L'application de la ligature permanente artère cérébrale moyenne chez la souris

L'objectif général de cette procédure est d'étudier l'ischémie cérébrale focale chez les modèles animaux. Cela est réalisé en effectuant d'abord une petite incision sur la peau entre l'œil gauche et la base de l'oreille. Ensuite, une craniotomie est pratiquée au niveau de la jonction de l'arcade zygomatique et de l'os squameux afin d'exposer l'artère cérébrale moyenne, puis cette dernière est ligaturée à l'aide d'un cauterisateur pour petits vaisseaux.

Enfin, la peau est suturée afin de fermer la plaie. En définitive, les résultats obtenus peuvent montrer un infarctus situé dans l'hémisphère gauche du cerveau de la souris. Le cerveau peut être coloré au TTC ou analysé par IRM afin de visualiser un accident vasculaire cérébral.

Le cerveau après un accident vasculaire cérébral peut également être utilisé pour déterminer l'expression des protéines ou de l'ARNm. Bonjour, je suis Garza Chola. Je suis étudiant diplômé dans le laboratoire de Gale Johnson à l'Université de Rochester.

Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de l'AVC, comme l'illustration des mécanismes menant à la mort cellulaire dans le cerveau ischémique. Pour préparer la chirurgie, stérilisez tous les instruments chirurgicaux, les compresses de gaze et les applicateurs cognitifs au moyen d'un autoclave. Conservez les outils chirurgicaux dans de l'éthanol à 70 % pendant l'intervention et laissez-les sécher à l'air sur une compresse de gaze stérile juste avant utilisation.

Vaporisez la zone de travail avec de l'éthanol à 70 % deux heures avant la chirurgie. Injectez à la souris 0,05 milligramme par kilogramme de buprénorphine. Le médicament sera administré à nouveau immédiatement après la chirurgie, puis toutes les trois à cinq heures pendant les 24 premières heures du période postopératoire.

Utilisez un vaporisateur d'anesthésique pour anesthésier la souris avec un mélange gazeux contenant 3 % d'ISO fluoré et 20 % d'oxygène. Ajustez la quantité d'oxygène à l'aide d'un débitmètre. Vérifiez le niveau d'anesthésie en pinçant l'orteil ou la queue.

Entretenir le niveau d'anesthésie avec du fluorure d'ISO à 2 %. Appliquer des larmes artificielles sur les yeux de la souris et faire attention à ne pas endommager l'œil pendant la procédure chirurgicale.

Placez la souris sur son côté droit en position latérale à l’aide des tondeuses pour animaux. Rasez la zone située du côté gauche, entre l’œil gauche et la base de l’oreille gauche. Nettoyez la zone en alternant une solution de Bétadine et de l’éthanol à 70 %, à l’aide d’appliquateurs en coton, en frottant légèrement la zone.

La répétition est nécessaire. Placer la souris sur un coussin chauffant relié à une sonde rectale afin de maintenir la température corporelle à 37 degrés Celsius ; insérer la sonde rectale en utilisant de l'huile minérale. Positionner la souris sur son côté droit sous le microscope et la fixer avec du ruban adhésif.

Découpez une fenêtre dans une compresse en gaze et recouvrez la zone chirurgicale avec des ciseaux droits fins. Pratiquez une incision verticale entre l’œil gauche et la base de l’oreille gauche. Utilisez des pinces hémostatiques courbes pour maintenir la zone chirurgicale ouverte en cas de dessèchement excessif du tissu pendant l’intervention.

Utilisez des applicateurs à embout cotonneux pour appliquer du PBS stérile. Utilisez des ciseaux à ressort pour effectuer une incision horizontale sur le muscle temporal et tirez lentement avec une pince pour séparer légèrement le muscle temporal du crâne. Tenez la mâchoire avec une pince courbe et utilisez une aiguille de calibre 18 pour réaliser une petite craniotomie sous-temporale au niveau de la jonction de l’arcade zygomatique et du squame de l’os temporal.

Avec un burin, les opérateurs retirent de petits morceaux du crâne pour exposer l'artère cérébrale moyenne. L'arcade zygomatique et le contenu orbital ne doivent pas être endommagés au cours de cette procédure. À l'aide d'un cautère pour petits vaisseaux, ligaturer la portion distale de l'artère cérébrale moyenne, remettre le muscle temporal en position initiale, puis utiliser des sutures en nylon 5-0.

Pour fermer le site d'incision, interrompre l'anesthésie et retirer la sonde rectale. Injecter une deuxième dose de buprénorphine au souris par voie sous-cutanée. Replacer la souris dans la cage, qui avait été maintenue à 37 degrés Celsius.

Avec un panneau chauffant. Surveillez attentivement la souris pendant les 24 heures suivantes afin de détecter tout signe de malaise, notamment une diminution de l'appétit ou de la consommation d'eau, une posture voûtée, une respiration accélérée ou des poils hérissés. Fournissez immédiatement à la souris un gel de récupération après la chirurgie.

Attendre deux à trois heures après la chirurgie. Ensuite, injecter la souris par voie sous-cutanée avec de la buprénorphine toutes les trois à cinq heures, jusqu’à 24 heures. Vingt-quatre heures après la chirurgie, anesthésier profondément la souris et la perfuser avec du TTC à 4 %.

Retirer le cerveau et le placer dans une solution de paraformaldéhyde à 4 % pendant toute la nuit. Le jour suivant, positionner le cerveau dans le bloc d'incision. Utiliser des lames de rasoir pour découper le cerveau en tranches d'un millimètre d'épaisseur.

Placer les tranches à côté d'une règle graduée en millimètres. À l'aide d'un appareil photo numérique relié à un microscope stéréoscopique, photographier les tranches dans le logiciel Image J.

Cliquez sur le menu Fichier et ouvrez la photo souhaitée. Cliquez sur l'onglet Ligne droite dans le programme. Tracez une ligne droite entre les deux bords de la règle.

Cliquez sur le menu analyser et sélectionnez définir l'échelle. Réglez la distance connue sur un et l'unité de longueur sur le millimètre. Cliquez sur l'onglet cercle à main levée.

Tracer un cercle pour délimiter l’hémisphère controlatéral. Cliquer sur le menu analyser et sélectionner mesurer. La fenêtre de calcul s’affichera, indiquant la surface du cercle tracé.

Tracer un autre cercle autour de l’hémisphère homolatéral, en excluant la zone blanche hachurée. Mesurer la surface comme indiqué précédemment. La nouvelle valeur sera ajoutée à la fenêtre de calcul.

La différence entre la première et la deuxième valeur représente la zone de l'infarctus. Calculez la surface de l'accident vasculaire cérébral dans chaque coupe en répétant les étapes ci-dessus pour des épaisseurs de coupe d'un millimètre. Calculez le volume de l'accident vasculaire cérébral en additionnant la surface de l'accident vasculaire cérébral calculée pour chaque coupe.

Cette figure montre le cerveau coloré au TTC 24 heures après la ligature permanente de l'artère cérébrale moyenne chez une souris de type sauvage C57BL/6. Le site de l'infarctus apparaît blanc et peut être observé à différentes amplifications et angles. Sont représentées ici des tranches d'un millimètre d'épaisseur du cerveau infarci coloré au TTC, de l'infarctus antérieur à postérieur.

Le volume a été calculé 24 heures après la chirurgie. Le volume de l'infarctus est d'environ 23 millimètres cubes une fois. Cette technique peut être réalisée en 30 minutes si elle est effectuée correctement.

Merci d'avoir regardé.