Coloration périodique à l’acide de Schiff ou PAS : une méthode pour évaluer les déformations structurelles du glomérule

Le glomérule est un réseau complexe de capillaires à l’intérieur du rein qui filtre les déchets et élimine l’excès de liquide du sang. Le taux de filtration rénale dépend de cette structure spécialisée, qui peut être examinée à l’aide d’une coloration périodique à l’acide de Schiff ou au PAS.

Pour commencer, prenez une section du cortex rénal paraffiné sur une lame de verre. Traitez la lame avec du xylène. Les molécules de xylène dissolvent la cire de paraffine de la section du tissu. Ensuite, exposez l’échantillon à des concentrations décroissantes d’alcool. L’alcool élimine les traces de xylène tout en réhydratant la section de tissu pour la fixation ultérieure de la tache.

Maintenant, ajoutez de l’acide périodique à l’échantillon. L’acide périodique convertit les diols présents dans les tissus polysaccharides, tels que le glycogène ou la mucine, en aldéhydes. Ces aldéhydes réagissent avec le réactif de Schiff, une combinaison d’acide fuchsine-soufre, formant un colorant de couleur magenta qui colore la section du tissu. Rincez la lame pour enlever l’excès de tache.

Après le rinçage, ajoutez du fer-hématoxyline, une contre-coloration nucléaire qui se lie à l’ADN et le colore en violet. Laver pour enlever l’excès de tache. Enfin, déshydratez l’échantillon avec des concentrations croissantes d’alcool suivies de xylène, qui sert d’agent nettoyant. Cette étape permet d’améliorer le contraste de la section de tissu pour l’examen microscopique.

La maladie glomérulaire peut être visualisée comme un épaississement de la membrane basale, des capillaires altérés et des cellules anormales liées à une altération de la fonction rénale.

Pour une visualisation détaillée des cellules glomérulaires et de la matrice mésangiale, séchez les échantillons de cortex rénal fixés inclus en paraffine à 37 degrés Celsius pendant 1 heure, puis déparaffinisez avec des immersions consécutives de xylène et d’éthanol descendant. Réhydratez les échantillons dans de l’eau distillée pendant 5 minutes et incubez les lames dans une solution d’acide périodique dans une sorbonne.

Après 5 minutes, rincez les lames avec trois lavages de 5 minutes dans 100 millilitres d’eau distillée, suivis d’une incubation de 15 minutes dans le réactif de Schiff. À la fin de l’incubation, lavez les lames à l’eau courante du robinet pendant 5 minutes et contre-colorez à l’hématoxyline pendant 3 secondes avant de rincer abondamment à l’eau courante du robinet pendant encore 15 minutes.

Ensuite, déshydratez les lames avec des immersions ascendantes à l’éthanol et deux immersions consécutives de 3 minutes au xylène. Après séchage à l’air, les lames peuvent être montées avec un milieu de montage à base de xylène pour l’évaluation de leur structure glomérulaire au microscope optique à un grossissement de 400X.

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