Évaluation de la fonction motrice dans un modèle expérimental de neurite auto-immune chez la souris

Placez une souris sur un tapis roulant pour enregistrer son mouvement de course, en évaluant sa fonction motrice, qui représente la capacité de contrôler les mouvements du corps.

Après le test, injectez la toxine coquelucheuse dans la cavité abdominale de la souris anesthésiée, afin d’affaiblir sa barrière hémato-nerveuse.

Ensuite, retirez les poils entre les omoplates de la souris, désinfectez la zone et injectez des peptides imitant la myéline avec un adjuvant dans le tissu sous-cutané.

Répétez les deux injections pour des réactions optimales.

Les peptides stimulent les cellules présentatrices d’antigènes, qui migrent vers les ganglions lymphatiques et produisent des lymphocytes T autoréactifs.

Ces lymphocytes T pénètrent dans la circulation sanguine, traversent la barrière hémato-nerveuse altérée et ciblent les nerfs périphériques, entraînant la libération de cytokines.

Cela attire les macrophages et les lymphocytes B, qui libèrent des molécules effectrices qui dégradent la gaine de myéline.

La dégradation de la myéline altère la transmission du signal nerveux et l’apparition de la névrite auto-immune expérimentale ou EAN.

Enfin, répétez le test du tapis roulant. La souris montre des difficultés à courir et à coordonner les mouvements des membres, indiquant un dysfonctionnement moteur.

Trois jours avant l’induction de la maladie, allumez l’appareil d’évaluation de la fonction motrice et allumez le bouton d’éclairage. Prenez la souris et abaissez-la sur un récipient de colorant alimentaire rouge. Placez la souris dans le compartiment de marche et réglez la vitesse du tapis roulant sur 15 centimètres par seconde. Allumez le tapis roulant et cliquez sur « enregistrer » pour utiliser le système d’imagerie de la fonction de marche afin de capturer le mouvement de course de la souris pendant 36 secondes.

Après 36 secondes, arrêtez l’enregistrement et le tapis de course, puis enregistrez le fichier vidéo de la course d’entraînement dans le dossier désigné.

Un jour avant la première vaccination, utilisez une seringue de 0,5 millilitre munie d’une aiguille de calibre 30_1/2 pour administrer 1,6 microgramme par millilitre de toxine coquelucheuse dans 250 microlitres de PBS IP isotonique de souris, à des souris mâles C57 black 6 anesthésiées âgées de six à huit semaines.

Le lendemain, combinez des volumes égaux de solutions peptidiques fraîchement préparées dans une solution saline à 0,9 % et 20 milligrammes par millilitre de Mycobacterium tuberculosis dans un adjuvant de Freund complet dans un batteur à billes, et mélangez les solutions à la vitesse maximale pendant 1 minute à température ambiante.

Chargez une seringue équipée d’une aiguille de calibre 23 avec l’inoculum, puis retournez et secouez la seringue avant d’évacuer l’air à l’intérieur de la tige de la seringue.

Avant d’administrer l’inoculum, retirez les poils juste latéralement à la ligne médiane entre les omoplates et désinfectez la peau exposée avec de l’éthanol à 70 %.

Ensuite, utilisez une paire de pinces Addison pour saisir la peau et administrer 50 microlitres de la solution à la souris injectée de toxine coqueluche par injection sous-cutanée.

Le lendemain matin, administrer 1,2 microgramme par millilitre de toxine coquelucheuse dans 250 microlitres de PBS IP, comme cela vient d’être démontré, suivi d’une autre injection de 1,2 microgramme par millilitre de toxine coqueluche IP 48 heures plus tard.

Trois jours plus tard, après la troisième injection de coqueluche, administrer 50 microlitres supplémentaires d’inoculum fraîchement préparé au même site d’injection que précédemment, et surveiller le score clinique et la fonction motrice des animaux deux fois par semaine jusqu’à la fin de l’expérience.