Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 3:38 min • July 8th, 2025
Commencez avec un tube contenant un agent de transfection à base de lipides cationiques et ajoutez des plasmides d’expression recombinants.
Le plasmide porte un gène codant pour des anticorps recombinants ciblant la métallopeptidase et une protéine fluorescente verte ou GFP sous un promoteur, tandis que le gène de résistance aux antibiotiques est sous un autre promoteur.
Les lipides chargés positivement interagissent avec un plasmide chargé négativement, formant un complexe.
Transférez les complexes dans une plaque multi-puits contenant des cellules de mammifères, permettant au plasmide d’entrer dans le cytoplasme.
Le plasmide atteint le noyau et est transcrit en ARNm pour les protéines de résistance aux antibiotiques et en ARNm bicistroniques codant pour les anticorps recombinants et les GFP.
Ces ARNm conduisent à la production d’anticorps recombinants, de GFP et de protéines de résistance aux antibiotiques.
Après la transfection, remplacez le milieu par un milieu enrichi en sérum.
Introduire un antibiotique, éliminant sélectivement les cellules non transfectées pendant que les cellules transfectées résistantes aux antibiotiques survivent.
À l’aide de la technique de tri cellulair
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