Caractérisation de cellules souches mésenchymateuses génétiquement modifiées pour des applications neurothérapeutiques
Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 3:23 min • August 7th, 2025
Commencez par des cellules souches mésenchymateuses de souris transgéniques, des cellules multipotentes dérivées de la moelle osseuse.
Les cellules sont conçues pour exprimer la GFP et les facteurs neurotrophiques thérapeutiques qui soutiennent la croissance et la survie neuronales.
Lavez les cellules avec un tampon et fixez-les pour préserver l’intégrité cellulaire.
Laver à nouveau avec un tampon, puis ajouter une solution pour perméabiliser les membranes cellulaires et nucléaires et bloquer les sites de liaison non spécifiques.
Introduire des anticorps primaires ciblant une protéine marqueur de prolifération cellulaire exprimée exclusivement dans le noyau des cellules en division.
Laver avec un tampon pour éliminer les anticorps non liés.
Ajoutez des anticorps secondaires conjugués aux fluorophores ciblant les anticorps primaires et un colorant de liaison à l’ADN pour contre-colorer les noyaux.
Laver avec un tampon pour éliminer les réactifs non liés.
Chargez la plaque dans le système de criblage à haut contenu et capturez des images pour détecter les signaux fluorescents.
L’expression du marqueur de prolifération cellulaire indique une division cellulaire active, suggérant l’adéquation d
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