Détermination de la rupture de la barrière hémato-encéphalique à l’aide de colorants fluorescents dans un modèle murin EAE

Commencez avec une solution contenant un colorant fluorescent vert lié à une grande chaîne de dextran. Ensuite, ajoutez une solution de colorant rouge liée à une petite chaîne de dextran.

Mélangez soigneusement les colorants et prenez-les dans une seringue.

Injectez ce mélange de colorant par voie intraveineuse dans une souris anesthésiée par le sinus rétro-orbitaire, une veine située derrière l’œil.

Cette souris souffre d’encéphalomyélite auto-immune expérimentale ou EAE.

Dans cette condition, la barrière hémato-encéphalique est perturbée par des jonctions étroites affaiblies entre les cellules endothéliales des vaisseaux sanguins du cerveau avec des lacunes.

Permettez à la souris de se réveiller complètement et de retrouver sa motilité, ce qui permet aux colorants de circuler.

Le colorant rouge avec la petite chaîne de dextran se diffuse facilement à travers les petits espaces dans le tissu cérébral, tandis que le colorant vert lié à la grande chaîne de dextran se diffuse si les dommages sont graves.

La quantité de chaque colorant fluorescent dans le tissu cérébral est corrélée à l’étendue de la perturbation de la barrière hémato-encéphalique.

Pour préparer des solutions mères de dextran, dissoudre 10 milligrammes de trois kilodaltons de Dextran Texas Red dans 500 microlitres de solution de chlorure de sodium à 0,9 % et 5 milligrammes de 10 kilodaltons de Dextran AlexaFluor 488 dans 250 microlitres de solution de chlorure de sodium à 0,9 %.

Pour la solution de travail du dextran, juste avant l’injection, pipetez 55 microlitres de la solution mère de Dextran AlexaFluor 488 de 10 kilodaltons sur un morceau de film d’étanchéité, puis ajoutez 55 microlitres de la solution mère de Dextran Texas Red de trois kilodaltons. Mélangez et collectez 100 microlitres dans une seringue fine jetable.

Ensuite, placez une souris anesthésiée en position latérale sur la table. Injectez par voie intraveineuse 100 microlitres de traceurs fluorescents dans la souris avant que celle-ci ne se réveille. Laissez circuler le traceur pendant 15 minutes.