Analyse basée sur la cytométrie en flux de l’activation des cellules dendritiques à l’aide de complexes immunitaires
Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 3:35 min • July 8th, 2025
Commencez par une suspension de cellules tumorales chimiquement fixée.
Ajoutez une concentration optimale d’immunoglobuline G liant la tumeur qui se lie aux antigènes de surface des cellules tumorales, formant des complexes immuns ou CI.
Transférez les CI dans une plaque de culture contenant des cellules dendritiques collées. Couver.
La cellule dendritique reconnaît le CI, l’internalise et le traite en fragments peptidiques.
Les fragments sont chargés sur des molécules du complexe majeur d’histocompatibilité de classe II ou CMH-II et présentés à la surface de la cellule, avec la molécule de costimulation CD86.
Retirez le support. Ajoutez un tampon de dissociation cellulaire et pipetez vigoureusement pour détacher les cellules.
Transférez les cellules dans un tube.
Centrifugez et mettez en suspension les cellules dans une solution bloquante pour bloquer les interactions non spécifiques.
Superposition avec un cocktail d’anticorps marqués au fluorophore ciblant le CMH-II et le CD86.
Ajoutez un colorant de liaison à l’ADN et incubez brièvement pour colorer les noyaux de cellules mortes.
À l’aide de la cytométrie en flux, identifiez les cellules vivantes co-exprimant le CMH-II et le CD8
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