Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
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Commencez par les plantes Arabidopsis portant des capitules immatures. Trempez les capitules dans une suspension cellulaire d’Agrobacterium portant de l’ADN-T cloné avec un chromosome artificiel bactérien binaire ou BIBAC, un vecteur se répliquant à la fois dans les systèmes E. coli et Agrobacterium. Ce vecteur binaire de l’ADN-T peut délivrer de grands transgènes tels que le gène de résistance aux herbicides et des marqueurs sélectionnables par fluorescence le long d’un promoteur spécifique à la graine.
Pendant que les capitules sont encore immergés, agitez doucement les plantes pour améliorer leur contact avec Agrobacterium. Grâce à sa capacité inhérente à infecter les plantes, Agrobacterium transfère le transgène dans la cellule florale. Lorsque le transgène pénètre dans la cellule, il se déplace vers le noyau et fusionne avec le génome de la plante.
Maintenant, enveloppez la plante dans un film alimentaire et incubez dans l’obscurité pour retenir l’humidité et une meilleure transformation. Retirez le film et faites pousser les plantes dans des conditions physiologiques jusqu’à ce qu’elles produisent des graines.
Ensuite, récoltez les graines et observez-les au microscope à fluo
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