Évaluation de l’efficacité d’un composé d’essai contre les mycobactéries dans un bouillon

Prenez une plaque multipuits contenant des dilutions en série du composé testé, un antibiotique aminoglycoside.

Ajoutez une suspension de Mycobacterium tuberculosis – une bactérie pathogène – dans les puits et incuber.

Dans le cytoplasme, le composé testé se lie à la sous-unité ribosomique 30S mycobactérienne, inhibant la synthèse normale des protéines et conduisant finalement à la mort mycobactérienne.

Après l’incubation, ajoutez de la résazurine - un colorant hydrosoluble faiblement fluorescent - aux cultures. Couver.

À l’intérieur de mycobactéries métaboliquement actives viables, les enzymes déshydrogénases réduisent la résazurine de couleur bleue en une résorufine fluorescente de couleur rose.

À l’aide d’un lecteur de plaques de fluorescence, mesurez l’intensité de fluorescence de la résorupine dans les puits.

Une faible valeur d’intensité de fluorescence avec des concentrations croissantes de composés d’essai suggère ses effets cytotoxiques contre les mycobactéries.

Pour effectuer un dosage de la résazurine, cultivez M. tuberculosis en 7H9ADST jusqu’à la phase mi-logarithmique. Diluer la culture avec du 7H9ADST à une DO₆₀₀ de 0,01. Utilisez 7H9ADST pour diluer les composés à d