Name: Microinjection unique cellule pour lanalyse cellulaire de communication (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 59 s
Description: Apprenez la microinjection de cellule unique avec Lucifer Yellow pour visualiser la communication cellulaire via les jonctions communicantes. Cette technique évalue le couplage intercellulaire dans les cellules vivantes.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Les auteurs dédient cet article en l’honneur du Prof. Gilberto Oliveira-Castro qui a introduit la recherche en communication intercellulaire par jonctions lacunaires au Brésil. Ces travaux ont été financés par le Capes, le CNPQ et la Faperj.

<html> 1. Préparation des cellules <ol><li> Maintenir une culture d&#39;une lignée de cellules épithéliales du thymus (IT76M1) ou d&#39;une cellule à tester dans un incubateur (37 ° C / 5% de CO 2). </li><li> Laver les cellules avec du PBS 1x (répéter cet article 3x). </li><li> Ajouter à la trypsine les cellules pendant 5 min. </li><li> Ajouter du milieu (deux fois le volume de la trypsine ajoutée à l&#39;article 1.3) avec 10% de FBS (sérum bovin fœtal) aux cellules avec de la trypsine et de centrifugation (800 g pendant 5 min). </li><li> Compter les cellules dans un hémocytomètre. </li><li> Ajuster la densité des cellules en fonction du type de cellule que les cellules doivent être en contact étroit les uns avec les autres pour permettre le couplage. Remarque: Dans notre cas, nous avons utilisé 3 x 10 5 cellules par 35 mm boîte de Pétri. </li></ol> 2. Micropipette Préparation <ol><li> Retirer la micropipette tel que spécifié à partir d&#39;une micropipette capillaire en verre (diamètre 1,5 mm) jusqu&#39;à une valeur finale de 0,2 pm de diamètre de façon à obtenir une résistance finale d&#39;environ 30 MQf &quot;&gt; 17, 18. NOTE: Alternativement, pipettes d&#39;injection peuvent être achetés. La résistance dépend de la taille des cellules, par exemple , une micro - électrode de la résistance plus élevée serait nécessaire pour les cellules acineuses pancréatiques, par exemple (100-150 MQ) 19. Un problème commun qui pourrait se produire est la précipitation de Lucifer solution jaune qui peut alors obstruer la micropipette et peut nécessiter une filtration ou centrifugation avant. Avant l&#39; injection, la micropipette doit être analysée au microscope pour détecter s&#39;il y a une obstruction ou tout autre type de perturbation 13. La micropipette peut être testé en injectant LY avec la pointe de micropipette dans une solution saline. </li></ol> 3. Test de la Micropipette <ol><li> Préparer la solution jaune Lucifer (5%) dans 150 mmol / l de LiCl et charger le micro-pipette à l&#39;aide d&#39;une seringue ou par remblaiement (mis en elle LY solution). </li><li> Placer le microtuyauterieTTE sur 35 mm boîte de Pétri avec les cellules IT76M1 sur le poste de travail de microinjection et plonger la pointe de la micropipette de verre dans le milieu cellulaire. Focus sur la micropipette et effectuer un test de teinture circulant en appliquant une impulsion. </li></ol> 4. unicellulaire jaune Lucifer microinjection <ol><li> Concentrez microscope juste au-dessus de la couche de cellules en utilisant un fi cation magni élevée (40X), puis abaissez lentement la pipette pour les cellules en utilisant le micromanipulateur. </li><li> Piquer la cellule cible lorsque la pointe est assez proche de toucher la membrane cellulaire, et d&#39;appliquer une petite impulsion hyperpolarisant pour introduire le LY dans la cellule. La tension appliquée dépendra de la charge nette de colorant pour être injecté. En variante, d&#39;autres colorants peuvent être utilisés avec cette technique, comme indiqué dans le tableau 1. Remarque: En principe, tout colorant hydrophile ayant un PM inférieur à 1KDa pourrait être utilisé. Toutefois, le taux de transfert peut varier en fonction du poids et de l&#39;hydrophilie. En outre, utransfert nspecific du colorant utilisé doit être évaluée. </li><li> Capture d&#39;images de cellules 3 min après l&#39;injection de colorant ou faire un petit film avec la microscopie de laps de temps (30 fps). NOTE: Une approche similaire pourrait être vu dans Hitomi et al (2015) 20. Afin d&#39; éviter la communication par des ponts intercellulaires (mitose incomplète), un co-injection de rhodamine dextran (de 2 à 10 kDa), qui ne passe pas à travers les jonctions lacunaires , mais passe par des ponts intercellulaires et certains types de nanotubules est recommandé comme représenté sur la figure 2 . </li></ol>

