Méthode pour l'obtention de cellules cancéreuses ovariennes primaires à partir d'échantillons solides
4 février 2014
Cette étude décrit un procédé détaillé pour l'isolement et la caractérisation de cellules de cancer ovarien primaire à partir de spécimens cliniques solides. Spécimens cliniques sur le cancer de l'ovaire sont soumis à une digestion enzymatique pour obtenir viable, libre fibroblastes cancer épithélial de l'ovaire (COE) de cellules très approprié pour des applications en aval.
L’objectif global de cette procédure est d’isoler et de caractériser les cellules cancéreuses primaires de l’ovaire à partir d’échantillons cliniques solides. Ceci est accompli en collectant d’abord l’échantillon de tumeur ovarienne et en le plaçant dans une boîte de Pétri. La deuxième étape consiste à couper l’échantillon en morceaux et à transférer les morceaux dans un tube conique avec des réactifs de digestion pour l’incubation.
Ensuite, la suspension cellulaire est passée à travers un filtre où seules les cellules sont collectées Pour la centrifugation, l’étape finale consiste à jeter le surnageant et à remettre les cellules en suspension dans un milieu pour l’incubation pendant la nuit. En fin de compte, les cellules épithéliales du cancer de l’ovaire se développeront en culture pendant des semaines, ce qui permet des applications en aval. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine du cancer de l’ovaire, telles que la meilleure option de traitement pour chaque patiente.
Les implications de cette technique s’étendent au traitement du cancer de l’ovaire, car elle nous permet d’utiliser des cultures cellulaires plus réalistes, qui sont très sensibles à la manipulation génétique et sont plus utiles pour les tests de dépistage de médicaments. Pour commencer, complétez 500 millilitres de delcos, aigles modifiés, moyens ou DMEM avec 10 % de sérum bovin fœtal ou FBS et 1 % de pénicilline, streptomycine ou ps. Conservez le fluide à quatre degrés Celsius.
Prélever l’échantillon dans la salle d’opération et le transporter sur de la glace jusqu’au laboratoire, toujours à l’intérieur du conteneur transporté. Placez l’échantillon dans une hotte de sécurité biologique. Transférez l’échantillon d’un tube conique de 50 millilitres sur une boîte de Pétri de 60 millimètres sur 60 millimètres contenant 10 millilitres de PBS frais et glacé.
Ensuite, à l’aide d’une lame de rasoir stérile, coupez l’échantillon en morceaux de deux millimètres ou moins. Traitez ensuite le DMEM avec un tube de pâte à disque dans un tube conique de 15 litres. Transférez les tissus hachés dans le tube de mélange DMEM dispa two.
Ensuite, incubez l’échantillon à 5 % de dioxyde de carbone et 37 degrés Celsius pendant 30 minutes. Agitez manuellement la suspension cellulaire toutes les cinq minutes pour assurer une digestion optimale. Après l’incubation, transférez la boue cellulaire à travers une crépine à mailles de 70 micromètres placée sur un tube conique de 50 millilitres.
Appliquez doucement une pression contre le treillis à l’aide d’un piston de seringue, jetez tout tissu non associé restant sur le dessus du treillis et recueillez la suspension cellulaire obtenue dans le tube conique stérile de 50 millilitres. Ensuite, centrifugez. Le tube conique à 320 fois G pendant sept minutes à quatre degrés Celsius.
Jetez le surnageant et remettez en suspension la pastille cellulaire dans 10 millilitres de DMEM contenant 10 % de FBS et 1 % de ps. Transférez ensuite la suspension cellulaire dans une boîte de Pétri et incubez la suspension à 5 % de dioxyde de carbone et 37 degrés Celsius. Changez le milieu 24 heures après le placage initial pour éliminer les débris cellulaires et la majorité des érythrocytes présents dans la culture.
Enfin, changez le milieu tous les trois jours pendant les deux semaines suivantes, après quoi les cultures des cellules EOC primaires sont prêtes pour les applications en aval. Immédiatement après le placage. Les cellules épithéliales du cancer de l’ovaire ou cellules EOC apparaissent sous forme de suspensions unicellulaires et en amas avec des érythrocytes et les débris cellulaires abondent.
La culture de cellules EOC trois jours après le placage montre des amas de cellules EOC semi-adhérents et moins de contamination par les érythrocytes. Une semaine après le placage initial, la culture cellulaire EOC devient un tourbillon comme un amas de cellules se répandant sur le plastique de culture tissulaire. La morphologie typique des galets épithéliaux peut être observée dans une monocouche confluente de cellules EOC après 14 jours de culture.
Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’isoler et de caractériser les cellules cancéreuses primaires de l’ovaire à partir d’échantillons cliniques solides.
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Aperçu
Cette étude décrit une méthode détaillée pour l'isolement et la caractérisation de cellules cancéreuses ovariennes primaires à partir de prélèvements cliniques solides. La procédure permet la culture de cellules cancéreuses de l'épithélium ovarien, facilitant ainsi les applications en aval.
Composantes clés de l'étude
Domaine scientifique
- Oncologie
- Biologie cellulaire
- Recherche clinique
Contexte
- Le cancer de l'ovaire est un problème de santé important, avec des options de traitement complexes.
- L'isolement de cellules cancéreuses viables est essentiel pour la médecine personnalisée.
- Les méthodes actuelles peuvent ne pas permettre d'obtenir des cellules épithéliales pures de cancer de l'ovaire.
- Cette étude vise à améliorer le processus d'isolement afin d'obtenir de meilleurs résultats en recherche.
Objectif de l'étude
- Isoler des cellules cancéreuses ovariennes primaires à partir de prélèvements cliniques.
- Caractériser les cellules isolées en vue d'applications ultérieures.
