Méthode pour l'obtention de cellules cancéreuses ovariennes primaires à partir d'échantillons solides

Cette étude décrit un procédé détaillé pour l'isolement et la caractérisation de cellules de cancer ovarien primaire à partir de spécimens cliniques solides. Spécimens cliniques sur le cancer de l'ovaire sont soumis à une digestion enzymatique pour obtenir viable, libre fibroblastes cancer épithélial de l'ovaire (COE) de cellules très approprié pour des applications en aval.

L’objectif global de cette procédure est d’isoler et de caractériser les cellules cancéreuses primaires de l’ovaire à partir d’échantillons cliniques solides. Ceci est accompli en collectant d’abord l’échantillon de tumeur ovarienne et en le plaçant dans une boîte de Pétri. La deuxième étape consiste à couper l’échantillon en morceaux et à transférer les morceaux dans un tube conique avec des réactifs de digestion pour l’incubation.

Ensuite, la suspension cellulaire est passée à travers un filtre où seules les cellules sont collectées Pour la centrifugation, l’étape finale consiste à jeter le surnageant et à remettre les cellules en suspension dans un milieu pour l’incubation pendant la nuit. En fin de compte, les cellules épithéliales du cancer de l’ovaire se développeront en culture pendant des semaines, ce qui permet des applications en aval. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine du cancer de l’ovaire, telles que la meilleure option de traitement pour chaque patiente.

Les implications de cette technique s’étendent au traitement du cancer de l’ovaire, car elle nous permet d’utiliser des cultures cellulaires plus réalistes, qui sont très sensibles à la manipulation génétique et sont plus utiles pour les tests de dépistage de médicaments. Pour commencer, complétez 500 millilitres de delcos, aigles modifiés, moyens ou DMEM avec 10 % de sérum bovin fœtal ou FBS et 1 % de pénicilline, streptomycine ou ps. Conservez le fluide à quatre degrés Celsius.

Prélever l’échantillon dans la salle d’opération et le transporter sur de la glace jusqu’au laboratoire, toujours à l’intérieur du conteneur transporté. Placez l’échantillon dans une hotte de sécurité biologique. Transférez l’échantillon d’un tube conique de 50 millilitres sur une boîte de Pétri de 60 millimètres sur 60 millimètres contenant 10 millilitres de PBS frais et glacé.

Ensuite, à l’aide d’une lame de rasoir stérile, coupez l’échantillon en morceaux de deux millimètres ou moins. Traitez ensuite le DMEM avec un tube de pâte à disque dans un tube conique de 15 litres. Transférez les tissus hachés dans le tube de mélange DMEM dispa two.

Ensuite, incubez l’échantillon à 5 % de dioxyde de carbone et 37 degrés Celsius pendant 30 minutes. Agitez manuellement la suspension cellulaire toutes les cinq minutes pour assurer une digestion optimale. Après l’incubation, transférez la boue cellulaire à travers une crépine à mailles de 70 micromètres placée sur un tube conique de 50 millilitres.

Appliquez doucement une pression contre le treillis à l’aide d’un piston de seringue, jetez tout tissu non associé restant sur le dessus du treillis et recueillez la suspension cellulaire obtenue dans le tube conique stérile de 50 millilitres. Ensuite, centrifugez. Le tube conique à 320 fois G pendant sept minutes à quatre degrés Celsius.

Jetez le surnageant et remettez en suspension la pastille cellulaire dans 10 millilitres de DMEM contenant 10 % de FBS et 1 % de ps. Transférez ensuite la suspension cellulaire dans une boîte de Pétri et incubez la suspension à 5 % de dioxyde de carbone et 37 degrés Celsius. Changez le milieu 24 heures après le placage initial pour éliminer les débris cellulaires et la majorité des érythrocytes présents dans la culture.

Enfin, changez le milieu tous les trois jours pendant les deux semaines suivantes, après quoi les cultures des cellules EOC primaires sont prêtes pour les applications en aval. Immédiatement après le placage. Les cellules épithéliales du cancer de l’ovaire ou cellules EOC apparaissent sous forme de suspensions unicellulaires et en amas avec des érythrocytes et les débris cellulaires abondent.

La culture de cellules EOC trois jours après le placage montre des amas de cellules EOC semi-adhérents et moins de contamination par les érythrocytes. Une semaine après le placage initial, la culture cellulaire EOC devient un tourbillon comme un amas de cellules se répandant sur le plastique de culture tissulaire. La morphologie typique des galets épithéliaux peut être observée dans une monocouche confluente de cellules EOC après 14 jours de culture.

Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’isoler et de caractériser les cellules cancéreuses primaires de l’ovaire à partir d’échantillons cliniques solides.