<ol><li>Bennett, M. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gap+junctions%3A+new+tools%2C+new+answers%2C+new+questions%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Gap junctions: new tools, new answers, new questions.</a> Neuron. 6 (3), 305-320 (1991).</li>
<li>Orellana, J. A., Martinez, A. D., Retamal, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gap+junction+channels+and+hemichannels+in+the+CNS%3A+Regulation+by+signaling+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Gap junction channels and hemichannels in the CNS: Regulation by signaling molecules.</a> Neuropharmacology. , (2013).</li>
<li>Peracchia, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+correlates+of+gap+junction+permeation%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Rev+Cytol%22%5BJournal%5D)">Structural correlates of gap junction permeation.</a> Int Rev Cytol. 66, 81-146 (1980).</li>
<li>Loewenstein, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Junctional+intercellular+communication+and+the+control+of+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Junctional intercellular communication and the control of growth.</a> Biochim Biophys Acta. 560 (1), 1-65 (1979).</li>
<li>Alves, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+gap+junctions+in+thymic+epithelial+cells+are+formed+by+connexin+43%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Functional gap junctions in thymic epithelial cells are formed by connexin 43.</a> Eur.J Immunol. 25 (2), 431-437 (1995).</li>
<li>Alves, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Are+there+functional+gap+junctions+or+junctional+hemichannels+in+macrophages%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Are there functional gap junctions or junctional hemichannels in macrophages?</a> Blood. 88 (1), 328-334 (1996).</li>
<li>Fonseca, P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+connexin+30.3+and+43+in+thymocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology+letters%22%5BJournal%5D)">Characterization of connexin 30.3 and 43 in thymocytes.</a> Immunology letters. 94 (1-2), 65-75 (2004).</li>
<li>Nihei, O. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulatory+effects+of+cAMP+and+PKC+activation+on+gap+junctional+intercellular+communication+among+thymic+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Modulatory effects of cAMP and PKC activation on gap junctional intercellular communication among thymic epithelial cells.</a> BMC Cell Biol. 11, 3(2010).</li>
<li>Czyz, J., Szpak, K., Madeja, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+connexins+in+prostate+cancer+promotion+and+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Urol%22%5BJournal%5D)">The role of connexins in prostate cancer promotion and progression.</a> Nat Rev Urol. 9 (5), 274-282 (2012).</li>
<li>El-Saghir, J. A., El-Habre, E. T., El-Sabban, M. E., Talhouk, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Connexins%3A+a+junctional+crossroad+to+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Connexins: a junctional crossroad to breast cancer.</a> Int J Dev Biol. 55 (7-9), 773-780 (2011).</li>
<li>Cea, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Connexin-+and+pannexin-based+channels+in+normal+skeletal+muscles+and+their+possible+role+in+muscle+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Membr+Biol%22%5BJournal%5D)">Connexin- and pannexin-based channels in normal skeletal muscles and their possible role in muscle atrophy.</a> J Membr Biol. 245 (8), 423-436 (2012).</li>
<li>Cotrina, M. L., Nedergaard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+connexins+in+demyelinating+diseases%3A+therapeutic+potential+of+glial+targets%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Brain connexins in demyelinating diseases: therapeutic potential of glial targets.</a> Brain Res. 1487, 61-68 (2012).</li>
