Evaluation de la fonction musculaire du muscle long extenseur des orteils Ex vivo Et du jambier antérieur In situ Chez la souris

L’objectif général de cette procédure est de déterminer avec précision les propriétés mécaniques des muscles des membres de la souris. Ceci est accompli en mesurant les propriétés contractiles et passives du muscle extenseur digitole long ex evo, ou en mesurant les propriétés contractiles du muscle tibial antérieur in situ, vous pouvez finalement obtenir des résultats qui permettent de mieux comprendre les changements physiologiques dans diverses maladies musculaires et si les interventions expérimentales améliorent la fonction musculaire. Cette méthode permet une évaluation complète de la propriété contractile et passive du muscle squelettique, qui sont deux aspects indissociables de la fonction mécanique du muscle squelettique nécessaire au mouvement du corps.

Par conséquent, la démonstration visuelle de la procédure de dissection musculaire est essentielle car elle nécessite beaucoup de compétences et de manipulation. De plus, le principal avantage de l’évaluation NC deux de la propriété contractile des gros muscles par rapport aux méthodes existantes comme l’AS in vitro, est que l’approche de l’institut ne perturbe pas le flux sanguin normal et l’oxygénation. Une préoccupation majeure dans l’étude de la physiologie musculaire est l’oxygénation du muscle cible.

Dans un SA in vitro pour les gros muscles, comme le TA, la diffusion de l’oxygène musculaire peut ne pas atteindre le centre du muscle. Les implications de cette technique s’étendent à la thérapie des maladies musculaires, car la mesure précise de la fonction mécanique du muscle squelettique peut également être utilisée pour évaluer la progression des maladies musculaires et déterminer l’efficacité thérapeutique de nouvelles interventions géniques, cellulaires et pharmacologiques. Toutes les procédures animales présentées ici ont été approuvées par le comité institutionnel sur les soins aux animaux.

Il s’agit d’une chirurgie de non-survie pour mettre en place le système de test musculaire pour les expériences ex vivo. Commencez par assembler le bain de tissu en fixant le tube d’oxy au bain de tissu de la chemise d’eau. Fixez le bain assemblé à l’appareil de montage musculaire et placez le robinet à pointeau dans le drainage du bain.

Raccordez la conduite de gaz et les conduites de circulation d’eau au bain. Laissez 30 degrés Celsius d’eau circuler dans la chambre de la chemise et cinq PSI de gaz s’écouler à travers le tube oxymétrique. Remplissez le bain avec le tampon de la sonnerie et équilibrez-le avec un flux de gaz régulier.

Allumez les instruments et chargez le logiciel DMC pour disséquer l’EDL, l’artère musculaire, l’artère, l’anesthésie et le placement de la souris sur un coussin chauffant. Rasez le membre postérieur et vérifiez la sédation en effectuant un pincement des orteils. Placez la souris sur la planche de dissection et décollez la peau de la jambe.

Utilisez deux épingles de couturière pour fixer le membre postérieur dans le pied et dans le muscle gracilis. Placez une lampe chauffante au-dessus de la souris pour maintenir la température corporelle centrale à 37 degrés Celsius et fusionnez en continu tous les muscles exposés avec des bagues chaudes sous un stéréomicroscope, disséquez la peau pour exposer le tendon TA distal et le ligament extenseur, et retirez doucement le fascia recouvrant le muscle TA. Coupez le ligament extenseur pour libérer le tendon TA distal.

Coupez le tendon distal TA et utilisez-le pour retirer le muscle TA avec un mince morceau de coton imbibé de tampon de ringer. Arrêtez l’hémorragie causée par la rupture du système vasculaire musculaire TA. Ensuite, à l’aide d’une suture en soie de pain, faites un double nœud carré suivi d’un nœud en boucle à la jonction tendineuse du muscle distal du muscle EDL.

