Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 8:15 min • July 8th, 2025
Le glycogène, un polymère de glucose ramifié, est une réserve d’énergie dans les compartiments intermyofibrillaires subcellulaires, intramyofibrillaires et sous-sarcolemmaux du muscle squelettique humain.
Pour quantifier la distribution subcellulaire du glycogène à l’aide de la microscopie électronique à transmission, TEM, on obtient du tissu musculaire squelettique humain isolé. Fixer avec du glutaraldéhyde pour préserver la structure des tissus. Postfixez le tissu dans une solution de tétroxyde d’osmium et de ferrocyanure de potassium.
Le complexe réduit osmium-ferrocyanure se lie aux groupes hydroxyles dans le glycogène, améliorant ainsi le contraste des particules de glycogène dans le muscle. De plus, les membranes et le réticulum sarcoplasmique - un organite lié à la membrane - sont colorés.
Déshydrater les tissus en augmentant les concentrations d’éthanol. S’enfoncer dans la résine pour former un bloc solide. Obtenir des sections ultra-minces avec des fibres musculaires orientées longitudinalement ; transfert sur les réseaux TEM.
Immergez les grilles dans de l’acétate d’uranyle, une solution de métaux lourds. Les ions uranyle se lient aux lipides et aux protéines chargés néga
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