Isolement des vaisseaux cérébraux de souris : un protocole pour isoler les vaisseaux intacts d’un échantillon de cerveau murin

Les vaisseaux cérébraux sont entourés d’une couche de cellules endothéliales étroitement connectées. Ces cellules sont entourées d’une membrane basale ainsi que de composants cellulaires tels que les péricytes et les astrocytes.

Pour isoler les vaisseaux cérébraux des neurones et des cellules gliales environnants, prenez un bécher contenant du cerveau de souris immergé dans un tampon d’homogénéisation. Coupez-le en petits morceaux. Homogénéiser le tissu cérébral pour le dissocier, en libérant des neurones, des cellules gliales et des vaisseaux cérébraux. Ce traitement perturbe également la gaine de myéline entourant les neurones.

Transférez l’homogénat dans un tube et centrifugez-le pour granuler les récipients. Les composants plus légers, tels que les neurones et les cellules gliales, restent dans le surnageant, tandis que la myéline forme une couche d’interface dense entourant la cuillette.

Jetez le surnageant et remettez en suspension la pastille de vaisseau avec la couche de myéline attachée dans un milieu à gradient de densité approprié. Centrifuger pour granuler les vaisseaux et obtenir une bande de myéline riche en graisse flottant au sommet du surnageant. Retirez la bande d