Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 2:09 min • July 8th, 2025
Prenez des neurones fixes et perméabilisés dans un tube.
Ajoutez un tampon de blocage pour empêcher la liaison d’anticorps non spécifiques.
Centrifuger la suspension et retirer le surnageant. Ensuite, résuspendez les neurones dans le tampon.
Transférez la suspension également dans des tubes contenant des anticorps primaires non marqués et marqués au fluorophore.
Incuber, permettant aux anticorps de se lier spécifiquement à la chaîne respiratoire mitochondriale ou aux sous-unités du complexe MRC, à une protéine associée à l’ADN mitochondrial et à une protéine de la membrane externe mitochondriale dans les neurones.
Retirez tous les anticorps non liés.
Incuber avec des anticorps secondaires marqués au fluorophore qui se lient aux anticorps primaires non marqués.
Centrifugez le mélange et jetez le surnageant.
Remettez les neurones en suspension dans le tampon et transférez-les dans des tubes de microcentrifugation.
Effectuer une cytométrie en flux pour détecter les signaux fluorescents sur les neurones marqués, correspondant aux niveaux d’expression des sous-unités du complexe MRC et à la mesure des niveaux relatifs d’ADN mitochondrial.
Bloquer les échantillons dans 1 millilitre de ta
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