Ensuite, faites une incision dans le muscle biceps fems pour exposer le tendon proximal et faites le même ensemble de nœuds à la jonction du tendon du muscle proximal. Utilisez la même ligne de suture pour faire un double nœud carré. Pour fixer le crochet du bras de levier aux nœuds proximaux ou distals.

Pour disséquer doucement le muscle EDL du membre postérieur. Tout d’abord, coupez le tendon proximal au-dessus des nœuds de suture et coupez le système vasculaire sous le muscle. Coupez ensuite le tendon distal inférieur au nœud de suture.

Couvrez le membre postérieur exposé avec un morceau de coton imbibé de ringers. Enfin, fixez le crochet au bras de levier et alignez les muscles verticalement entre les électrodes. Fixez la ligne de suture distale au poteau fixe.

Immergez le muscle dans le tampon de la sonnerie et ajustez la tension de repos à 1,0 gramme. Laissez le muscle s’équilibrer pendant au moins 10 minutes. Pour mesurer les propriétés contractiles du muscle EDL, définissez les paramètres de chacun des protocoles suivants dans le logiciel DMC présenté ici.

Pour le premier protocole, stabilisez le muscle EDL en le stimulant trois fois à 150 hertz avec un 62ème repos entre les stimulations. Pour le deuxième protocole, laissez les muscles se détendre pendant deux minutes, puis déterminez la longueur optimale ou LN en stimulant le muscle EDL à différentes tensions de repos. Utilisez le pied à coulisse numérique pour mesurer la longueur optimale du muscle entre les nœuds distaux et proximaux.

Laissez le muscle se détendre pendant deux minutes. Pour le troisième protocole, ajustez la tension de repos à L zéro et mesurez la force musculaire lors d’une stimulation à contraction unique. Déterminez la tension Twitch ou pt, le temps jusqu’au pic de tension ou TPT et le temps de relaxation à mi-temps du pt.

Laissez le muscle se détendre pendant deux minutes. Pour réaliser le quatrième protocole, ajustez la tension de repos à LN et mesurez la force musculaire testique générée à différentes fréquences de stimulation. Mesurez le P NAUGH où la force musculaire atteint la force titanesque maximale.

Mesurez le temps jusqu’au pic de tension et la moitié du temps de relaxation pour le p. naugh. Commencez le protocole cinq en laissant le muscle se détendre pendant cinq minutes, ajustez la tension de repos à L Naugh et appliquez 10 cycles de contractions excentriques avec deux minutes de repos entre les cycles. Calculez la perte de force relative du PN après chaque cycle de contraction excentrique.

Enfin, détachez le muscle EDL de l’appareil et coupez les tendons au site de suture. Déterminez le poids humide du muscle et calculez la section transversale du muscle. Pour mesurer les propriétés passives du muscle EDL, disséquez le muscle EDL controlatéral et fixez-le à l’appareil comme démontré précédemment.

Dans cette vidéo, soumettez le muscle à un protocole d’étirement en six étapes où le muscle est tendu à 160 % L zéro par incréments de 10 %. Analysez le profil de contrainte pour évaluer la propriété visqueuse de l’étirement musculaire EDL et maintenez le muscle à 10 % L zéro et mesurez le taux de relaxation du stress aux intervalles de temps suivants. Commencez par chauffer l’étage de l’animal thermocontrôlé à 37 degrés Celsius avec de l’eau circulatoire.

Allumez le et chargez le logiciel DMC. Après avoir exposé le muscle TA sur le membre postérieur de la souris anesthésiée, utilisez une suture en soie pour faire un double nœud carré autour du ligament rotulien. Faites ensuite un double nœud carré suivi d’un nœud en boucle à la jonction du tendon musculaire ou MTJ du tendon distal ta.

Utilisez la même suture pour faire une boucle d’environ 10 millimètres. Positionnez l’animal sur le ventre et exposez le muscle biceps fems. Exposez le nerf sciatique et faites un double nœud carré autour de son extrémité proximale.