<li>Park, H. an-A., R, S., Khanna, S. avita, Sen, C. handan K. Current Technologies in Single-Cell Microinjection and Application to Study Signal Transduction. <a target="_blank" href="NULL">Methods in Redox Signaling</a>. , Chapter 10 (2010).</li>
<li>Abbaci, M., Barberi-Heyob, M., Blondel, W., Guillemin, F., Didelon, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advantages+and+limitations+of+commonly+used+methods+to+assay+the+molecular+permeability+of+gap+junctional+intercellular+communication%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Advantages and limitations of commonly used methods to assay the molecular permeability of gap junctional intercellular communication.</a> Biotechniques. 45 (1), 33-52 (2008).</li>
<li>Stewart, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+connections+between+cells+as+revealed+by+dye-coupling+with+a+highly+fluorescent+naphthalimide+tracer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Functional connections between cells as revealed by dye-coupling with a highly fluorescent naphthalimide tracer.</a> Cell. 14 (3), 741-759 (1978).</li>
<li>Meda, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Probing+the+function+of+connexin+channels+in+primary+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Probing the function of connexin channels in primary tissues.</a> Methods. 20 (2), 232-244 (2000).</li>
<li>Klaunig, J. E., Shi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+gap+junctional+intercellular+communication%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Assessment of gap junctional intercellular communication.</a> Curr Protoc Toxicol. , Chapter 2 Unit2 17 (2009).</li>
<li>Hanani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lucifer+yellow+-+an+angel+rather+than+the+devil%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Lucifer yellow - an angel rather than the devil.</a> J Cell Mol Med. 16 (1), 22-31 (2012).</li>
<li>Orci, L., Biochemistry, C. <a target="_blank" href="https://www.semanticscholar.org/paper/Blockage-of-cell-to-cell-communication-within-Meda-Bruzzone/a0b97324cebc9eb0534d850954a20ab1c56cbf94">Blockage of Cell-to-Cell Communication within Pancreatic Acini Is Associated with Increased Basal Release of Amylase Materials and Methods Preparation of Acini.</a> Cell. 103 (August), 475-483 (1986).</li>
<li>Hitomi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+connexin+function+enhances+self-renewal+in+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Differential connexin function enhances self-renewal in glioblastoma.</a> Cell Rep. 11 (7), 1031-1042 (2015).</li>
<li>Nihei, O. K., Campos de Carvalho,, C, A., Spray, D. C., Savino, W., Alves, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+form+of+cellular+communication+among+thymic+epithelial+cells%3A+intercellular+calcium+wave+propagation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">A novel form of cellular communication among thymic epithelial cells: intercellular calcium wave propagation.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 285 (5), C1304-C1313 (2003).</li>
<li>Kanno, Y., Loewenstein, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intercellular+Diffusion%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Intercellular Diffusion.</a> Science. 143 (3609), 959-960 (1964).</li>
<li>Alves, L. A., Nihei, O. K., Fonseca, P. C., Carvalho, A. C., Savino, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gap+junction+modulation+by+extracellular+signaling+molecules%3A+the+thymus+model%5BTitle%5D)+AND+%22Braz+J+Med+Biol+Res%22%5BJournal%5D)">Gap junction modulation by extracellular signaling molecules: the thymus model.</a> Braz J Med Biol Res. 33 (4), 457-465 (2000).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont aucun conflit d’intérêts.

