Essai de décalage de mobilité électrophorétique pour la détection de complexes facteur de transcription-ADN

Les protéines régulatrices, comme les facteurs de transcription, reconnaissent et se lient à des séquences d’ADN spécifiques dans les régions promotrices, régulant ainsi l’expression des gènes.

Pour détecter des interactions spécifiques entre le facteur de transcription et l’ADN à l’aide du test de déplacement de mobilité électrophorétique, commencez par un tube contenant un facteur de transcription souhaité et des sondes d’ADN courtes, infrarouges et fluorescentes spécifiques dans un tampon de liaison. Incuber dans l’obscurité, en évitant le photoblanchiment par colorant.

La force ionique et le pH du tampon fournissent des conditions appropriées pour que le facteur de transcription identifie et lie des séquences de liaison spécifiques sur la sonde d’ADN. Les ions magnésium dans le tampon stabilisent davantage les complexes protéine-ADN.

Ajoutez un colorant de chargement approprié au mélange, ce qui aide à visualiser la progression de l’électrophorèse. Chargez ce mélange et les sondes d’ADN dans les puits d’un gel de polyacrylamide préfabriqué et non dénaturant.

Effectuez l’électrophorèse dans l’obscurité.

Le champ électrique appliqué fait que les sondes d’ADN de faible poids moléc