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DOI: 10.3791/50102-v
Rosana Rodríguez-Casuriaga1, Gustavo A. Folle2, Federico Santiñaque2, Beatriz López-Carro2, Adriana Geisinger1,3
1Departamento de Biología Molecular,Instituto de Investigaciones Biológicas Clemente Estable (IIBCE), 2Servicio de Citometría de Flujo y Clasificación Celular (SECIF),Instituto de Investigaciones Biológicas Clemente Estable, 3Sección Bioquímica, Facultad de Ciencias,Universidad de la República
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Un nouveau protocole pour la préparation mécanique des suspensions de cellules testiculaires de matériel de rongeurs, en évitant les enzymes et les détergents, est décrite. La méthode est très simple, rapide et reproductible, et rend les suspensions cellulaires de bonne qualité, qui sont adaptés pour le tri de flux et extraction de l'ARN.
Dans cette vidéo, un protocole très simple et efficace pour obtenir la suspension cellulaire du matériel d’essai à partir de rongeurs en seulement 15 minutes sera présenté. La méthode a été appliquée à des tests sur des souris, des rats, des cobayes et utilise un dispositif de méta-machine pour désagréger le tissu encapsulé. Après une filtration et une coloration, l’inion de la cellule est prête à s’écouler.
L’homogénéité des populations cellulaires est une condition préalable à l’analyse des événements biochimiques et moléculaires lors de la différenciation des GA mâles. Ainsi, l’hétérogénéité testiculaire avec plus de 30 types de cellules différents représente l’un des problèmes majeurs concernant l’étude des bases moléculaires de la spermatogenèse des mammifères. Pour cette raison, diverses méthodes ont été utilisées pour obtenir des populations de cellules testiculaires enrichies à purifiées, y compris l’illustration PU et centrifuge.
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