Afin de vérifier la présence de intercellulaire fonctionnelle jonction lacunaire, l&#39;utilisation de traceurs, qui sont membrane imperméable, bien perméable par des canaux intercellulaires sont nécessaires 16. Fluorescéine, le premier colorant fluorescent pour l&#39; observation de cellule à cellule de couplage 22 est perméable entre les membranes non jonctionnels 3 et a par conséquent été remplacé par Lucifer Yellow 15 col...

Les jonctions lacunaires sont des canaux intercellulaires qui permettent l&#39;intercommunication entre les cellules voisines 1. Cette communication relie deux ou plusieurs cellules voisines, où chacun contribue avec un connexon ou hemichannel pour former le canal intercellulaire. Dans les cellules de mammifères, l&#39;connexon est formé par six connexines, des monomères avec quatre domaines transmembranaires et un C et N terminaux dans le cytoplasme 2. Les jonctions lacunaires permettent non seulement le flux d&#39;ions, les seconds messagers et de petits metabolites, mais contribuent également à de nombreuses formes de communication cellulaire dans de nombreux processus physiologiques, tels que la transmission synaptique, la contraction du coeur, la croissance et la différenciation cellulaire 3, 4, 5, 6, 7, 8. En outre jonctions lacunaires ont été associées àde nombreuses maladies telles que le cancer 9, 10, 11 l&#39; atrophie musculaire, certaines maladies génétiques et des maladies démyélinisantes 12. Ce type de diaphonie intercellulaire peut être évaluée par plusieurs méthodes 13, 14, 15, 16. Dans cet article, nous montrons comment effectuer une microinjection seule cellule de Lucifer Jaune pour visualiser la communication cellulaire via gap-jonctions dans les cellules vivantes. Nous discutons de la façon de préparer les cellules et la micropipette, l&#39;utilisation du micromanipulateur et l&#39;injection de Lucifer colorant jaune dans une lignée de cellules épithéliales du thymus. En général, cette procédure expérimentale pourrait être analysé par la moyenne des cellules connectées à la cellule chargée avec un colorant. En outre, ce procédé pourrait être utilisé avec d&#39;autres colorants fluorescents ayant un poids moléculaire inférieur à l&#39;écartjonctions de coupure qui est d&#39;environ 1000 daltons.

<table><tbody><tr><td>Lucifer jaune</td><td>Sigma</td><td>L0259</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure de lithium</td><td>Sigma</td><td>L4408</td><td></td></tr><tr><td>PBS comprimés</td><td>Sigma&nbsp ;</td><td>P4417</td><td></td></tr><tr><td>RPMI</td><td>Sigma</td><td>R4130</td><td></td></tr><tr><td>Sérum fœtal bovin</td><td>Cultilab</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trypsin</td><td>Sigma</td><td>T4799</td><td></td></tr><tr><td>table à isolation vibratoire&nbsp ;</td><td>Newport</td><td>VH3036W-OPT</td><td>Une table isolée des vibrations est nécessaire pour protéger les expériences des vibrations et éviter d’endommager les cellules</td></tr><tr><td>Micromanipulateur</td><td>Narishige</td><td>MMO-203</td><td>Cet équipement permet des réglages précis de la micropipette, qui est nécessaire pour la micro-injection de cellules.</td></tr><tr><td>Générateur de courant&nbsp ;</td><td>Digitimer</td><td>DS2</td><td>Pour produire le flux de colorant à travers la micropipette, un courant inférieur à un nanoampère a été donné à l’aide d’un générateur de courant avec une électrode à l’intérieur de la micropipette ou d’un amplificateur doté d’un circuit de compensation de capacité (ancien électromètre) ou de fonctions d’injection de courant des nouveaux amplificateurs patch clamp, et le fil de terre immergé dans la parabole à plaques. Alternativement, le colorant peut être injecté par un micro-injecteur pneumatique, en suivant les recommandations de l’usine. &nbsp ; &nbsp ;</td></tr></tbody></table>

microinjection unique cellule pour l&#39;analyse cellulaire de communication

Single-cell Microinjection for Cell Communication Analysis

Les jonctions lacunaires sont des canaux intercellulaires qui permettent la communication des cellules voisines. Cette communication dépend de la contribution d’un hémicanal par chaque cellule voisine pour former la jonction lacunaire. Dans les cellules de mammifères, l’hémicanal est formé de six connexines, des monomères avec quatre domaines transmembranaires et une terminaison C et N dans le cytoplasme. Les jonctions lacunaires permettent l’échange d’ions, de seconds messagers et de petits métabolites. De plus, ils jouent un rôle important dans de nombreuses formes de communication cellulaire au sein de processus physiologiques tels que la transmission synaptique, la contraction cardiaque, la croissance cellulaire et la différenciation. Nous détaillons comment réaliser une micro-injection unicellulaire de Lucifer Yellow pour visualiser la communication cellulaire via les jonctions lacunaires dans les cellules vivantes. On s’attend à ce que dans les jonctions à lacune fonctionnelle, le colorant se diffuse de la cellule chargée vers les cellules connectées. C’est une technique très utile pour étudier les jonctions lacunaires car vous pouvez évaluer la diffusion de la fluorescence en temps réel. Nous discutons de la préparation des cellules et de la micropipette, de l’utilisation d’un micromanipulateur et de l’injection d’un colorant fluorescent de faible poids moléculaire dans une lignée cellulaire épithéliale.

