Coloration par immunofluorescence pour la visualisation de cellules souches neurales proliférées dans des sections de cerveau de souris

Prenez des sections fixes de cerveau de souris contenant des cellules neurales, y compris des cellules souches neurales proliférantes étiquetées avec EdU, un analogue de la thymidine.

Délimitez les sections avec un marquage hydrophobe pour éviter l’étalement de la solution.

Ajoutez un détergent pour perméabiliser le tissu. Laver pour enlever l’excès de détergent.

Ajouter un fluorophore pour étiqueter l’EdU. Retirez les fluorophores en excès.

À l’aide d’un microscope à fluorescence, confirmez la coloration correcte des cellules marquées à l’EdU.

Appliquez un tampon bloquant contenant des protéines pour empêcher la liaison d’anticorps non spécifiques. Retirez l’excès de protéines.

Incuber avec des anticorps primaires qui se lient à des protéines spécifiques dans les cellules souches neurales. Retirez les anticorps non liés.

Ajoutez des anticorps secondaires conjugués aux fluorophores pour lier les anticorps primaires. Lavez les anticorps non liés.

Teindre les noyaux avec un colorant et enlever l’excédent de colorant.

Retirez le marquage hydrophobe, appliquez le support de montage et placez une lamelle.

À l’aide d’un microscope confocal, observez les coupes pour visualiser les cellule