Quantification d’interférons bioactifs de type I à l’aide d’un dosage rapporteur de phosphatase alcaline embryonnaire sécrétée

Pour quantifier les interférons bioactifs de type I, tels que l’interféron alpha et l’interféron bêta, dans un échantillon d’essai, prenez une plaque multipuits contenant des cellules rapporteures modifiées. Ces cellules expriment le gène rapporteur de la phosphatase alcaline embryonnaire sécrétée, SEAP, sous le contrôle du promoteur inductible par l’interféron alpha et bêta.

Ajouter l’échantillon d’essai contenant une concentration inconnue d’interféron de type I. Pipetez une gamme de concentrations d’interféron de type I humain vers d’autres puits, qui servent de contrôles standard. Couver.

L’interféron de type I dans le puits de test se lie à un récepteur de surface cellulaire spécifique, activant les Janus kinases. Ces protéines kinases phosphorylent les transducteurs de signal et les activateurs des protéines de transcription, STAT, qui se dimérisent et forment un complexe avec un facteur de régulation de l’interféron spécifique.

Lorsqu’il pénètre dans le noyau, le complexe se lie à une séquence d’ADN spécifique dans le promoteur inductible de l’interféron alpha et bêta, activant la transcription du gène SEAP et produisant les enzymes SEAP, qui sont sécrétées dans le milieu.

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