Lignée de cellules épithéliales thymiques IT-76MI ont été utilisés pour évaluer le couplage de colorant par des jonctions lacunaires que ces cellules ont été décrites pour exprimer des jonctions lacunaires fonctionnels formés par les connexines 43 21. La figure 1 montre l'injection de jaune Lucifer lorsqu'elle est appliquée dans une cellule au-dessous de la pointe de la pipette. Au bout de quelques minutes, les cellules connectées deviennent fluorescentes (astéris...

Nous décrivons ici comment effectuer une microinjection seule cellule de Lucifer Jaune pour visualiser la communication cellulaire via gap-jonctions dans les cellules vivantes, et de fournir quelques conseils utiles. Nous nous attendons à ce que ce document aidera tout le monde à évaluer le degré de couplage cellulaire en raison de jonctions lacunaires fonctionnels. Tout ce qui est décrit ici pourrait être, en principe, adapté à d&#39;autres colorants fluorescents ayant un poids moléculaire inférieur à 1000 Daltons.

Microinjection unique cellule pour l&#39;analyse cellulaire de communication

Gap junctions are intercellular channels that allow the communication of neighboring cells. This communication depends on the contribution of a ...

Bonjour, je m’appelle Anaël. Je travaille à la Fondation Oswaldo Cruz au Laboratoire de Communication Cellulaire. Nous étudions ici les récepteurs P2 et l’injection de gap dans le contexte du système immunitaire et du foie.Aujourd’hui, je vais vous présenter la micro-injection de cellule. Les injections d’espace jouent certains rôles physiologiques comme la transmission des synapses, les contractions cardiaques, etc. Pour cette technique, on peut étudier si les injections d’espace sont fonctionnelles ou non.D’accord, voyons les composants de base de la configuration de micro-injection. Ici, nous avons le microscope à fluorescence inversée où nous verrons les cellules. Il s’agit d’une caméra CCD pour enregistrer les résultats.Nous avons ici le générateur de courant dont nous allons introduire le colorant dans la cellule. Ensuite, nous avons le support où la microélectrode est connectée. Et le micro-manipulateur qui est connecté au support et permet le mouvement de la microélectrode dans les trois axes, Z, Y et X.Avant de commencer l’expérience, nous devons fabriquer la microélectrode.Nous utilisons ce capillaire en verre borosilicate et cet équipement nommé polaire. Nous fixons ici

single-cell-microinjection-for-cell-communication-analysis

Research

Recherche

JoVE Journal

Biology

Biologie

Injection directe intranucléaire d'ADNc est une technique de transfection efficaces pour les cellules post-mitotiques. Cette méthode fournit des niveaux élevés d'expression de protéines hétérologues dans un ou plusieurs des constructions d'ADNc et la fonction des protéines permet d'être étudiée dans un environnement physiologiquement pertinents avec une variété de dosages seule cellule.

Microinjection d&#39;ADN dans intranucléaires Dissocié neurones de mammifères adultes

Medaka et le poisson-zèbre sont complémentaires pour la dissection génétique du génome des vertébrés fonctions. Ce protocole met en évidence les points clés pour réussir la microinjection dans des embryons de medaka, une technique importante pour l'analyse embryologique et génétique à l'aide medaka et le poisson zèbre dans un laboratoire.

Microinjection d&#39;embryons Medaka pour être utilisé comme un organisme modèle génétique

Nous décrivons ici un test qui utilise la puissance du micro-injection couplé à...

