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DOI: 10.3791/51150-v
Vladimir A. Volkov1,2, Anatoly V. Zaytsev3, Ekaterina L. Grishchuk3
1Center for Theoretical Problems of Physicochemical Pharmacology,Russian Academy of Sciences, 2Federal Research Center of Pediatric Hematology, Oncology and Immunology, Moscow, Russia, 3Physiology Department, Perelman School of Medicine,University of Pennsylvania
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This study investigates the dynamics of protein molecules and protein-coated beads interacting with depolymerizing microtubules. By utilizing segmented microtubules with photoablatable stabilizing caps, researchers can control the depolymerization process with high precision.
Les microtubules sont des polymères intrinsèquement instables, et leur commutation entre la croissance et de raccourcissement est stochastique et difficile à contrôler. Nous décrivons ici les protocoles à l'aide de microtubules segmentés avec des bouchons de stabilisation photoablatable. Dépolymérisation des microtubules segmentées peut être déclenchée avec une résolution temporelle et spatiale, aidant ainsi l'analyse de mouvements avec les extrémités des microtubules démontage.
L’objectif général de l’expérience suivante est d’étudier les mouvements des molécules de protéines et des billes enrobées de protéines avec les extrémités des microtubules en dépolymérisation. Ceci est réalisé en assemblant une chambre d’écoulement réutilisable avec une lamelle de couverture de taille propre. Ensuite, les graines de microtubules sont préparées attachées à la lamelle et utilisées pour nucléer les microtubules, qui sont ensuite stabilisés temporairement avec des capuchons photodestructibles.
Ensuite, des protéines marquées à la GFP ou des billes enrobées de protéines sont introduites dans la chambre d’écoulement et se lient à des microtubules segmentés. La dépolymérisation de la micro-baignoire est ensuite déclenchée par le retrait des bouchons par photo-ablation. Les images sont analysées avec CH pour déterminer si les protéines marquées présentent un comportement de suivi des pointes, c’est-à-dire un mouvement avec les extrémités des microtubules en dépolymérisation.
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