L'application de la ligature permanente artère cérébrale moyenne chez la souris

L'artère cérébrale moyenne (MCA) ligature est une technique pour étudier l'ischémie cérébrale focale chez des modèles animaux. Dans cette méthode, l'artère cérébrale moyenne est exposée par craniotomie et ligaturée par cautérisation. Cette méthode donne les volumes d'infarctus hautement reproductible et une augmentation des taux de survie post-opératoires par rapport aux autres méthodes disponibles.

L’objectif global de cette procédure est d’étudier l’ischémie cérébrale focale dans des modèles animaux. Ceci est accompli en faisant d’abord une petite incision sur la peau entre l’œil gauche et la base de l’oreille. Ensuite, une craniotomie est réalisée à la jonction de l’arc zygomatique et de l’os squamal pour exposer l’artère cérébrale moyenne, l’artère cérébrale moyenne est ensuite ligaturée à l’aide d’un cautériseur de petits vaisseaux.

Enfin, la peau est suturée pour refermer la plaie. En fin de compte, on peut obtenir des résultats qui montrent un infarctus situé sur l’hémisphère gauche du cerveau de la souris. Le cerveau peut être coloré avec TTC ou scanné à l’aide de l’IRM pour la visualisation d’un accident vasculaire cérébral.

Le cerveau de l’AVC peut également être utilisé pour déterminer l’expression des protéines ou de l’ARNm. Bonjour, je m’appelle Garza Chola. Je suis étudiante diplômée dans le laboratoire de Gale Johnson à l’Université de Rochester.

Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de l’AVC, comme l’illustration des mécanismes qui conduisent à la cellule du cerveau ischémique. Pour vous préparer à la chirurgie, stérilisez tous les instruments chirurgicaux, les éponges de gaze et les applicateurs cognitifs par autoclave. Conservez les outils chirurgicaux dans de l’éthanol à 70 % pendant l’opération et séchez-les à l’air libre sur de la gaze stérile juste avant de les utiliser.

Vaporisez la zone de travail avec de l’éthanol à 70 % deux heures avant l’opération. Injectez à la souris 0,05 milligramme par kilogramme de buprénorphine. Le médicament sera administré à nouveau immédiatement après la chirurgie, puis toutes les trois à cinq heures pendant les premières 24 heures postopératoires.

Utilisez un vaporisateur anesthésique pour anesthésier la souris avec un mélange gazeux de fluor ISO à 3 % et d’oxygène à 20 %. Ajustez la quantité d’oxygène à l’aide d’un débitmètre. Testez le niveau d’anesthésie en pinçant les orteils ou la queue.

Maintenez le niveau d’anesthésie avec 2 % de fluor ISO. Appliquez des larmes artificielles sur les yeux de la souris et faites attention pour éviter d’endommager l’œil. Pendant l’intervention chirurgicale.

Placez la souris sur son côté droit en position latérale à l’aide de la tondeuse à animaux. Rasez la zone du côté gauche entre l’œil gauche et la base de l’oreille gauche. Nettoyez la zone en alternant entre une solution de bétadine et de l’éthanol à 70 % à l’aide d’applicateurs à embout de coton et en frottant légèrement la zone.

L’opération est nécessaire. Placez la souris sur un coussin chauffant relié à une sonde rectale Pour maintenir la température corporelle à 37 degrés Celsius, insérez la sonde rectale à l’aide d’huile minérale. Placez la souris sur son côté droit sous le microscope et fixez-la avec du ruban adhésif.

Coupez une fenêtre dans une éponge de gaze et couvrez la zone chirurgicale avec de fines ciseaux droits. Faites une incision verticale entre l’œil gauche et la base de l’oreille gauche. Utilisez des hémostats incurvés pour maintenir la zone chirurgicale ouverte si un dessèchement excessif des tissus se produit pendant la chirurgie.