Analyse de la cinétique ARNm exportation nucléaire dans les cellules de mammifères par micro-injection

Dans cet article, nous décrivons une méthode simple pour la récolte des cellules isolées de rat cultures primaires de neurones et l'analyse du transcriptome en utilisant une amplification ultérieure ARNa. Cette approche est généralisable à tout type de cellule.

L&#39;analyse du transcriptome des cellules isolées

La technique CLEM a été conçu pour analyser la morphologie ultrastructurale des membranes, les organites subcellulaires, et des structures affectées par micro-injection des molécules. Cette méthode combine les techniques puissantes de micromanipulation / microinjection, microscopie confocale à fluorescence et microscopie électronique pour permettre millimètre à résolution nanométrique multi-. Cette technique se prête à une grande variété d'applications.

Lumière corrélative et microscopie électronique (CLEM) comme un outil pour visualiser des molécules et de leurs microinjecté eucaryotes Sous-cellulaires cibles

En raison de leur grande taille et de leur organisation relativement simple, les cellules nourricières de drosophile sont parfaitement adaptées aux études d’imagerie de cellules vivantes. Cette vidéo décrit une méthode de micro-injection pour l’administration de composés exogènes dans les cellules, et le protocole présenté démontre la procédure avec des sondes oligonucléotidiques fluorescentes appelées balises moléculaires (MB) utilisées pour visualiser les transcrits d’ARNm endogènes.

Micro-injection de cellules nourricières de drosophile : une méthode d’administration intracellulaire

Dans cette vidéo, nous démontrons la micro-injection robotique de polysaccharides marqués par fluorescence dans des neurones pyramidaux dans des tranches organotypiques de cerveau embryonnaire de souris à l’aide d’un auto-injecteur. L’auto-injecteur est une plate-forme robotique qui utilise des images acquises à partir d’un microscope pour l’administration précise de biomolécules d’intérêt dans des cellules uniques.

Micro-injection de cellules robotisées guidée par l’image : une technique automatisée à haut débit pour l’administration précise de polysaccharides marqués par fluorescence dans des cellules neuronales uniques dans des cultures de coupes cérébrales organotypiques

Dans cet article, nous présentons une puce microfluidique pour l'analyse d'une seule cellule. Il permet la quantification des protéines intracellulaires, des enzymes, des cofacteurs, et des seconds messagers à l'aide de dosages ou des dosages immunologiques par fluorescence.

Une puce microfluidique pour l&#39;analyse chimique polyvalente de cellules isolées

La micro-injection est une technique couramment utilisée pour fournir des constructions d'ADN, ARNm, des oligonucléotides morpholino antisens ou d'autres traitements dans les œufs, les embryons et les cellules de diverses espèces.

À haut débit microinjections oursins zygotes

Les auteurs décrivent comment les techniques micro - et photomanipulation comme FRAP et photoactivation permettent la détermination des paramètres de la motilité et la dynamique spatio-temporelle des protéines au sein de la migration des cellules. Afficheurs expérimentales incluent dynamique subcellulaire et chiffre d’affaires de régulateurs de la motilité ou du cytosquelette d’actine sous-jacent.

Techniques de micromanipulation permettant l’analyse de la dynamique morphogénétique et chiffre d’affaires des organismes de réglementation du cytosquelette

Ce protocole démontre l’utilisation d’une plate-forme robotique pour la microinjection en cellules souches neurales simples et neurones en tranches de cerveau. Cette technique est polyvalente et offre une méthode de suivi des cellules dans les tissus à haute résolution spatiale.

Manipulation de cellules souches neurales et de neurones dans les tranches de cerveau à l’aide de microinjection robotique

Apprenez la microinjection de cellule unique avec Lucifer Yellow pour visualiser la communication cellulaire via les jonctions communicantes. Cette technique évalue le couplage intercellulaire dans les cellules vivantes.

Microinjection unique cellule pour l'analyse cellulaire de communication

Explorer plus de vidéos