Étiquetage cellules souches avec Ferumoxytol, une nanoparticule approuvé par la FDA d'oxyde de fer

Dans cette technique. En science translationnelle, les cellules sont marquées à l’aide d’un super oxyde de fer super paramagnétique ultra-petit approuvé par la FDA appelé far amatol. Commencer avec des cellules souches mésenchymateuses humaines plaquées à 80 % de con fluency C, puis transfecter l’agent de contraste far amatol dans un milieu sérique libre pour marquer les cellules, continuer à récolter et dénombrer les HMC H marqués pour une utilisation expérimentale.

En fin de compte, les résultats de l’imagerie par résonance magnétique peuvent montrer un contraste négatif significatif ou un effet T deux à partir de cellules marquées U-S-P-I-O. Bienvenue au laboratoire de liaison DDR du programme d’imagerie moléculaire de Stanford. Les implications de cette technique s’étendent au suivi in vivo des implants de cellules souches par visualisation directe par imagerie IRM non invasive.

Le principal avantage de cette technique par rapport aux techniques existantes telles que le marquage avec des S PIO est que l’O-S-P-I-O est la seule nanoparticule d’oxyde de fer approuvée par FD disponible qui peut être utilisée pour le marquage cellulaire par une utilisation hors AMM dans un tube conique de 15 millilitres. Diluez l’ictal passable dans un millilitre de milieu libre sérique dans un deuxième tube, diluez le sulfate de protamine dans un millilitre de milieu exempt de sérum, équilibrez les deux solutions à température ambiante pendant cinq minutes. Combinez maintenant les solutions et laissez reposer pendant cinq minutes pour permettre la formation du complexe de sulfate de protamine U-S-P-I-O.

Ajoutez ensuite cinq millilitres de milieu sans sérum pour créer une solution de marquage de nanoparticules. Cultivez une culture confluente de cellules souches mésenchymateuses humaines qui ont été plaquées à 80 % de fluidité au moins 18 à 24 heures avant l’étiquetage. Aspirez le fluide des cellules.

Lavez délicatement les cellules avec trois millilitres de milieu sans sérum préchauffé pour éliminer les altérations potentielles de l’absorption de l’agent de contraste et de l’efficacité du marquage. Ajoutez maintenant sept millilitres de solution de marquage et placez les cellules dans un incubateur pendant quatre heures. Après quatre heures, retirez les cellules marquées de l’incubateur et ajoutez 700 microlitres de sérum de veau fœtal, puis incubez pendant 20 heures supplémentaires.

Rincez les cellules avec une solution saline tamponnée au magnésium et au phosphate sans calcium. Ajoutez ensuite deux millilitres de PREWARM, 0,05 % de trypsine, et inclinez le ballon d’avant en arrière pour vous assurer que toute la surface du ballon est couverte. Placez les cellules dans un incubateur pendant cinq minutes ou jusqu’à ce que les cellules commencent à se détacher de la plaque si nécessaire.

Confirmation de la fixation au microscope et tapotement doux sur les côtés du ballon pour faciliter le détachement de la surface cellulaire. Ajoutez maintenant quatre millilitres de milieu complet préchauffé. Rincez délicatement le ballon et transférez toute la solution Dans un tube conique de 15 millilitres, récoltez les cellules par centrifugation et lavez les granulés trois fois dans cinq millilitres de milieu.

Enfin, énumérez les cellules viables. Les cellules sont maintenant prêtes pour l’analyse. Ces IRM montrent des coupes efficaces sagittales à travers des pastilles de cellules rénales embryonnaires humaines dans des tubes einor par rapport aux témoins non marqués dans des tubes.

Une cellule souche marquée au pH amatol présente un effet d’assombrissement ou de contraste négatif significatif sur les images IRM pondérées T deux et un effet éclaircissant ou de contraste positif sur les images IRM pondérées T un. Ce marqueur à l’oxyde de fer est une sonde fonctionnelle dans plusieurs lignées de cellules souches embryonnaires. Ces courbes de dose démontrent qu’il est possible de détecter à peine 10 000 cellules marquées au farol par l’IRM pondérée T deux.

Les cellules souches marquées peuvent être différenciées avec succès en différents types de cellules ou injectées par voie intraveineuse pour une investigation in vivo. Par exemple, ces visualisations IRM indiquent que des cellules souches marquées oxit ont été injectées dans des ventricules cérébraux en miroir, comme le montrent les flèches. Lors de la tentative de cette procédure, il est important de se rappeler de rincer les cellules trois fois avec du PBS, comme le montre la vidéo, pour éliminer l’agent de contraste libre résiduel à la surface des cellules, ce qui peut conduire à une surestimation de l’effet de contraste des cellules marquées après son développement.

Cette technique ouvrira la voie aux chercheurs dans le domaine de la médecine régénérative pour explorer davantage le potentiel clinique de la greffe de cellules souches in vivo avec visualisation à long terme et suivi des cellules souches.