Utilisez des applicateurs à embout en coton pour appliquer du PBS stérile. Utilisez des ciseaux à ressort pour faire une incision horizontale sur le muscle temporal et tirez lentement avec des pinces pour séparer légèrement le muscle temporal du crâne. Tenez l’os de la mâchoire avec une pince incurvée et utilisez une aiguille de calibre 18 pour faire une petite craniotomie sous-temporale à la jonction de l’arc zygomatique et de l’os de la semelle squam.

Avec l’os couru, les jurés enlèvent de petits morceaux du crâne pour exposer le MCA. L’arc zygomatique et le contenu orbitaire ne doivent pas être endommagés au cours de ce processus. À l’aide d’un cautériseur de petits vaisseaux, ligaturez la partie distale du MCA, remettez le muscle temporal dans sa position d’origine et utilisez cinq sutures en nylon zéro.

Pour fermer le site d’incision, arrêtez l’anesthésie et retirez la sonde rectale. Injectez à la souris une deuxième dose de buprénorphine par voie sous-cutanée. Remettez la souris dans la cage, qui a été maintenue à 37 degrés Celsius.

Avec un panneau chauffant. Surveillez de près la souris pendant les prochaines 24 heures pour détecter tout inconfort, y compris une diminution de l’appétit ou de la consommation d’eau, une posture voûtée, une respiration accrue ou des poils en érection. Fournissez à la souris du gel de récupération immédiatement après la chirurgie.

Attendez deux à trois heures après la chirurgie. Ensuite, il injecte de la buprénorphine chez la souris par voie sous-cutanée toutes les trois à cinq heures jusqu’à 24 heures. 24 heures après l’opération, anesthésier profondément la souris et perfuser la souris avec 4 % TTC.

Retirez le cerveau et placez-le dans une solution d’aldéhyde paraforme à 4 % pendant la nuit. Le lendemain, positionnez le cerveau dans le bloc de section. Utilisez des lames de rasoir pour couper le cerveau en tranches d’un millimètre d’épaisseur.

Placez les tranches à côté d’une règle à l’échelle millimétrique. À l’aide d’un appareil photo numérique connecté à un microscope de dissection. Photographiez les tranches dans le logiciel d’image J.

Cliquez sur le menu Fichier et ouvrez la photo souhaitée. Cliquez sur l’onglet ligne droite dans le programme. Tracez une ligne droite entre les deux marges de la règle.

Cliquez sur le menu Analyser et sélectionnez définir l’échelle. Définissez la distance connue comme un et l’unité de longueur comme millimètre. Cliquez sur l’onglet du cercle à main levée.

Dessinez un cercle pour délimiter l’hémisphère controlatéral. Cliquez sur le menu Analyser et sélectionnez mesurer. La fenêtre de calcul apparaîtra et affichera l’aire du cercle dessiné.

Tracez un autre cercle autour de l’hémisphère ipsilatéral, en excluant la zone du trait blanc. Mesurez la zone comme indiqué précédemment. La nouvelle valeur sera ajoutée à la fenêtre de calcul.

La différence entre la première et la deuxième valeur représente la surface de l’infarctus. Calculez la surface de trait dans chaque tranche en répétant les étapes ci-dessus pour des épaisseurs de tranche d’un millimètre. Calculez le volume de trait en additionnant la surface de trait calculée dans chaque tranche.

Cette figure montre la coloration TTC du cerveau 24 heures après la ligature permanente du MCA chez une souris sauvage de type C 57 BL six. Le site de l’AVC est d’apparence blanche et peut être vu de différents grossissements et angles. Voici des tranches d’un millimètre d’épaisseur du cerveau de l’AVC coloré par la TTC, de l’infarctus antérieur à l’infarctus postérieur.

Le volume a été calculé 24 heures après l’opération. Le volume de l’infarctus est d’environ 23 millimètres cubes de moutarde. Cette technique peut être réalisée en 30 minutes si elle est correctement exécutée.

Merci d’avoir regardé.