- Approfondir la compréhension des options thérapeutiques pour les patientes atteintes d'un cancer de l'ovaire.
Méthodes utilisées
- Prélèvement d'échantillons de tumeurs ovariennes.
- Digestion enzymatique des échantillons de tissu.
- Filtration pour isoler les cellules viables.
- Centrifugation et resuspension dans un milieu de culture.
Résultats principaux
- Isolation réussie de cellules cancéreuses épithéliales ovariennes sans fibroblastes.
- Les cellules peuvent être cultivées pendant des semaines, permettant une étude approfondie.
- La méthode fournit une source fiable de cellules cancéreuses pour la recherche.
- Potentiel pour orienter des stratégies de traitement personnalisées.
Conclusions
- La méthode décrite est efficace pour isoler les cellules cancéreuses ovariennes.
- Elle soutient des recherches ultérieures sur les traitements du cancer de l'ovaire.
- Des études futures pourront s'appuyer sur cette méthode afin d'améliorer les résultats chez les patientes.
Questions fréquemment posées
Pertinence industrielle pour les cadres
L'établissement de cellules cancéreuses ovariennes primaires à partir de prélèvements cliniques solides permet de créer des modèles pertinents pour le patient, réduisant ainsi la dépendance aux lignées cellulaires passagées, qui accumulent des artefacts génétiques. Cette approche favorise une détection mécanistique des risques lors de la validation de cibles en préservant l'hétérogénéité tumorale et la biologie spécifique au site d'origine, qu'il s'agisse de lésions primaires ou métastatiques. Les cultures obtenues fournissent une source renouvelable pour les criblages en aval, améliorant la fiabilité prédictive des décisions précliniques.
Applications stratégiques en recherche et développement biopharmaceutique
Début de la découverte et validation de la cible
- Valeur scientifique : Permet d'interroger des hypothèses thérapeutiques en utilisant des cellules reflétant le profil génétique et phénotypique de l'échantillon clinique d'origine.
- Valeur opérationnelle : Réduit l'ambiguïté mécanistique en évitant les artefacts associés aux lignées cellulaires passagées sur le long terme.
- Valeur prédictive : Facilite le tri du portefeuille grâce à une validation ciblée débarrassée des risques biologiques dans un système pertinent pour la maladie.
Développement de criblages et de tests
- Valeur scientifique : Produit des cellules de cancer épithélial de l'ovaire adaptées au criblage pharmacologique tout en conservant leurs propriétés tumorigènes.
- Valeur opérationnelle : Fournit des suspensions cellulaires standardisées et reproductibles après digestion enzymatique et filtration.
- Extensibilité : Permet la préparation de plusieurs cultures primaires à partir d'échantillons variés pour des tests d'essais parallèles.
Recherche translationnelle et préclinique
- Continuité translationnelle : Fait le lien entre la découverte et les travaux précliniques en utilisant des cellules dérivées directement d'échantillons de patients.
- Alignement sur les biomarqueurs : Permet l'évaluation des cibles et des biomarqueurs dans un contexte reflétant le tumeur du patient.
- Progression adaptée au risque : Guide les décisions d'aller ou de ne pas aller plus loin en se basant sur les réponses observées dans les cellules primaires, qui prédisent mieux les résultats cliniques.
Intégration des pipelines et des flux de travail
La méthode s'inscrit dans le continuum de découverte allant de la biologie précoce à l'identification de composés d'intérêt, en fournissant des cellules primaires qui renforcent la pertinence des criblages et des efforts de validation en aval.
- Biologie de la découverte : Facilite la vérification d'hypothèses et la clarification des voies biologiques à l'aide de cellules conservant des caractéristiques spécifiques aux tumeurs.
- Écrans de sélection : Fournit des cellules cancéreuses épithéliales ovariennes primaires prêtes à être utilisées dans des tests, présentant une croissance et une morphologie quantifiables pour l'évaluation de composés.
- Analytique : Permet de mesurer la réponse aux médicaments, la prolifération et les changements phénotypiques dans un système génétiquement stable et à faible nombre de passages.
- Recherche translationnelle : Préserve la pertinence clinique grâce à une obtention directe à partir de prélèvements, soutenant ainsi la validation de biomarqueurs et de cibles thérapeutiques.
- Réutilisation en milieu professionnel : Met en place une plateforme réutilisable pour générer des cultures primaires à partir de divers prélèvements, réduisant la dépendance aux lignées cellulaires limitées.
Impact opérationnel et organisationnel
- Valeur scientifique : Accroît la confiance prédictive en utilisant des cellules qui reflètent l'hétérogénéité et la biologie de la tumeur d'origine.
- Valeur opérationnelle : Garantit la reproductibilité grâce à des étapes standardisées de digestion enzymatique, de filtration et d'initiation de la culture.
- Valeur stratégique : Améliore l'efficacité du capital en réduisant le risque d'échec en phase avancée par une meilleure validation préclinique des cibles.
- Impact sur le portefeuille : Permet une priorisation ajustée au risque des candidats selon leur activité dans des cellules primaires issues de patients.
Considérations relatives à la mise en œuvre
- Nécessite une expertise en manipulation stérile des tissus, en digestion enzymatique et en techniques de culture cellulaire primaire.
- Dépend de l'accès à des prélèvements tumoraux ovariens frais ou correctement conservés, recueillis en conditions stériles.
- Exige du matériel de centrifugation, de filtration et de culture, incluant des hottes de sécurité biologique et des incubateurs à CO2.
- Implique l'optimisation du temps de digestion et de la dissociation mécanique afin de maximiser le rendement en cellules épithéliales tout en minimisant la contamination par des fibroblastes.
- Est limité par la disponibilité et la viabilité des échantillons, qui peuvent varier selon le moment de l'intervention chirurgicale et les conditions de transport.
