparer la colonne vertébrale en deux moitiés latérales, et placez les sections de tissus dans un plat propre de 10 centimètres avec du PBS frais. À l’aide d’une pince, détachez doucement la moelle épinière des os vertébraux pour visualiser les ganglions de la racine dorsale.

En plaçant les pointes d’une paire de pinces fines tenues sous chaque ganglion, saisissez le tissu et retirez-le de la cavité osseuse dans laquelle il est logé. Immédiatement après la récolte, placez chaque ganglion dans un milieu de culture DMEM complété par 2 % de pénicilline et de streptomycine ou de stylo/streptocoque et de 10 % de sérum bovin fœtal ou FBS pour aider à prévenir la contamination bactérienne des tissus nerveux.