Électrophorèse capillaire d’affinité de décalage de mobilité : une méthode pour analyser les interactions échantillon-ligand en fonction de la migration différentielle de complexes protéine-ligand

Les ligands, tels que les ions métalliques, se lient de manière non covalente à une protéine spécifique, formant un complexe protéine-ion métallique. Cette liaison modifie la charge globale de la protéine, ce qui permet de caractériser ces complexes par électrophorèse capillaire d’affinité.

Pour commencer, prenez un capillaire en verre mince et préconditionné avec des groupes silanol chargés sur la surface interne. Rincez le capillaire avec une solution EDTA. L’EDTA est un agent chélateur qui élimine toutes les impuretés d’ions métalliques. Maintenant, injectez hydrodynamiquement la solution d’échantillon contenant la protéine souhaitée dans le capillaire à partir de son extrémité positive ou de son anode.

Appliquez une tension élevée pour créer un flux électro-osmotique, forçant les protéines dans leur conformation native avec des charges inhérentes à se déplacer à l’intérieur du capillaire vers la cathode. Enregistrer le schéma de migration des protéines non liées à partir du capillaire.

Ensuite, introduisez une solution de ligand spécifique dans le capillaire avec les échantillons de protéines, et appliquez la même tension. À l’intérieur du capillaire, les molécules de ligand se