Coupez le nerf au-dessus du nœud et disséquez soigneusement environ cinq millimètres de sa longueur vers le genou. N’étirez pas et n’endommagez pas le nerf. Préparez le muscle ta controlatéral comme démontré plus tôt dans cette vidéo et couvrez l’un des membres postérieurs avec un morceau de coton imbibé de tampon de ringer.

Ensuite, positionnez l’animal couché sur la plate-forme de l’animal et utilisez les lignes de suture du ligament rotulien autour de l’axe du genou pour faire un double nœud carré pour sécuriser le genou. Ensuite, après avoir épinglé les pieds sur le bloc de garde SIL, fixez la plate-forme de l’animal sur la platine thermocontrôlée et positionnez la lampe chauffante pour maintenir la température corporelle centrale de l’animal à 37 degrés Celsius. Après avoir fixé l’électrode à la plate-forme, fixez le nerf sciatique à l’électrode, puis coupez le tendon TA du membre postérieur distal découvert au nœud distal et fixez la boucle de suture au crochet du bras de levier.

Couvrez le muscle exposé des membres postérieurs avec des bagues chaudes et du coton imbibé de tampon pour enregistrer les mesures contractiles du muscle TA. Utilisez les paramètres et le protocole du logiciel DMC présentés précédemment dans cette vidéo pour le muscle EDL et utilisez le logiciel pour analyser les données. Après avoir pris des mesures du muscle TA, détachez la boucle de suture du tendon distal TA du crochet du bras de levier et mesurez les propriétés contractiles du muscle TA controlatéral comme démontré Après l’euthanasie de l’animal, retirez les muscles TA et déterminez leur poids humide.

Pour calculer l’aire de la section transversale, ce tableau montre les propriétés morphométriques du muscle EDL chez les souris normales noires 10 et déficientes en dystrophine ou MDX à l’âge de quatre à six mois. On voit ici une représentation des propriétés contractiles et passives du muscle EDL des souris noires 10 et MDX, y compris la force titanesque maximale spécifique à la force Twitch, le temps jusqu’à la tension maximale et le temps de relaxation à moitié de la force titanique maximale absolue. Le temps jusqu’au pic de tension et la moitié du temps de relaxation peuvent également être calculés à partir de la force absolue de contraction

Le profil de contrainte et le taux de relaxation du stress sont utilisés pour décrire les propriétés passives du muscle EDL. L’absence de dystrophine a un impact significatif sur les propriétés contractiles et passives du muscle EDL. Les forces spécifiques de Twitch et Titanic sont considérablement réduites dans le muscle M-D-X-E-D-L.

Par exemple, le temps jusqu’au pic de tension est nettement plus rapide tandis que le temps de demi-relaxation est nettement plus lent dans le muscle M-D-X-E-D-L. De plus, le profil de contrainte suggère que la rigidité est considérablement augmentée dans le muscle M-D-X-E-D-L. Le muscle M-D-X-E-D-L produit également une force de résistance nettement plus élevée avant d’atteindre le stress maximal, tandis que les stress post-pic diminuent beaucoup plus rapidement.

De plus, le taux de relaxation du stress était significativement plus élevé dans le muscle M-D-X-E-D-L par rapport à celui du muscle noir 10 EDL. Une fois la procédure de dissection maîtrisée, l’analyse ex vivo de la propriété contractile et passive du muscle EDL peut être réalisée en 40 minutes. Et l’évaluation in situ de la propriété contractile des deux muscles TA peut être effectuée en 60 minutes après son développement.

Cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans l’évaluation des propriétés contractiles et passives du muscle squelettique dans le domaine des maladies musculaires pour aider à déterminer l’efficacité du traitement après cette procédure. D’autres méthodes, comme l’analyse histopathologique du muscle squelettique, peuvent être effectuées afin de répondre à des questions supplémentaires. Par exemple, l’effet du traitement expérimental sur l’histopathologie du muscle squelettique.