Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 4:53 min • May 29th, 2025
Prenez une lamelle avec une culture de neurones du mésencéphale ventral dérivé d’embryons de souris.
Les cellules sont infectées par un vecteur viral pour exprimer un indicateur calcique.
Transférez la lamelle dans la chambre d’enregistrement d’un microscope confocal perfusé avec un tampon d’enregistrement.
À l’aide de la lumière visible, identifiez une région contenant plusieurs neurones, puis passez à l’imagerie par fluorescence.
À de faibles niveaux de calcium intracellulaire, l’indicateur reste non lié, présentant une faible intensité de fluorescence.
Les propriétés intrinsèques des neurones génèrent des potentiels d’action spontanés, déclenchant l’ouverture et l’afflux de calcium.
L’excès de calcium se lie à l’indicateur, induisant un changement de conformation qui augmente l’intensité de la fluorescence.
Enregistrez l’intensité de la fluorescence au fil du temps pour suivre l’activité calcique spontanée.
Introduisez un neurotransmetteur à haute concentration, qui se lie aux récepteurs des neurones, générant des potentiels d’action continus.
L’activation soutenue du canal calcique voltage-dépendant prolonge l’afflux de calcium, provoquant une augmentation soutenue de l’intensité de la
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